Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 3

Bolsista: YARA ARRUDA SOUSA
Orientador(a): BERNARDO RODRIGUES TEIXEIRA
Resumo: Os mammarenavírus (Arenaviridae: Hareavirales), causadores das Febres Hemorrágicas Americanas (FHA), são vírus transmitidos ao homem por inalação de aerossóis provenientes de excretas de roedores silvestres, principalmente em áreas de interface entre o ambiente silvestre e rural/peri-domiciliar. No Brasil os mammarenavírus foram detectados em roedores de diferentes biomas brasileiros, sendo quatro espécies de mammarenavírus na Amazônia, quatro no Cerrado e dois na Mata Atlântica, sendo um deles o vírus Sabiá, único relacionado até o momento a doença humana (Febre Hemorrágica Brasileira). Este projeto tem como objetivo investigar a circulação de mammarenavírus em roedores silvestres provenientes de áreas de Mata Atlântica no estado do Rio de Janeiro, região sem informações sobre sua circulação. Para isso foi realizado diagnóstico sorológico para detecção de mammarenavírus em um banco de amostras já coletadas no município de Volta Redonda e identificação taxonômica de roedores potencialmente hospedeiros coletados em novas áreas do município de Nova Friburgo. Parte das amostras coletadas nessas novas áreas também foram analisadas por sorologia. As análises sorológicas foram realizadas através de ensaios imunoenzimáticos (EIA) utilizando o antígeno inativado do vírus Junín XJC13 (Mammarenavirus juninense) e a identificação taxonômica dos roedores foi realizada através de análises morfológicas, citogenéticas e moleculares. Um total de 43 amostras de 6 espécies foram analisadas, entretanto todas foram não reativas para mammarenavírus. Em relação às novas áreas de amostragem, foi realizada uma coleta de roedores na localidade São Lourenço (Fazenda Campreste) em Nova Friburgo, totalizando 24 pequenos mamíferos (roedores e marsupiais) coletados, pertencentes a 5 espécies de roedores e uma de marsupial. Todas as espécies encontradas são de ocorrência esperada para a região. Considerando a escassez de informações sobre roedores hospedeiros de mammarenavírus no estado do Rio de Janeiro e visando realizar uma triagem inicial de amostras que possam direcionar espécies ou localidades-alvo, as primeiras análises foram conduzidas por meio de testes sorológicos. Essa abordagem permite uma avaliação preliminar da circulação viral e auxilia na definição de estratégias para investigações futuras. Como perspectivas para o segundo ano de vigência da bolsa, serão realizadas análises moleculares para identificar a presença de mammarenavírus nas amostras coletadas, além da realização de novas coletas em outras áreas do estado, como Valença, Barra do Pirai, Rio Claro e Guapimirim. O conhecimento gerado neste projeto pode servir de subsídio e ter aplicabilidade no sistema de vigilância ambiental em saúde na região, auxiliando as secretarias de saúde locais em ações preventivas.

Bolsista: EVERTON RODRIGUES DE SOUZA
Orientador(a): FERNANDA DE BRUYCKER NOGUEIRA
Resumo: O vírus Chikungunya (CHIKV) é um arbovírus causador de uma doença febril aguda caracterizada por grave e debilitante poliartralgia. O período de incubação do CHIKV varia de um a 12 dias, e é seguido por febre alta, exantema, mialgia, dores de cabeça e artralgia. A artralgia é geralmente simétrico e, quase sempre, afeta mais de uma articulação. Além do quadro clínico típico do CHIKV, manifestações atípicas como complicações neurológicas foram relatadas. Nestes casos, o espectro clínico entre adultos e as crianças têm sido semelhantes. Manifestações neurológicas secundárias foram relatadas em infecção por CHIKV, sendo a encefalite a apresentação neurológica mais comum. Complicações neurológicas descritas nas recentes epidemias incluem: meningoencefalite, meningoencefalografiamielorradiculite, mielite, mieloneuropatia, Síndrome de Guillain-Barre (GBS), oftalmoplegia externa, paralisia facial, surdez e neurite óptica. Sabe-se que o CHIKV possui três genótipos distintos - Oeste Africano, Asiático e o Leste Centro Sul Africano (ECSA) e uma linhagem descendente do genótipo ECSA - Linhagem Oceano Índico IOL. Neste último, uma mutação no genoma permitiu a adaptação desta variante genotípica ao vetor Aedes albopictus, o que favoreceu a sua disseminação. Estudos filogenéticos no Brasil mais recentes têm demonstrado a presença dos genótipos Asiático e ECSA, introduzidos no país quase simultaneamente a partir das regiões norte e nordeste, respectivamente. No estado do Rio de Janeiro foi identificado o genótipo Asiático em casos importados em 2014 e 2015, porém a circulação do genótipo ECSA em casos autóctones foi descrita a partir do ano de 2016. O reconhecimento dos genótipos circulantes, possíveis variantes genotípicas e mutações no genoma viral, possui grande relevância no monitoramento de possíveis cepas mais virulentas, podendo auxiliar na adoção das medidas de controle. Constitui também um componente essencial para o entendimento da epidemiologia da doença, caracterizando fatores que levam à transmissão e dispersão viral. Desta forma, além da detecção dos vírus no país, há necessidade de se reconhecer quais cepas virais estão circulando, através de estudos de caracterização molecular e filogenia. Neste estudo, tínhamos o objetivo de realizar a caracterização molecular e genotipagem dos CHIKV de pacientes com manifestações neurológicas, comparando-os às cepas encontradas em pacientes sem manifestações neurológicas, almejando identificar possíveis mutações que poderiam estar associadas às diferentes manifestações clínicas dos pacientes, podendo atuar como marcadores moleculares de gravidade neurológica. Porém, ao longo do ano de 2024 e até o momento, em 2025, todas as amostras recebidas apresentando algum quadro neurológico resultaram em diagnóstico negativo para CHIKV, impossibilitando a continuidade do estudo no momento. Com isso, realizamos o sequenciamento nucleotídico das amostras positivas para CHIKV no diagnóstico molecular por RT-qPCR com o objetivo de apoiar o monitoramento genômico na identificação do genótipo circulante no país, independente das manifestações clínicas dos pacientes.

Bolsista: MANUELLE CAVALCANTE DO NASCIMENTO
Orientador(a): Stefanie Costa Pinto Lopes
Resumo: As bactérias são microrganismos que podem ser patogênicos ao homem, sendo responsáveis por inúmeras infecções oportunistas no âmbito hospitalar. Esse cenário torna-se ainda mais desafiador quando se trata de bactérias consideradas de importância clínica pela Organização Mundial da Saúde (OMS), como Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli e Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA). Essas cepas têm demonstrado crescente resistência a antibióticos de amplo espectro, configurando uma ameaça significativa à saúde pública e reforçando a urgência na busca por novas substâncias capazes de controlar sua disseminação. Nesse contexto, semicondutores à base de prata (Ag) vêm sendo amplamente investigados, com destaque para o molibdato de prata (AgMoO). O presente projeto tem como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana de molibdato de prata (Ag2MoO4), frente às bactérias P. aeruginosa, E. coli, S. aureus (MRSA) e sua atividade citotóxica em célula humana MRC-5. A atividade antibacteriana foi avaliada pelos métodos de difusão em ágar, concentração inibitória mínima (MIC) e ação microbicida e microbiostático. A viabilidade e citoxicidade do Ag2MoO4 foi avaliada frente a linhagem MRC-5. Na análise dos resultados, a melhor atividade antibacteriana foi obtida frente à cepa de EIEC, com média de halo de 23 ± 0,55 mm, seguida pela cepa de E. coli não diarreiogênica, com média de halo de 18 ± 0,55 mm. As demais cepas apresentaram média de halos de 17 ± 0,55 mm. No ensaio de MIC, os melhores resultados foram com as cepas EHEC, EIEC e P. aeruginosa, com MICs de 125 µg/mL. No ensaio de atividade microbicida e microbiostática, o AgMoO demonstrou efeito microbicida frente às cepas EHEC, EIEC e Pseudomonas aeruginosa, eliminando completamente as bactérias em até 2 horas. Nos ensaios de viabilidade, a substância foi altamente citotóxica nas concentrações de 125 a 1000µg/mL. A partir de 62,5µg/mL, a viabilidade ultrapassou 85%, alcançando 100% na menor concentração testada (0,48µg/mL). Os resultados destacam o potencial da substância frente a cepas clinicamente relevantes, como P. aeruginosa e E. coli, reforçando sua importância na busca por novas drogas.Palavra-chave: Nanopartícula, antimicrobiano, resistência, Bactérias Gram-negativa, Gram-positiva, viabilidade celular.

Bolsista: MARIANE ALBUQUERQUE SENA
Orientador(a): Mônica Maria Crespo Costa
Resumo: INTRODUÇÃO/JUSTIFICATIVA: o Zika (ZIKV) é um arbovírus da família Flaviviridae, que desencadeou graves problemas de saúde pública, sobretudo no Brasil, quando, em 2015, a infecção materna por esse vírus foi associada à microcefalia em recém-nascidos. Espécies de Aedes são incriminadas como vetores primários, contudo, o Culex quinquefasciatus é considerado um potencial vetor desse arbovírus, pois, além de ser competente para transmitir outros flavivírus neurotróficos, é altamente abundante e antropofílico. Estudos voltados à avaliação de aspectos da capacidade vetorial e dos processos moleculares de interação vetor-parasito são escassos na literatura, especialmente envolvendo Culex quinquefasciatus e ZIKV. OBJETIVOS: avaliar a fecundidade, fertilidade, busca por fonte sanguínea, taxa de transmissão vertical e o padrão de expressão de genes relacionados ao sistema imune de fêmeas de Cx. quinquefasciatus expostas ao ZIKV, e em seus descendentes. METODOLOGIA: Os experimentos foram realizados com a linhagem ZIKV BRPE243/2015, cedida pelo Laboratório de Virologia e Terapia Experimental (LAVITE) do IAM. Os mosquitos foram das colônias de Cx. quinquefasciatus, CqSLab, fundada em 2011, originária da Região Metropolitana do Recife, e de uma colônia de campo, coletada no bairro da Iputinga, Recife-PE. Ambas mantidas no insetário do Dept. de Entomologia do IAM. Os mosquitos foram expostos ao ZIKV através de alimentação oral artificial, no infectório do IAM obedecendo-se as normas de biossegurança. Após 1 (uma) hora de exposição, fêmeas de cada grupo foram transferidas para gaiolas individuais, com recipientes de postura para obtenção dos ovos. Estes foram contados e colocados para eclosão das larvas, a fim de determinar a fecundidade e fertilidade. As larvas que eclodiram foram contadas e colocadas em cubas de criação para a obtenção de mosquitos da geração subsequente (F1) e posterior avaliação da transmissão vertical, busca por fonte sanguínea, fecundidade e fertilidade desses descendentes. No 14º dia pós infecção (dpe), as fêmeas foram coletadas e armazenadas a -80°C, para extração de RNA e posterior confirmação da infecção por qRT-PCR e avaliação do perfil de expressão de genes específicos relacionados a resposta imune inata à infecção viral. Testes estatísticos pertinentes aos resultados obtidos foram aplicados. RESULTADOS PARCIAIS: A exposição ao ZIKV não alterou os parâmetros reprodutivos (fecundidade e fertilidade) entre as fêmeas expostas, nem na geração F1, sob as condições testadas. A busca por fonte sanguínea também não foi afetada entre as descendentes (F1), oriundas de fêmeas expostas ao ZIKV, sugerindo ausência de efeitos transgeracionais sobre esse parâmetro. O ZIKV é transmitido verticalmente em Cx. quinquefasciatus e as fêmeas são a maioria entre os descendentes infectados, nas condições e com linhagens estudadas neste trabalho. Com relação ao perfil de expressão gênica, os experimentos já foram realizados e, no momento, o estudo encontra-se em fase de seleção dos genes a serem avaliados.

Bolsista: CLARA DA SILVA BARBOSA
Orientador(a): ANNIELLE MENDES BRITO DA SILVA
Resumo: O câncer é um dos maiores desafios de saúde pública global, sendo a segunda principal causa de morte em todo o mundo. Tumores de difícil prognóstico, como os gliomas e glioblastomas que afetam o sistema nervoso central (SNC), destacam-se pela sua complexidade e resistência aos tratamentos convencionais, como cirurgia, radioterapia e quimioterapia. Apesar dos avanços na pesquisa, esses métodos enfrentam limitações significativas, incluindo efeitos colaterais graves e baixa eficácia diante de tumores de alto grau de malignidade.A nanotecnologia surge como uma abordagem promissora para superar esses desafios. Os pontos quânticos de grafeno (GOQD ou GQD), nanopartículas à base de grafeno com propriedades ópticas e elétricas únicas, têm sido explorados na terapia anticâncer.O presente projeto busca, por meio de ensaios in vitro, desenvolver e analisar a interação de nanocompostos carbonáceos com células tumorais, visando aprimorar sistemas de entrega de medicamentos e investigar seu papel na terapia fotodinâmica. Os objetivos incluem a síntese de materiais híbridos, o desenvolvimento de nanoplataformas para otimizar o transporte de fármacos e estudos detalhados sobre citotoxicidade e morte celular.Os resultados mostram que os GOQD sintetizados possuem aproximadamente 40 nm de diâmetro e formato semelhante ao de uma folha. Essas nanopartículas demonstraram estabilidade em soluções fisiológicas e potencial de emissão de luz em comprimentos de onda específicos, o que as torna úteis em aplicações como tratamento de doenças. Nos ensaios, três linhagens celulares foram utilizadas: J774.G8 (macrofágica), GL261 (glioma murino) e Glioma1 (glioma humano primário). Observou-se que, para as células J774.G8, os GOQD ligados ao boro (B-GOQD) apresentaram maior potencial citotóxico, enquanto nas linhagens de glioma testadas, nenhum GOQD alterou significativamente a viabilidade celular, possivelmente devido à composição bioquímica dessas células.O estudo conclui que os GOQD sintetizados são biocompatíveis e não possuem atividade citotóxica relevante contra as células testadas. Isso destaca sua aplicabilidade, principalmente os B-GOQD, como carreadores para entrega de quimioterápicos com maior eficiência e seletividade. A pesquisa avançou na compreensão e no desenvolvimento de novos materiais para melhorar tratamentos anticâncer e no estudo de linhagens celulares.

Bolsista: MARIA CLARA RODRIGUES DOS SANTOS FEITOZA
Orientador(a): JOSEPH ALBERT MEDEIROS EVARISTO
Resumo: A malária é ocasionada por parasitos do gênero Plasmodium, que em 2022 afetaram cerca de 260 milhões de pessoas no mundo, e em 2023 com 139.884 registros no Brasil. Recentemente, os parasitos têm mostrado resistência aos antimaláricos, destacando a urgência na busca de novos princípios ativos para interromper seu ciclo. A abordagem para a produção de novos fármacos é baseada na busca de alvos moleculares, sendo a enzima Enoil-ACP Redutase (PfENR), um desses alvos. A PfENR atua no ciclo FASII, catalisando a etapa final do alongamento de ácidos graxos essenciais do parasito. Assim, o objetivo deste projeto é testar o potencial inibitório de extratos da castanha-da-amazônia (Bertholletia excelsa) contra a PfENR. Inicialmente, cepas de E. coli BL21(DE3) enxertadas com o plasmídeo sintético PfENR foram cultivadas em meio suplementado com 100 µg/mL de ampicilina até atingir uma D.O. de 0,8 em 600nm. A seguir, a cultura foi submetida à indução com 1mM de IPTG e incubada por 16 horas, centrifugada, e o precipitado bacteriano ressuspenso em tampão de lise, sonicado por 30 segundos por 5 vezes e levado a centrifugação. Posteriormente, o sobrenadante foi submetido à cromatografia rápida de proteínas (FPLC) em coluna de Ni². A amostra foi quantificada e analisada por eletroforese em SDS-PAGE para verificar a pureza da proteína purificada. Na validação da atividade enzimática, foi utilizado substrato, tampão e cofator (NADH) onde a oxidação do cofator foi observada pela variação da absorção a 340nm. O teste inibitório consistiu no mesmo método da atividade, com adição do extrato aquoso da castanheira a 100µg/mL e 1µg/mL. A expressão da PfENR mostrou-se eficiente, com o crescimento bacteriano em antibiótico, e com a expressão proteica, confirmando a inserção do plasmídeo. A pureza foi comprovada na eletroforese, tal como na atividade enzimática nos testes de consumo de NADH. Os testes inibitórios com extrato aquoso de ouriço de castanheira mostraram-se promissores na inibição da PfENR. Posteriormente, novos testes serão realizados utilizando diferentes tecidos e diferentes concentrações do extrato de Bertholletia excelsa, objetivando a inibição da PfENR, fomentando a busca e o desenvolvimento de novos fármacos antimaláricos.