Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 3

Bolsista: RAVENA RODRIGUES PEREIRA DA SILVA
Orientador(a): CRISTIANE FRANCA DA COSTA
Resumo: Pouco investimento é destinado à pesquisa e desenvolvimento de medicamentos para o tratamento de doenças que afetam principalmente as populações pobres nas regiões mais vulneráveis do planeta. Milhões ainda morrem de doenças que podem ser tratadas ou evitadas, como as doenças infecciosas e parasitárias, sendo a malária, causada por espécies do gênero Plasmodium, uma das principais responsáveis. Alguns fármacos são utilizados para o tratamento da malária, como a primaquina, cloroquina e mefloquina, porém a alta toxicidade e o surgimento de cepas resistentes demandam a necessidade de se obter novos compostos que atuem com diferentes mecanismos de ação dos fármacos em uso. Estudos recentes com moléculas contendo o anel triazolopirimidínico e outras sulfonamidas demonstraram significativa atividade in vitro anti-P. falciparum. Com base nesses resultados e utilizando a estratégia de hibridação molecular, optou-se por unir estes dois núcleos, visando potencializar a atividade antimalárica. Este projeto tem como objetivo a obtenção e avaliação antiplasmódica de triazolopirimidinas inéditas contendo o núcleo benzenossulfonamida com inserção de diferentes substituintes nos anéis triazol[1,5-a]pirimidínico e benzenossulfonamida. A metodologia proposta consiste numa síntese linear de cinco etapas. A primeira etapa tem como objetivo a obtenção do anel triazólico por reação entre o sal de aminoguanidina e o respectivo ácido. Em seguida, o produto reagiu com acetoacetato de etila, em uma reação catalisada por ácido p-toluenossulfônico para formar os derivados triazolopirimidinona, os quais sofreu reação de cloração através do tratamento com oxicloreto de fósforo. Na sequência, foram feitas substituição nucleofílica entre os derivados clorados e 1,4-diaminobutano, e a última etapa consistiu na formação das benzenosulfonamidas por reação com os respectivos cloretos de benzenosulfonila. Até o momento foram obtidos 10 intermediários e 14 produtos finais desta rota sintética, alcançando rendimentos de 12% a 97% e produtos finais com pureza acima de 90%. Como perspectiva, espera-se alcançar otimização desta rota, obter os demais intermediários e produtos finais inéditos, além de caracterizá-los. Os ensaios de avaliação biológica serão realizados através de trabalhos de colaborações. Os produtos finais serão submetidos à avalição biológica, in vitro, quanto à atividade anti-P. falciparum e citotoxicidade.

Bolsista: DIOGO HENRIQUE ROSA ANASTACIO
Orientador(a): MONIQUE RAMOS DE OLIVEIRA GARCIA
Resumo: As vesículas extracelulares (VEs) desempenham papeis cruciais em diversos mecanismos biológicos e são protagonistas na comunicação intercelular. Portanto, estudar seu conteúdo proteico é de extrema relevância para desvendar mecanismos fisiopatológicos em modelos virais, como na COVID-19 ou em arboviroses. Esses mecanismos parecem ser fundamentais para a gravidade da doença e, possivelmente, estão associados à taxa de mortalidade. Doenças virais, como a infecção por SARS-CoV-2 e infecção a pelo arbovírus Chikungunya, têm por características a possibilidade de progressão para fases crônicas. Nosso grupo está focado em caracterizar o proteoma das VEs, a fim de encontrar biomarcadores que estejam relacionados aos mecanismos de cronicidade ou que possam ser utilizados no diagnóstico e/ou prognóstico destas doenças. No contexto da COVID-19, recentemente publicamos um artigo com o proteoma das VEs isoladas do plasma de pacientes na fase aguda da doença. Identificamos várias proteínas relacionadas à resposta imune, processos inflamatórios e à coagulação. Entretanto, percebemos que a principal limitação no estudo de VEs plasmáticas é o co-isolamento com lipoproteínas e proteínas plasmáticas, como a albumina. Para superar esta dificuldade, publicamos um segundo artigo descrevendo um novo protocolo de isolamento que combina dois métodos: gradiente de ultracentrifugação (G-UC) e cromatografia de exclusão molecular (SEC), garantindo uma purificação eficaz das VEs plasmáticas. No presente projeto, aplicamos este novo protocolo a doze amostras de plasma de pacientes e seis de doadores saudáveis para purificação das VEs e posterior análise proteômica no modelo da COVID-19 longa, também chamada de síndrome do pós-COVID. As amostras foram coletadas após seis meses e após dois anos da infecção inicial. As VEs foram purificadas eficientemente, segundo o protocolo desenvolvido por nosso grupo, digeridas e submetidas às análises por nanocromatografia de fase reversa acoplada à espectrometria de massas (nLC-MS/MS). Comparamos os grupos dos doadores saudáveis (DS) com o dos pacientes (CLTotal), e também o grupo das amostras coletadas com 6 meses do pós-infecção (CL1) com o grupo das amostras coletadas com 2 anos do pós-infecção (CL2). Os resultados mostraram 119 proteínas identificadas como diferencialmente abundantes com significância estatística, incluindo as identificadas somente em 1 dos 4 grupos. O atual bolsista foi o responsável por terminar o isolamento as VEs, prepará-las para a proteômica e por toda análise computacional do projeto. As análises funcionais ainda estão em andamento e pretende-se identificar processos biológicos diretamente relacionados à cronicidade, além de potenciais biomarcadores fisiopatológicos. Entendemos que este projeto contribuirá enormemente para o entendimento dos mecanismos imunopatogênicos relacionados à persistência dos sintomas no pós COVID-19.

Bolsista: Larissa Meira Resende
Orientador(a): Rosiane Aparecida da Silva Pereira
Resumo: Avaliação de antígenos de Schistosoma mansoni como alvos em novos testes de diagnóstico sorológico da esquistossomose Larissa M. Resende, Ismael A. Costa-Rocha, Jesuanne C. S. Andrade, Cristina T. Fonseca, Lis R. do Valle Antonelli, Olindo A. Martins-Filho, Rosiane A. da Silva-Pereira Apesar dos avanços no controle da esquistossomose, a doença continua sendo um grave problema de saúde pública mundial. Novas estratégias de diagnóstico são cruciais para seu controle e eliminação, uma vez que o teste atualmente utilizado, parasitológico por Kato-Katz, apresenta baixa sensibilidade. Os testes sorológicos são uma alternativa promissora para o diagnóstico da infecção ativa pelo Schistosoma mansoni, sendo necessária a identificação de antígenos para esses testes. Nosso grupo identificou possíveis proteínas-alvo, incluindo uma proteína denominada PPE, por meio de estudos de imunoproteômica e bioinformática. Portanto, este projeto tem como objetivo selecionar e avaliar peptídeos antigênicos dessas proteínas de S. mansoni para serem utilizados em novos testes de diagnóstico sorológico para esquistossomose. A estratégia experimental foi definida em duas abordagens. A primeira envolve a prospecção in silico de peptídeos da PPE e a segunda utiliza microarranjos de peptídeos, derivados da PPE e de outras proteínas selecionadas por bioinformática, em imunoensaios. A análise in silico selecionou seis peptídeos da PPE potencialmente antigênicos (P1-6). Esses peptídeos foram sintetizados e o P6 foi usado em ensaios ELISA para avaliar a reatividade de anticorpos em amostras de soro de indivíduos infectados e não infectados com S. mansoni, previamente caracterizados pelos testes parasitológicos Helmintex e Kato-Katz. Após a padronização, o ensaio foi realizado nas seguintes condições: Placas Maxisorp de 96 poços foram revestidas com 100 µL de P6 (6 µg/mL) em tampão carbonato-bicarbonato pH 9,6, por 16 horas a 4°C, depois bloqueadas com 10% de FBS em PBS-T por 2 horas a 4°C e lavadas. As amostras de soro, diluídas 1:80 em PBS-T, foram adicionadas em duplicata e incubadas a 37°C por 2 horas. Após a lavagem, as placas foram incubadas a 37°C por 1 hora com anticorpo secundário anti-IgG-HRP humana, na diluição de 1:60.000 e em seguida, lavadas novamente. O susbtrato TMB (100 µL) foi adicionado por 30 minutos ao abrigo da luz, em temperatura ambiente, e 50 µL de ácido sulfúrico 4M foram usados para interromper as reações. O sinal colorimétrico foi lido em um espectrofotômetro de microplaca a 450nm. Nessas condições, o ensaio apresentou um coeficiente de variação inferior a 5%. Os resultados obtidos mostraram que o peptídeo P6 falhou em distinguir os indivíduos infectados dos não infectados, sejam de área endêmica para esquistossomose ou moradores de área não endêmica. Paralelamente, foram sintetizados microarranjos personalizados contendo 726 peptídeos de 15 aminoácidos derivados de cinco proteínas de S. mansoni: 340 peptídeos de PPE, 179 de Smp33, 130 de Smp13, 56 de Smp18 e 21 de Smp19. Foram realizados imunoensaios usando amostras de soro de indivíduos infectados e não infectados com S. mansoni e anticorpos reveladores fluorescentes anti-IgG e IgG4 humanos. Dois outros peptídeos, P7 e P8, pertencentes a regiões da PPE fortemente reconhecidas nos imunoensaios com o microarranjo pelos anticorpos presentes no soro de indivíduos infectados, foram selecionados, sintetizados e testados em novos ensaios de ELISA, em condições semelhantes às descritas acima. Os peptídeos P7 e P8 também falharam na distinção dos indivíduos infectados pelo S. mansoni dos não infectados. Com relação aos ensaios com o microarranjo de peptídeos, 120 dos 726 peptídeos que apresentaram as maiores diferenças de reatividade entre os pools de soro de indivíduos infectados e não infectados foram selecionados para confecção de um novo microarranjo que será usado para determinar seu desempenho em um teste de diagnóstico de esquistossomose.

Bolsista: LUCAS RIBEIRO MONTEIRO
Orientador(a): KELLEN CRISTINA DA SILVA GASQUE
Resumo: O presente relatório descreve as atividades realizadas no âmbito do subprojeto Avaliação do Programa de aperfeiçoamento de preceptores dentistas em Residências em Saúde, desenvolvido no contexto do Programa Institucional de Bolsas de Iniciação Científica (PIBIC), sob orientação da pesquisadora Kellen Cristina da Silva Gasque. A pesquisa teve como foco os preceptores dentistas atuantes em programas de Residência em Saúde e avaliou a efetividade dos cursos ofertados pela Universidade Aberta do SUS (UNA-SUS) voltados à formação pedagógica e à integração ensino-serviço.A introdução contextualiza a importância da Política Nacional de Saúde Bucal e da Educação Permanente em Saúde como estratégias fundamentais para o fortalecimento do SUS. Destaca-se o papel das residências como espaços de aprendizagem prática e teórica para os profissionais da saúde, especialmente dentistas, que muitas vezes enfrentam dificuldades para exercerem a função formadora devido à ausência de preparo pedagógico.A metodologia do estudo consistiu na análise de dados oriundos do Programa de Aperfeiçoamento Multiprofissional de Preceptores para Integração Ensino e Serviço nos Territórios de Saúde, com foco nas regiões Norte e Nordeste do Brasil. A coleta foi baseada em questionários de abertura e encerramento dos cursos, enquetes de avaliação quatro meses após a conclusão, reuniões de grupos focais e cruzamento de dados entre plataformas digitais (Moodle, Plataforma Arouca e CNES).Entre os principais resultados, destaca-se o perfil sociodemográfico dos cursistas: predominância de mulheres dentistas, com maior representação no Nordeste (69,4%), e maior percentual de homens no Norte (52,3%). A idade média foi semelhante entre as regiões, variando entre 43 e 44 anos. A raça branca foi predominante em ambas as regiões, seguida por pessoas pardas. Quanto à escolaridade, observou-se uma diversidade entre graduação e pós-graduação, com distribuição equilibrada.Em relação aos cursos ofertados, os mais procurados foram Profissionalismo e Identidade Profissional do Preceptor, Planejamento das Práticas Educativas e Liderança e Gestão de Conflito. Os dados de avaliação dos cursos demonstram aprovação majoritária (94,71%) quanto à aplicabilidade do conteúdo na prática profissional, embora algumas divergências tenham sido observadas na satisfação com a carga horária. Os participantes também reconheceram a clareza das informações fornecidas antes da matrícula.Além da análise dos cursos, o bolsista desenvolveu uma revisão de escopo (scoping review) com a seguinte pergunta norteadora: Quais são as demandas de educação permanente advindas de crises sanitárias para os trabalhadores da saúde no contexto brasileiro?. A pesquisa foi guiada pela metodologia PCC (População, Conceito, Contexto) e utilizou os critérios do Joanna Briggs Institute e o checklist PRISMA-ScR. As bases de dados selecionadas incluíram PubMed, EMBASE, SCOPUS, BVS, ERIC e BDTD. Foram realizados encontros semanais de discussão metodológica e calibração dos critérios de inclusão/exclusão dos estudos.Conclui-se que os cursos avaliados contribuíram significativamente para a qualificação pedagógica e profissional dos preceptores dentistas, especialmente em regiões com menor oferta formativa. A revisão de escopo ampliou o olhar sobre as necessidades de formação em contextos de crise sanitária, fortalecendo a proposta de Educação Permanente em Saúde como política essencial no SUS.

Bolsista: MARCYELLEN BARRETO DA SILVA
Orientador(a): MARGARETH MARIA DE CARVALHO QUEIROZ
Resumo: Os artrópodes são os seres vivos mais diversos do mundo, desempenhando variados papéis no ambiente terrestre, dentre eles a manutenção da comunidade vegetal e animal dos ecossistemas e a reciclagem de nutrientes. Cosmopolitas, muitas espécies são sinantrópicas e possuem relações com o homem e com os animais domésticos. Algumas, inclusive, veiculam agentes patogênicos e causam miíases, possuindo importância sob o ponto de vista da saúde pública. A sinantropia das espécies pode ser avaliada para inferir sobre a qualidade ambiental de determinada localidade, tornando-as relevantes bioindicadores. Nos processos de decomposição da matéria orgânica, os artrópodes constituem os animais mais representativos da fauna detritívora, utilizando os recursos do microhabitat efêmero constituído por carcaças e cadáveres para uma série de fins, dentre eles alimentação, fonte proteica para maturação dos ovários das fêmeas, local de cópula e substrato para o desenvolvimento dos imaturos. Dessa forma, no domínio da entomologia forense, estes animais constituem vestígios na investigação de mortes violentas, sobretudo para a cronotanatognose, obtida através do Tempo de Colonização (TC). No entanto, quaisquer aplicações da entomologia forense são dependentes de pesquisa anterior sobre a composição da artropodofauna cadavérica do local de interesse, a função desempenhada por cada grupo no processo de decomposição e a influência dos fatores abióticos temperatura, umidade relativa e precipitação. Tal condição é especialmente marcada no Brasil, um país de território extenso, múltiplos biomas e com a maior biodiversidade do mundo. Particularmente no Rio de Janeiro, a artropodofauna associada a cadáveres expostos em ambientes urbanos e de mata é relativamente conhecida, porém, áreas rurais estão carentes de dados, principalmente levando em conta que muitos corpos são abandonados em regiões deste perfil. Desse modo, o projeto tem como objetivo avaliar a composição, abundância e riqueza da artropodofauna associada ao processo de decomposição de carcaças de porcos domésticos Sus scrofa Linnaeus, 1758 expostas no verão de 2025, em três áreas rurais com diferentes características de luminosidade, vegetação e proximidade de pessoas e veículos, localizadas no domínio do bioma Mata Atlântica, no município de Seropédica, na região metropolitana do Rio de Janeiro. Foram identificados 46 táxons e 3.332 indivíduos na fauna visitante associada à decomposição dos porcos no período correspondente ao verão de 2025, sendo Diptera a ordem mais representativa, com 12 famílias registradas, dentre as quais Calliphoridae e Sarcophagidae apresentaram pioneirismo e dominância. No tocante à fauna colonizadora, onze espécies pertencentes a cinco famílias foram identificadas durante o verão de 2025: Chrysomya albiceps (Wiedemann, 1819) (Diptera: Calliphoridae), Hemilucilia segmentaria (Fabricius, 1805) (Diptera: Calliphoridae), Hemilucilia semidiaphana (Rondani, 1850), Lucilia eximia (Wiedemann, 1819) (Diptera: Calliphoridae), Chrysomya putoria (Wiedemann, 1818) (Diptera: Calliphoridae), Peckia (Pattonella) intermutans (Walker, 1861) (Diptera: Sarcophagidae), Hydrotaea aenescens (Wiedemann, 1830) (Diptera: Muscidae), Hydrotaea chalcogaster (Wiedemann, 1824) (Diptera: Muscidae), Musca domestica Linnaeus, 1758 (Diptera: Muscidae), Fannia grupo pusio (Diptera: Fanniidae) e Hermetia illucens (Linnaeus, 1758) (Diptera: Stratiomyidae). Destas, C. albiceps e H. aenescens foram as mais abundantes, ao passo que H. segmentaria, L. eximia e P. (P.) intermutans foram pioneiras na colonização, demonstrando importância forense para a localidade de estudo.

Bolsista: Mariana Fiori
Orientador(a): Letusa Albrecht
Resumo: A malária é uma doença que aflige a humanidade desde a antiguidade, com os primeiros registros conhecidos foram feitos na Grécia antiga. O Brasil está incluído na lista de países endêmicos da Organização Mundial de Saúde, com a região amazônica sendo a mais afetada pela doença, registrando mais de 99% dos casos domésticos do país. No entanto, a principal causa de morte por malária é o diagnóstico tardio e a falta de profissionais familiarizados com o quadro da doença fora da região endêmica. A busca por candidatos vacinais contra a malária vivax possui certos obstáculos em comparação às buscas por candidatos vacinais contra outros tipos de malária como, por exemplo, a falciparum. Essa característica ocorre devido a impossibilidade de cultivar o Plasmodium vivax in vitro por longos períodos, que ocorre devido a preferência do parasito por eritrócitos imaturos, os reticulócitos. Por conta disso, é utilizada a técnica do DNA recombinante para expressar o alvo de interesse, que são proteínas com potencial antigenico , essa proteínas são sequenciadas, clonadas no vetor e transfectadas na célula eucariótica, pois com esta é possível avaliar a geração de anticorpos específicos desejados subsequentemente para vacinação. Para isso, em trabalhos prévios do nosso grupo, foram realizadas análises in silico de aproximadamente 5.300 genes da cepa Plasmodium vivax Salvador I (Sal I) com o objetivo de identificar novos candidatos vacinais pouco explorados na literatura. Essas análises foram conduzidas utilizando o PlasmoDB, um banco de dados especializado em Plasmodium. O programa VaxiJen 2.0 foi empregado para avaliar o score de antigenicidade (> ou = 1) das proteínas selecionadas, enquanto o número de epítopos de células B foi predito utilizando o programa Bepipred 2.0: Sequential B-Cell Epitope Predictor API. Dentre os potenciais candidatos, foram selecionados os dois genes aqui denominados de VX11 (score de antigenicidade = 1.0118 e 4 epítopos de células B) e VX12 (score de antigenicidade = 1.0054 e 5 epítopos de células B) para este trabalho, sendo estes genes expressas no ciclo eritrocítico do parasito. Estes genes serão expressos em células eucarióticas HEK293, e para tal, protocolos para a transfecção dos plasmídios contendo estes genes nestas células estão sendo otimizados.