Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 3

Bolsista: GABRIEL GONCALVES RAMOS
Orientador(a): ALESSANDRA CAMPBELL PINHEIRO
Resumo: A leishmania é considerada uma das doenças mais negligenciadas do mundo, havendo poucos medicamentos disponíveis para uso clínico. Os fármacos hoje utilizados apresentam alta toxicidade e diversos problemas colaterais são relatados, o que dificulta a continuidade do tratamento. Nesse contexto, o nosso grupo de pesquisa tem trabalhado no desenvolvimento de novas substâncias com potencial atividade leishmanicida. Em trabalhos prévios do grupo, observou-se que diversas substâncias contendo anéis heteroaromáticos nitrogenados de 6 membros apresentaram atividade in vitro.Neste sentido, o presente trabalho visa dar continuidade aos estudos do grupo na busca por moléculas mais ativas frente ao L. amazonensis e L. braziliensis. O objetivo desse projeto é a síntese e avaliação leishmanicida de derivados hidrazônicos e acilidrazônicos contendo o núcleo heterocíclico pirimidina em sua estrutura.

Bolsista: ANNA CLARA SANTIAGO MORAES
Orientador(a): Eugênia Terra Granado Pina
Resumo: Justificativa e Relevância: A leucemia linfoblástica aguda de células B (LLA-B) é a neoplasia maligna mais frequente na infância, com grande heterogeneidade genética, o que dificulta a estratificação de risco. No Brasil, incluindo a Bahia, há escassez de estudos epidemiológicos e limitações no acesso a técnicas diagnósticas moleculares no SUS. A adoção de ferramentas capazes de identificar subtipos genéticos, como a análise de ploidia por citometria de fluxo, surge como ferramenta promissora para o aprimoramento prognóstico e a individualização terapêutica. O projeto visa implementar essa ferramenta diagnóstica, por meio da capacitação de equipes e fortalecimento da infraestrutura laboratorial, contribuindo para o diagnóstico mais preciso, e favorecendo escolhas terapêuticas mais adequadas. Objetivos: Implementar a técnica de Índice de DNA para pacientes pediátricos com LLA-B atendidos no estado da Bahia; padronizar a técnica de índice de DNA; implementar o índice de DNA na rotina do laboratório de imunofenotipagem; correlacionar os resultados de ploidia, com as respostas terapêuticas iniciais dos pacientes avaliados; avaliar o perfil epidemiológico dos pacientes avaliados. Metodologia: Foram incluídos pacientes de 0 a 18 anos com suspeita de doenças onco-hematológicas, encaminhados pelos hospitais Martagão Gesteira e Aristides Maltez localizados em Salvador; e da Santa de Misericórdia, de Itabuna, entre novembro de 2023 e fevereiro de 2025. As amostras de medula óssea ou sangue periférico de casos confirmados de LLA-B e controles foram analisadas por citometria de fluxo, utilizando marcação por anticorpos, lise celular, tratamento com RNAse e iodeto de propídeo, seguido de aquisição no citômetro DXFlex. A análise do índice de DNA foi realizada no software FlowJo, por meio da mediana de fluorescência na fase G0/G1, considerando padrões para hipodiploidia, hiperdiploidia e zona cinza. Informações clínicas foram coletadas dos prontuários, incluindo dados demográficos, laboratoriais e resposta terapêutica. Foram realizadas análises descritivas dos dados. Discussão de resultados: A padronização da técnica de índice de DNA envolveu a avaliação de protocolos e a definição dos linfócitos maduros da própria amostra como controle diploide, com uso de anticorpos como CD45, CD19 e CD3 para otimizar a identificação dessa população celular. Durante o processo de padronização e implementação, foram realizadas marcações do índice de DNA em 29 amostras de pacientes enviadas para análise. Apenas 18 pacientes foram incluídos no projeto, por estarem dentro dos critérios de inclusão, que envolvem o diagnóstico de LLA-B e viabilidade da amostra. Entre as amostras excluídas tivemos 7 com diagnóstico diferente de LLA-B (LMA, aplasia, LMC ou não leucêmico), e 4 amostras inviáveis para análise devido a uso prévio de corticoides ou baixa viabilidade das amostras. Aproximadamente 55,5% dos pacientes foram classificados como portadores de baixa hiperdiploidia, ou próximos a diploidia, caracterizada por um valor de índice superior a 1,0 e inferior a 1,16. Entre as amostras estudadas, 38,8% foram classificadas com alta hiperdiploidia, definida por uma razão entre 1,16 e 1,60, sendo associada a um prognóstico favorável. Um único paciente classificado com triploidia (n=1), cuja razão entre as medianas ultrapassa 1,60, e está relacionada a um prognóstico ruim. Conclusões parciais: Este trabalho viabilizou a implementação da técnica de índice de DNA, contribuindo para a classificação molecular de pacientes pediátricos com LLA-B atendidos pelo SUS. As análises em andamento buscam correlacionar os achados moleculares com dados clínicos e prognósticos, reforçando a relevância da citometria de fluxo na estratificação de risco em LLA-B.

Bolsista: VITOR SILVA COUTO
Orientador(a): SAMANTA CRISTINA DAS CHAGAS XAVIER AZEREDO
Resumo: Trypanosoma cruzi é um protozoário flagelado geneticamente heterogêneo, generalista e paninfeccioso, com seis subpopulações reconhecidas conhecidas como Unidades Discretas de Tipagem (DTUs), TcI a TcVI e TcBat. A transmissão ocorre dentro de uma rede ecológica que envolve centenas de espécies de mamíferos e triatomíneos em diversos cenários ambientais. Compreender a transmissão do T. cruzi requer conhecimento sobre as características da paisagem. Nesse contexto, a análise ambiental com o uso de imagens de alta resolução e aprendizado de máquina tem sido aplicada com sucesso na parasitologia. Este estudo mapeou e quantificou os elementos da paisagem de três localidades com diferentes perfis de transmissão de T. cruzi em Croatá, Ceará. Em outubro de 2024, cerca de 10.500 imagens de drone (Mavic 2 e 3) foram capturadas em Baixio (BA), Ponta do Morro (PM) e Melancia dos Marcelinos (MM), resultando em 13 ortomosaicos (~20 ha) gerados com o software DroneDeploy. No QGIS, polígonos foram delineados sobre os ortomosaicos para definir cinco classes: (1) vegetação densa, (2) vegetação seca, (3) afloramentos rochosos, (4) casas e (5) solo exposto. O algoritmo Random Forest (RF), em Python, foi então utilizado para classificar essas classes, com uma proporção de 80% para treinamento e 20% para teste. O desempenho foi avaliado por meio de validação cruzada, alcançando entre 90% e 98% de acurácia. As áreas com maior predominância de vegetação seca foram BA (90%) e PM (64%). Em PM, 27% da área era composta por domicílios e 7% por afloramentos rochosos. Um total de 45 mamíferos silvestres (15 marsupiais, 30 roedores) foi testado para T. cruzi, e a distribuição local de triatomíneos foi analisada. A diversidade de mamíferos foi baixa: 8 indivíduos de 3 espécies em BA e 11 de 4 espécies em PM. As espécies mais abundantes foram Didelphis albiventris (N=6), uma espécie resiliente, e Triatoma brasiliensis, associada a afloramentos rochosos. As taxas de infecção por T. cruzi foram de 50% em BA e 36% em PM, incluindo animais infectados próximos às residências. Em MM, a vegetação densa cobria 46%, composta principalmente por Copernicia prunifera (carnaúbas). Essa área apresentou maior diversidade de mamíferos (26 indivíduos, 6 espécies), predominantemente roedores, com uma taxa de infecção de 34%, destacando o papel da vegetação densa na composição da fauna. Rhodnius nasutus, espécie de triatomíneo associada às palmeiras, foi a mais registrada. A análise integrada da tríade ambiente-hospedeiro-parasita pode ser aplicada para o monitoramento de T. cruzi e identificação de risco, apoiando ferramentas de vigilância em múltiplas escalas para a doença de Chagas. Essa abordagem aprimora a compreensão dos padrões de transmissão e auxilia no desenvolvimento de estratégias de controle direcionadas em regiões endêmicas.

Bolsista: DANIELA GOMES DA SILVA
Orientador(a): MARIA AUGUSTA DARIO
Resumo: A família Trypanosomatidae é constituída por diferentes espécies de protozoários parasitas, incluindo Trypanosoma cruzi e Leishmania sp, espécies de maior relevância epidemiológica e econômica. A descrição de novas espécies e unidades taxonômicas de Trypanosoma spp. em animais silvestres e novas questões sobre T. cruzi, nos mostra que ainda há muito a compreender sobre sua riqueza e ecologia. Em 2012, um caso fatal de doença de Chagas aguda no município de Guarapari, Espírito Santo, incentivou uma pesquisa de campo para elucidar a ecologia dos tripanosomatídeos na região, tendo em vista que morcegos podem apresentar um papel fundamental dentro do ciclo de transmissão dessas espécies. Com isso, o objetivo do projeto é determinar e caracterizar a presença de espécies e genótipos de tripanosomatídeos em infecções simples e mistas em morcegos da Mata Atlântica do estado do ES. Nesse contexto, obtivemos 88 amostras de coágulos sanguíneos de 16 espécies de morcegos e 22 amostras de isolados de cultura de sete espécies de morcegos em três áreas da zona rural do município de Guarapari. As amostras foram submetidas à extração de DNA e a reação em cadeia da polimerase para o marcador 18S rDNA para a família Trypanosomatidae. O Sequenciamento de Nova Geração (NGS) foi feito a partir de bibliotecas de DNA com as amostras amplificadas. Após o sequenciamento, foi feita a análise de bioinformática dos dados para a identificação das unidades taxonômicas presentes nas amostras. Foram capturados morcegos das espécies Anoura sp.(1), Anoura caudifer(4), Anoura geoffroyi(4), Artibeus sp.(2), Artibeus fimbriatus(3), Artibeus lituratus(22), Carollia perspicillata(34), Desmodus rotundus(7), Glossophaga soricina(3), Platyrrhinus lineatus(1), Platyrrhinus sp. (1), Phyllostomus discolor(3), Phyllostomus hastatus(4), Rinophyla sp.(1), Sturnira lilium(11), Tonatia bidens(1) e Trachops cirrhosus(1). A espécie com maior número de amostras foi C. perspicillata. Todas as 35 amostras positivas obtidas foram submetidas ao sequenciamento metabarcoding e a classificação taxonômica. Foram identificadas 22 OTUs para as espécies C. mellificae, H. muscarum, L. infantum, T. cascavelli, T. cruzi, T. dionisii, T. janseni, T. rangeli, T. c. marinkellei, T. madeirae, T. minasense, Trypanosoma sp. Neobat 4 e os gêneros Neobodo sp. e um exemplar da família Bodonidae. Nossos resultados mostraram que as espécies com maior ocorrência de tripanosomatídeos foram Carollia perspicillata e Phyllostomus discolor. Também encontramos espécies como T. cascavelli até então vista somente em marsupiais e serpentes, e Crithidia mellificae pela primeira vez em Desmodus rotundus, um morcego hematófago, o que levanta questões sobre especificidade parasitária. Além disso, mais uma vez, espécies de protozoários de vida livre são encontradas em morcegos, levantando hipóteses sobre sua biologia e ecologia. Além disso, a caracterização direta de amostras biológicas é uma importante fonte de informação de ocorrência de tripanosomatídeos e nos mostrou que há riqueza de espécies circulando em morcegos da Mata Atlântica do estado do Espírito Santo, que possuem papel de dispersão e manutenção dessas espécies na natureza.

Bolsista: SANDY BORGES DE AGUIAR
Orientador(a): Marcio Sacramento de Oliveira
Resumo: A tuberculose (TB), provocada principalmente pelo Mycobacterium tuberculosis, configura-se como um relevante desafio para a saúde pública mundial, sobretudo em populações vulneráveis e em cenários de desigualdade social. Embora existam medidas de controle e um Plano Nacional voltado para a sua erradicação, o país ainda apresenta índices expressivos de incidência e mortalidade. Este estudo, de caráter ecológico e de séries temporais, com abordagem quantitativa, tem como objetivo geral avaliar a tendência temporal do coeficiente de incidência e das taxas de mortalidade por tuberculose nas capitais, nos estados e no Brasil, bem como analisar a viabilidade de cumprimento das metas do Plano Nacional pelo Fim da Tuberculose até 2035. Foram extraídos dados do Ministério da Saúde referentes aos anos de 2010 a 2025, incluindo o número de casos e óbitos registrados no Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN) e no Sistema de Informações sobre Mortalidade (SIM). Calcularam-se coeficientes de incidência e taxas de mortalidade padronizados por faixa etária e por região, possibilitando a comparação entre diferentes contextos populacionais. Também se estimaram projeções para 2030, a fim de verificar a tendência de cumprimento dos objetivos propostos pelo Plano Nacional. Os resultados iniciais revelaram aumento significativo do coeficiente de incidência em praticamente todas as regiões brasileiras, sobretudo em faixas etárias jovens (15 a 39 anos) e em crianças menores. Em contrapartida, observou-se uma tendência de queda na mortalidade, especialmente em grupos etários mais avançados, ainda que de forma desigual entre as regiões Norte e Nordeste mantiveram patamares mais altos em comparação com Sul, Sudeste e Centro-Oeste. Evidenciou-se a influência de fatores socioeconômicos e estruturais na dinâmica de transmissão da doença, o que reforça a necessidade de políticas públicas direcionadas para grupos em situação de vulnerabilidade. Embora haja sinais positivos na redução de óbitos, o crescimento das taxas de incidência em determinados segmentos etários sugere dificuldades no alcance das metas de eliminação da tuberculose até 2035. Conclui-se que, apesar dos avanços obtidos, a tuberculose permanece como um importante problema de saúde coletiva no Brasil, requerendo fortalecimento da vigilância epidemiológica, aprimoramento no acesso ao diagnóstico precoce e maior integração entre os diversos setores de saúde e assistência social. Futuras etapas do trabalho contemplarão análises mais detalhadas das projeções e estudos acerca dos determinantes sociais, contribuindo para o delineamento de estratégias mais eficazes para o controle e a erradicação da tuberculose no país.

Bolsista: ANALICE SILVA DOS SANTOS
Orientador(a): Haiana Charifker Schindler
Resumo: A tuberculose (TB) é uma doença infectocontagiosa causada pelo complexo Mycobacterium tuberculosis (Mtb), responsável por 1,25 milhões de mortes em 2024. Atualmente, o Brasil está entre os 30 países com maior carga de TB, com 84 mil casos registrados em 2024, sendo considerado pela Organização Mundial de Saúde um país prioritário para o controle da doença. O diagnóstico convencional é realizado através da associação de aspectos clínicos, exames de imagem, imunológicos e laboratoriais. A baciloscopia e a cultura de micobactérias são técnicas tradicionais amplamente utilizadas na elucidação de casos de TB. Entretanto, apresentam limitações, devido à baixa quantidade de bacilos nas amostras e o tempo até a obtenção do resultado, levando a inúmeros casos de TB que permanecem sem confirmação laboratorial. Nesse contexto, técnicas moleculares se apresentam como alternativas promissoras. O Xpert MTB/RIF é uma técnica sensível e utilizada pelo sistema público de saúde, entretanto, é padronizado para poucos tipos de amostras biológicas, limitando sua utilização. A qPCR in house se destaca como a técnica mais sensível, rápida e mais versátil para a detecção da TB, podendo ser aplicada em diferentes tipos de isolados clínicos. Dentre os alvos gênicos utilizados, o Citocromo P450 (CyP141), é uma proteína do Mtb que apresenta alta conservação, sensibilidade e especificidade. Dessa forma, o presente projeto propõe avaliar o desempenho de um novo alvo molecular CyP141 por qPCR in house para detecção de Mtb em diferentes amostras biológicas de pacientes com e sem sintomas clínicos de TB. O estudo está sendo desenvolvido no Instituto Aggeu Magalhães (FIOCRUZ/IAM). O estudo encontra-se aprovado no comitê de ética da instituição (Nº do parecer: 5445.516). Os participantes do estudo (N = 120) são provenientes da rede SUS-PE, sendo subdivididos nos grupos: Pacientes com TB (N = 85) e Pacientes Sem TB (N = 35). Até o presente momento, foram coletadas 169 amostras biológicas (urina, escarro e sangue periférico). As amostras estão sendo processadas para descontaminação, separação dos elementos do sangue e extração de DNA, utilizando o protocolo de extração Mini Salting Out com adaptações in house, que se mostrou mais eficiente em qualidade e rendimento do DNA. Posteriormente, as amostras estão sendo submetidas aos testes de rotina e a técnica de qPCR para detecção do alvo CyP141. O limite de detecção do sistema de qPCR-CyP141 foi de 100fg/µL. Em relação à sensibilidade e especificidade da técnica, foram obtidos valores de 52,14% e 88,46%, respectivamente. Adicionalmente, o ensaio proposto foi avaliado em associação com uma qPCR para detecção do alvo IS6110, sendo obtida uma sensibilidade de 64,96% e especificidade de 86,54%. O ensaio de qPCR-CyP141 obteve resultados promissores no diagnóstico da TB, principalmente quando utilizado em associação com uma qPCR para detecção do alvo IS6110, melhorando os parâmetros avaliados. A pesquisa reforça a relevância de métodos moleculares acessíveis e adaptáveis à realidade do SUS, especialmente para diagnóstico de formas extrapulmonares da TB. A utilização de novos testes, como a qPCR-CyP141-IS6110 proposta, podem auxiliar os métodos convencionais, interferindo positivamente no início do tratamento e no prognóstico dos pacientes. Por fim, é imprescindível a continuidade do estudo com maior número amostral para validação dos dados e futura aplicação do protocolo no sistema de saúde pública.