Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 3

Bolsista: CAMILLA REICHEL CASSERES DE ALMEIDA
Orientador(a): HARRISON MAGDINIER GOMES
Resumo: A tuberculose bovina, causada pela espécie Mycobacterium bovis, é uma doença infecciosa que afeta não apenas os rebanhos bovinos, mas também representa um risco significativo para a saúde pública devido à sua natureza zoonótica. A doença pode resultar em perdas econômicas substanciais, especialmente no setor leiteiro, afetando a produção de leite e a qualidade do produto. Além disso, M. bovis pode ser transmitido ao ser humano, principalmente por meio do consumo de leite não pasteurizado ou pelo contato com animais infectados. A detecção precoce e a implementação de estratégias de controle são essenciais para mitigar os impactos da tuberculose bovina tanto na saúde pública quanto na economia (SILVA et al., 2021).O estado de Pernambuco, particularmente a região do Agreste, desempenha um papel importante na produção leiteira regional, sendo uma área estratégica para a economia rural. No entanto, a presença de animais infectados por M. bovis coloca em risco a segurança alimentar e a saúde pública. Estudos como o de Ferreira et al. (2018) evidenciam a detecção de M. bovis em bovinos abatidos em Garanhuns, Pernambuco, usando métodos de isolamento bacteriológico, histopatologia e diagnóstico molecular. Esses resultados destacam a necessidade de monitoramento constante para identificar focos de infecção e prevenir a disseminação da doença, principalmente nas áreas de produção leiteira.A caracterização molecular de M. bovis tem se mostrado uma ferramenta fundamental para a compreensão de sua diversidade genética, o que contribuirá para a melhoria das estratégias de controle e prevenção. Souza et al. (2020) realizaram uma análise genotípica de isolados de M. bovis de rebanhos leiteiros em Pernambuco, utilizando técnicas como spoligotyping. O estudo revelou uma diversidade genética significativa entre os isolados, indicando diferentes padrões epidemiológicos e possíveis fontes de infecção, informações essenciais para o controle da doença.Este projeto visa investigar a caracterização molecular de isolados de M. bovis provenientes de rebanhos leiteiros da região do Agreste Pernambucano. Utilizando técnicas como PCR em tempo real e spoligotyping. A pesquisa buscará mapear a diversidade genética de M. bovis, identificar fontes de infecção e contribuir para o aprimoramento das estratégias de enfrentamento da tuberculose bovina no estado de Pernambuco.

Bolsista: JAINNE LIMA BRITO DOS SANTOS
Orientador(a): Thiago Marconi de Souza Cardoso
Resumo: Leishmania (Viannia) braziliensis é o principal agente etiológico da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) na América do Sul, doença que se manifesta clinicamente de forma variada, incluindo formas cutânea (LC), mucosa (LM) e disseminada (LD). Evidências científicas apontam que as variações genéticas intraespécies desse parasito estão associadas à diversidade clínica da infecção e à forma como o sistema imune do hospedeiro responde. Nesse contexto, os antígenos proteicos de diferentes cepas podem desempenhar papel fundamental na modulação da resposta imunológica, especialmente envolvendo linfócitos T, células centrais na defesa contra o parasita. Este trabalho tem como objetivo avaliar a capacidade dos antígenos proteicos de promastigotas de L. (V.) braziliensis, isoladas de diferentes formas clínicas de LTA, de modular in vitro a proliferação e ativação de linfócitos T humanos.Para isso, foram isoladas cepas clínicas de pacientes diagnosticados com LC, LD e LM, na região endêmica de Corte de Pedra (BA), e cultivadas em meio apropriado. Os antígenos proteicos solúveis (SLA) foram extraídos das promastigotas e posteriormente fracionados por peso molecular utilizando filtros com diferentes pontos de corte (10, 30 e 100 kDa), resultando em subfrações de alto (>100 kDa), médio (3099 kDa) e baixo peso molecular (1029 kDa). A etapa de caracterização proteica incluiu a padronização de técnicas de eletroforese em gel de poliacrilamida, com testes de Native PAGE, SDS-PAGE e SDS/DTT-PAGE. Foram otimizados parâmetros como a concentração do gel (12%), pH, voltagem e tempo de corrida eletroforética. Para visualização das bandas proteicas, compararam-se os métodos de coloração Coomassie Blue e Silver Stain, sendo este último selecionado por sua maior sensibilidade. A padronização foi bem-sucedida e permitiu a definição de condições ideais para análise do perfil eletroforético dos antígenos totais. O estudo funcional da resposta de linfócitos T, que inclui o estímulo de células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) com os antígenos totais e suas subfrações, encontra-se em fase de andamento. Após o cultivo celular, será realizada citometria de fluxo para análise fenotípica e funcional das subpopulações T CD4+ e CD8+, utilizando marcadores de superfície e intracelulares como IFN-Gamma, TNF-Alpha, IL-10 e Granzima B. A análise estatística será conduzida pelo software GraphPad Prism 8, sendo considerado estatisticamente significativo p < 0,05. Até o momento, os resultados obtidos demonstram o sucesso no cultivo das cepas, na extração e fracionamento dos antígenos, bem como na padronização da eletroforese, estabelecendo uma base sólida para as próximas etapas da pesquisa. A continuidade da investigação funcional permitirá explorar o potencial imunomodulador das diferentes frações proteicas e aprofundar o conhecimento sobre os mecanismos imunológicos envolvidos na LTA.

Bolsista: LARISSA VICTORIA DE OLIVEIRA
Orientador(a): GEISA PAULINO CAPRINI EVARISTO
Resumo: A biodiversidade vegetal da Amazônia, especialmente a espécie Capirona macrophylla, conhecida como "mulateiro" ou "árvore da juventude", possui um grande potencial como fonte de biomoléculas para as indústrias alimentícia, cosmética e farmacêutica. Em prévios estudos por este grupo de pesquisa foi constatada atividade de frações cromatográficas da casca do mulateiro contra o Plasmodium falciparum. A pesquisa desde período focou na avaliação da atividade antioxidante das frações do extrato metanólico da folha do mulateiro, onde a amostra foi fracionada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) utilizando coluna C18 semipreparativa e gradiente de metanol por 60 min., com coleta de fração a cada minuto. As frações foram secas, o peso seco medido e novamente diluídas para execução dos testes in vitro de atividade antioxidante utilizando o radical livre DPPH (2,2-difenil-1-picrilidrazil). Como resultado, 12 frações apresentaram valores de CI50 relevantes, ou seja, inferiores a 40 µg/mL. Esses resultados confirmam o potencial antioxidante dos extratos de Capirona macrophylla, evidenciando a importância da flora amazônica para o desenvolvimento de novos produtos nas indústrias de fármacos e cosméticos, e abrindo caminho para futuras pesquisas sobre suas propriedades bioativas. Como continuidade deste projeto, o extrato bruto da casca do mulateiro será fracionado e sua atividade antioxidante testada, e os metabólitos presentes nas frações 5, 29, 30 e 49 que foram bioativas contra o Plasmodium falciparum serão purificados e identificados.

Bolsista: ANA CLARA CHAGAS TOSCANO
Orientador(a): Helvecio Vinicius Antunes Rocha
Resumo: A esporotricose é uma infecção zoonótica causada por um fungo dimórfico do gênero Sporothrix, e é considerada a micose subcutânea mais frequente na América Latina e Ásia. O fármaco de primeira escolha para o tratamento da esporotricose zoonótica é o itraconazol (ITZ), um antifúngico de amplo espectro e classe II segundo o Sistema de Classificação Biofarmacêutica. Devido a fatores como alta massa molar do ITZ, elevada ligação às proteínas plasmáticas, e ausência de vascularização na epiderme, sua biodisponibilidade no local de ação pode ser afetada. Assim, este trabalho visa desenvolver formulações, a base de nanocristais, que favoreçam a solubilidade/dissolução do ITZ e, consequentemente, a biodisponibilidade e efetividade do tratamento. Para atingir esse objetivo, aplicou-se a estratégia de delineamento experimental para avaliar a influência dos parâmetros de moagem (influência dos estabilizantes, concentração de ITZ e tamanho de pérola), como método de triagem da etapa de pré-formulação utilizando um método de moagem em pequena escala. Esta abordagem permitiu identificar a hidroxipopilcelulose (HPC) como o estabilizante mais adequado ao ITZ, reduzindo o tamanho de partículas de forma mais eficiente, em menor tempo de moagem. Além disso, os resultados sugerem que o tamanho de partícula, após 4 h de moagem, não foi alterado significativamente quando a concertação de ITZ passou de 10% para 20%, independentemente do tamanho de pérolas usadas. Essa possibilidade de produzir uma formulação com o dobro da concentração de ITZ sem afetar significativamente o tamanho de partícula se apresenta como uma vantajosa característica do processo produtivo em desenvolvimento. No entanto, vale ressaltar que embora o fármaco seja o mesmo em todas as formulações, bem como a composição da formulação, a variação nas perolas usadas na moagem pode impactar a morfologia, distribuição do tamanho, energia de superfície e estabilidade da suspensão, fatores estes que podem alterar o desempenho de uma formulação em relação ao seu perfil de dissolução. Ressaltando-se a importância da continuidade do projeto, avaliando-se o impacto da mudança das pérolas no perfil de dissolução das formulações contendo 20% de ITZ.

Bolsista: THAIS SILVA SANTOS
Orientador(a): MARINA CAMPOS ARAUJO
Resumo: A avaliação da alimentação na infância é fundamental para o monitoramento doestado nutricional, compreensão da situação de saúde infantil, formulação derecomendações alimentares e avaliação de intervenções nutricionais. No entanto, osmétodos tradicionais de coleta de dados enfrentam desafios como altos custos, baixaadesão e limitações na precisão. Nesse cenário, o avanço das tecnologias digitaispossibilitou o desenvolvimento de ferramentas mais eficientes, interativas e acessíveis.Dentre elas, destaca-se o aplicativo CADE Consumo Alimentar no Domicílio e naEscola (Registro INPI: BR512021001151-1), primeira ferramenta digital voltada àavaliação quantitativa e qualitativa da alimentação de crianças brasileiras de 4 a 9 anos,em diferentes ambientes, por meio de autorrelato. O presente estudo teve como objetivoavaliar a usabilidade do aplicativo e propor melhorias. A ferramenta foi disponibilizadapara dispositivos móveis (smartphones e tablets) com sistema Android e oferece trêsinterfaces principais: (1) escolar, que utiliza um registro alimentar; (2) domiciliar, quecontempla estabelecimentos similares e serviços de entrega, por meio de recordatório de24 horas de múltiplos passos aliado a um questionário de propensão alimentar; e (3)interface para digitação de dados dietéticos previamente coletados. Entre asfuncionalidades da ferramenta, destacam-se o detalhamento dos alimentos consumidos,com perguntas sobre preparo e medidas caseiras ilustradas, registro fotográfico dasrefeições, lembretes para preenchimento e coleta de informações sobre o contexto dasrefeições. A usabilidade foi avaliada com base na escala System Usability Scale (SUS),que mede a experiência do usuário por meio de 16 perguntas, gerando um escore de 0 a100, classificado de F (percepção negativa) a A (percepção positiva). Além disso, foramincluídas sete perguntas qualitativas para explorar potenciais melhorias na utilização doaplicativo. Participaram 50 avaliadores no ambiente escolar e 14 responsáveis noambiente domiciliar, que concluíram todas as etapas da avaliação. O preenchimento dainterface domiciliar foi realizado no dia seguinte ao registro escolar, contemplando omesmo período alimentar. Adicionalmente, graduandos e profissionais da área denutrição treinados também participaram do preenchimento das informações e daaplicação do questionário SUS. Após a utilização do aplicativo, todos os participantesforam convidados a fornecer um feedback sobre sua experiência por meio de umquestionário eletrônico no Google Forms. Os resultados mostraram que as médias dosescores do SUS no âmbito escolar e domiciliar foram, respectivamente, 78 e 70 pontos.A média total do escore SUS, considerando ambas as interfaces, foi deaproximadamente 76 pontos. De acordo com a classificação de usabilidade, o aplicativo,tanto na interface escolar quanto domiciliar, foi classificado como "C" (boausabilidade). Os dados quantitativos foram analisados de forma descritiva, por meio demedidas de tendência central e dispersão, além da frequência das respostas. As respostasqualitativas evidenciaram a praticidade e o caráter didático do aplicativo como pontospositivos, embora tenham sido identificadas limitações, principalmente na interfacedomiciliar. De modo geral, o aplicativo CADE apresentou boa usabilidade. Osresultados obtidos orientam o aprimoramento da ferramenta, com propostas demelhorias em suas interfaces e funcionalidades, a fim de torná-la mais intuitiva,eficiente e alinhada às necessidades dos usuários, além de ampliar a completude dasinformações alimentares registradas.

Bolsista: KARINA VIEIRA BANDEIRA
Orientador(a): VITOR ENNES VIDAL
Resumo: Estima-se que 7 milhões de pessoas tenham doença de Chagas, e que mais de 70 milhões vivam sob risco de infecção. Não há vacina disponível e o tratamento para esta doença é tóxico e pouco eficaz. Desta forma, a comunidade científica tem estudado novos alvos para tratamento, e entre eles podemos as peptidases. Em tripanossomatídeos, as peptidases são essenciais na interação parasito-hospedeiro, e algumas destas ainda aguardam estudos mais detalhados. Nesse sentido, as cisteína peptidases da família das calpaínas estão envolvidas em diversos processos patológicos e encontram-se expandidas no genoma do agente etiológico da Doença de Chagas, o Trypanosoma cruzi. Nesse projeto, pretendemos analisar a função individual das calpaínas através da nova e promissora metodologia de edição gênica por CRISPR/Cas9 para melhor compreender o papel das calpaínas no T. cruzi. Até o momento, foi possível desenhar os oligonucleotídeos que servirão de RNA guia (RNAg) para deleção de 3 calpaínas pelo sistema de CRISPR/Cas9, além dos oligos que serão utilizados nas reações de amplificação dos genes das calpaínas selecionadas. Um desses RNAg, correspondente a uma calpaína que possui a tríade catalítica conservada, foi transfectado na cepa CL-Brenner do T. cruzi, juntamente com um plasmídeo contendo a endonuclease Cas9 e um gene de resistência ao antibiótico G418. Os clones gerados após a transfecção foram submetidos a ensaios de seleção clonal para selecionarmos os clones que apresentavam o perfil mais compatível com a deleção total da calpaína estudada e inserção de um gene de resistência ao antibiótico Puromicina. Três diferentes clones apresentaram um crescimento celular menor do que a cepa controle nos ensaios de proliferação. Em seguida, pretendemos avaliar os efeitos da deleção desta calpaína: 1) na ultraestrutura dos clones gerados; 2) no potencial de metaciclogênese do parasito; e 3) na infectividade aos hospedeiros vertebrado e invertebrado. Dessa forma, mais estudos são necessários para aprendermos sobre o real papel desempenhado pelas calpaínas no ciclo de vida do T. cruzi.