Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 3

Bolsista: Maria Eduarda Rodrigues Miguel
Orientador(a): Maisa da Silva Araujo
Resumo: A malária causada pelo P. vivax apresenta grandes desafios para seu estudo e consequentemente para controle. A ausência de uma cultura contínua in vitro de P. vivax, a escassez de estudos sobre hipnozoíticos e a relação patógeno-vetor são grandes desafios para sua eliminação. A Plataforma de Produção e Infecção de Vetores da Malária (PIVEM) tem superado esses desafios, realizando infecção ex vivo para estudar a relação parasito vetor usando o modelo experimental Anopheles darlingi-P. vivax. A PIVEM tem avançado na padronização de modelos experimentais utilizando Anopheles darlingi colonizados para infecção com P. vivax, permitindo maior controle nas análises de infectividade e contribuindo para o entendimento da interação parasito-vetor. Adicionalmente o grupo tem tentado estabelecer métodos de cultura a partir de gametócitos criopreservados ao mesmo criopreservação de esporozoítos. A criopreservação desempenha um papel essencial no estudo da malária, pois permite superar algumas dessas limitações. Ao congelar amostras, torna-se possível realizar pesquisas fora das áreas endêmicas e das variações sazonais, preservando as propriedades dos materiais biológicos sem alterações aparentes. Isso não apenas impulsiona novos mecanismos de estudo, mas também oferece insights cruciais para o desenvolvimento de tratamentos e vacinas mais eficazes. Além disso, a criopreservação desempenha um papel crucial na sobrevivência dos gametócitos presentes no sangue dos pacientes, possibilitando sua reintrodução em mosquitos e, assim, reativando o ciclo da malária. No caso de esporozoítos, os mesmos podem ser usados nas invasões de hepatócitos para estudo da fase hepática de P. vivax. Este aspecto dinâmico da criopreservação abre portas para um entendimento mais profundo da doença e suas interações, proporcionando uma base sólida para estratégias de controle e prevenção mais robustas. O principal objetivo foi investigar se os gametócitos de P. vivax preservados por congelamento poderiam manter a capacidade de infectar mosquitos do gênero Anopheles darlingi, contribuindo para o desenvolvimento de modelos experimentais que permitam estudos em períodos e locais fora das áreas de transmissão ativa. Para isso, comparamos a gametocitemia antes e após a criopreservação, desenvolver uma metodologia para infecção de mosquitos com sangue criopreservado e padronizar um protocolo de purificação com maior rendimento. Foram testados dois protocolos distintos de congelamento e descongelamento, além da implementação de uma etapa de purificação com Percoll. As infecções experimentais por DMFA foram realizadas na PIVEM, com análise da parasitemia e gametocitemia por microscopia e contagem de oocistos nos mosquitos. O protocolo I não trouxe resultados positivos em termos de infecção. Já o protocolo II, que exigiu menos manipulação, teve um desempenho um pouco melhor, com algumas infecções observadas, embora ainda em níveis muito baixos, o que é inviável para estudos sobre a transmissão. A purificação com Percoll também não aumentou a infectividade, possivelmente por causa do estresse no parasita e o longo período de manipulação das amostras, inviabilizando os gametócitos. Mesmo sem atingir os resultados esperados, o projeto trouxe muito aprendizado prático e teórico, e deu base para o início de um novo subprojeto voltado à adaptação de cepas de P. falciparum em cultivo in vitro.

Bolsista: NATHALIA DE BEM VERDAN LOPES
Orientador(a): CLAUDIA BONAN JANNOTTI
Resumo: Introdução: O projeto principal intitulado Cuidado integral às situações de aborto na APS do SUS visa contribuir para a diminuição da morbidade e mortalidade materna por aborto, a melhoria da assistência à saúde sexual e reprodutiva e a garantia dos direitos reprodutivos de mulheres e pessoas que gestam. No Brasil e no mundo, abortos inseguros constituem causas relevantes de morbidade e óbito, afetando principalmente indivíduos negros e em situação de pobreza. A literatura internacional aponta que o oferta de cuidado ao aborto nos níveis primários de atenção à saúde, seja em países com legislações mais permissivas ou mais restritivas, melhora o acesso e a segurança do procedimento, tem impactos importantes sobre os indicadores de saúde reprodutiva. O subprojeto de iniciação científica intitulado Barreiras e oportunidades para o cuidado integral às situações de aborto na APS: experiências nacionais e internacionais se volta ao estudo de experiências internacionais de cuidado ao aborto nos níveis primários de cuidado à saúde, incluindo a provisão do aborto medicamentoso, examinando potencialidades e limites dos variados modelos, de modo a contribuir para a discussão sobre maior participação da Atenção Primária à Saúde no Brasil, na assistência às pessoas em situação de aborto.Objetivos: o projeto principal objetiva compreender barreiras profissionais e institucionais para a atenção às situações de aborto na APS do SUS e desenvolver subsídios para a elaboração de linhas de cuidado integral voltadas a mulheres e pessoas que gestam nessas situações. No subprojeto, propõe-se uma revisão das experiências internacionais de oferta de cuidado ao aborto, inclusive medicamentoso na atenção primária e análise de variados modelos à luz das particularidades socioeconômicas e culturais de cada país. Por fim, pretende-se discutir as possibilidades e desafios da conjugação cuidado integral e tecnologia leves (Merhy e Franco, 2003) em modelos de cuidado ao aborto na APS, em território brasileiro.Método: o projeto principal é um estudo qualitativo sobre experiências, conhecimentos, percepções, atitudes e valores de profissionais de saúde da APS no que concerne ao aborto. A produção de dados se dá por meio de grupos focais, entrevistas individuais e painel de especialistas, além de uma revisão sistemática e algumas revisões de escopo.Para a revisão de bibliografia do subprojeto, a metodologia adotada será estruturada em duas etapas principais. A primeira consistirá na elaboração de um protocolo de revisão de escopo, com o objetivo de garantir a observância dos 20 itens obrigatórios previstos no PRISMA - Extension for Scoping Reviews. Na etapa subsequente, será realizada a revisão de escopo propriamente dita, cujo tema central será: A participação da Atenção Primária à Saúde nos itinerários para a interrupção da gravidez prevista em lei: revisão de escopo.Resultados esperados: Com base na revisão das experiências internacionais, será possível qualificar as discussões sobre a atenção integral às situações de aborto na Atenção Primária à Saúde no Sistema Único de Saúde, compreendendo melhor os desafios profissionais, institucionais, culturais e normativo-legais para a construção de linhas de cuidado integral em nosso país. Resumo das atividades desenvolvidas pela bolsista até abril de 2025: reuniões periódicas com a orientadora e o grupo de pesquisa; apoio às atividades da pesquisa de campo; participação em oficinas sobre cuidado integral ao aborto; participação em oficinas sobre o método do grupo focal; apresentação de trabalho na Semana de Integração Acadêmica da UFRJ; apresentação de trabalho no XIV Seminário de Internacionalização da Produção do Conhecimento em Enfermagem; treinamento em métodos de revisão de literatura; revisão de escopo internacional sobre modelos de oferta de cuidado ao aborto nos níveis primários de atenção à saúde; preparação de resumos para Congresso da Alames e da Abrasco.

Bolsista: Gabriela Louise da Silva Moreira
Orientador(a): CLAUDIA MAGALHAES CALVET ALVAREZ
Resumo: A doença de Chagas, causada pelo protozoário flagelado Trypanosoma cruzi, afeta milhões de brasileiros e ainda não possui tratamentos efetivos para a fase crônica. Os principais fármacos utilizados apresentam muitos efeitos colaterais e falham em combater os sintomas desencadeados pela fibrose no tecido cardíaco dos portadores de cardiomiopatia chagásica. Butenolídeos e derivados de piperina já demonstraram ação antiparasitária em outros estudos. SRPIN e derivados, por sua vez, são candidatos a apresentarem ação antifibrótica e antiparasitária, já que o parasito apresenta quinases análogas às da família Serina Arginina, alvos destes compostos. Nossos ensaios de triagem de atividade tripanocida de compostos utilizando parasitas geneticamente modificados mostraram que um derivado de piperina e um butenolídeo apresentaram ação antiparasitária, mas baixos índices de seletividade. SRPIN e derivados, no entanto, apresentaram atividade antiparasitária potente contra as formas amastigotas e tripomastigotas, IC50 dez vezes menor do que a principal droga de referência para o tratamento da doença de Chagas, Benzonidazol, junto com índices de seletividade significativos. Derivados de SRPIN também apresentaram atividade anti-fibrose em modelos de cultivo 2D e 3D de fibroblastos cardíacos e cardiomiócitos infectados com T. cruzi através de detecção com Sirius Red/Fast green e imunofluorescência.

Bolsista: JUAN VITOR GOMES DE SOUZA
Orientador(a): FABIO FARIA DA MOTA
Resumo: Entre os Acinetobacter destacam-se patógenos bacterianos Gram-negativos que suscitam grande preocupação clínica, em especial a espécie A. baumannii que é considerada de prioridade crítica pela OMS, dada a sua capacidade de induzir infecções nosocomiais graves, respiratórias ou sistêmicas. Além da grande capacidade de adquirir novos genes, o amplo perfil de multirresistência apresentado às diferentes classes de antibióticos reduzem consideravelmente as opções terapêuticas e a sua eficácia. Essa situação leva uma busca urgente por novos alvos terapêuticos para limitar a proliferação destes agentes. Neste contexto, a utilização de milhares de dados genômicos disponíveis se torna atraente para a compreensão dos sistemas gênicos essencialmente envolvidos no estabelecimento da infecção ou que possam contribuir para a evasão do sistema imune inato. Este estudo se propõe a utilizar genômica comparativa, bioinformática e ciência de dados para compreender quais os fatores genéticos de Acinetobacter possivelmente contribuem durante a infecção. Inicialmente 9.590 genomas de Acinetobacter foram classificados quanto a sua origem de isolamento, e após a redução da clonalidade, os genomas divididos entre clínicos e não-clínicos, tiverem seus genes agrupados em ortólogos, e as frequências de ocorrência comparadas. Ortólogos mais associados a isolados clínicos tiveram suas anotações funcionais recuperadas e relacionadas a mecanismos de virulência e adaptação ao hospedeiro, a partir da análise funcional e consultas à literatura. Espécies de relevância clínica formaram um ramo filogenético distinto das espécies ambientais de vida livre. Entre as estruturas análogas a fímbrias destacaram-se Fim, Csu e Fha, que segundo a literatura estão potencialmente envolvidos na adesão e invasão das células epiteliais humanas, e até na apoptose. Além do sistema de transporte TonB, o sideróforo acinetobactina se destacou como o meio de captação de ferro entre os isolados clínicos. O zinco se destaca como um cofator estrutural da metalo-chaperona ZigA que interage com o sistema de utilização de histidina Hut para a captação e liberação de complexos de histidina ligados ao zinco. O sistema Hut também permite que Acinetobacter patogênicos utilizem a histidina como fonte de carbono, nitrogênio e energia, além de produzir amônia. A enzima xantina desidrogenase (XDH) está muito mais presente em isolados clínicos e possivelmente está envolvida em uma via de utilização de moléculas encontradas no hospedeiro, como purinas, hipoxantinas e xantinas, e sua conversão até urato, que é convertido pelo sistema hpx até alantoato, e em seguida até uréia pela enzima allantoicase. A uréia é então degradada pela ação da urease até dióxido de carbono e amônia. A liberação da amônia eleva o pH favorecendo a persistência de bactérias dentro de células fagocitárias. Estudos anteriores observaram que a amônia produzida pela urease desempenha um papel fundamental na regulação do pH dos fagossomos e na formação de megassomas, sendo essencial para a sobrevivência de bactérias, como o Helicobacter pylori, em macrófagos. A acidificação dos fagossomos é um mecanismo de defesa crucial do hospedeiro, e qualquer elevação no pH pode prejudicar a eliminação de certos patógenos. Os dados indicam que a amônia resultante da atividade da urease influencia o ambiente intrafagossômico de maneira a favorecer a sobrevivência do H. pylori. A partir das observações deste estudo e dados da literatura, acreditamos que Acinetobacter clínicos também poderiam estar utilizando uma via metabólica similar a hpx observada em K. pneumoniae para levar purinas, xantina e outras moléculas do hospedeiro até uréia, degradá-la até amônia, obtendo energia, carbono, nitrogênio, e elevando o pH intrafagossômico para favorecer a evasão do sistema imune inato, permitindo a sobrevivência, o estabelecimento da infecção e a rápida multiplicação nos tecidos invadidos antes que uma resposta imune específica possa ser estabelecida.

Bolsista: PEDRO HENRIQUE OLIVEIRA DE SOUZA
Orientador(a): CLAUDIA MAGALHAES CALVET ALVAREZ
Resumo: Justificativa e Relevância. A fibrose intersticial é um fator determinante para as manifestações patogênicas da doença de Chagas. Ensaios clínicos mostraram forte correlação entre o percentual de fibrose tecidual e o baixo índice de fração de ejeção ventricular de pacientes com doença de Chagas 1. A única droga disponível para o tratamento da doença, o Benzonidazol, reduz a carga parasitária durante a fase crônica com eficácia variável, mas quando administrado a pacientes com cardiomiopatia avançada, não resultou em melhora do desfecho clínico2. Assim, o desenvolvimento de terapias visando o tratamento da fibrose são necessários para serem administrados em combinação com agentes tripanocidas, possibilitando uma melhora clínica significativa para cardiomiopatia avançada. Dados de fosfoproteômica do nosso grupo sugeriram a ativação das vias de sinalização DYRK2, AMPK2, NDRG2, JNK e p38 durante a infecção crônica experimental3 . Assim, nos propomos a validar esses alvos e avaliar se inibidores dessas vias podem prevenir o aumento de colágeno em modelos in vitro de fibrose cardíaca durante interação com T. cruzi. Objetivos. Investigar a fosforilação de DYRK2, AMPK2 e NDRG2 durante a interação fibroblastos cardíacos T. cruzi; quantificar a expressão de colágeno por FC tratados com inibidores destas vias de sinalização; avaliar o papel de inibidores de DYRK2, AMPK2, NDRG2, JNK e p38 na proliferação de FC após contato com o patógeno.Metodologia. Células e parasitas- Fibroblastos cardíacos (FC) serão purificados a partir de passagens sucessivas de culturas de cardiomiócitos, como descrito anteriormente4. Serão utilizadas para as análises formas tripomastigotas de T. cruzi, cepa Brazil, derivadas de cultivo celular; Western blot Proteínas totais de extratos de FC infectados por 48h pelo T. cruzi, ou FC estimulados com meio condicionado por parasitas ou soro de camundongos infectados serão separados por SDS-PAGE, transferidos para membrana de nitrocelulose e DYRK2, AMPK2, NDRG2, JNK e p38 fosforiladas serão detectadas com anticorpos específicos; Quantificação de colágeno- Culturas de FC e esferóides de FC e de cardiomiócitos nas mesmas condições acima serão tratadas com inibidores de DYRK2, AMPK2, JNK e p38, e RNAi para NDRG2. As culturas serão fixadas e coradas com corante Sirius Red/Fast Green por 2h, o que permite a medida semiquantitativa do conteúdo de colágeno e proteínas não colágenas em cultura5. Após lavagem, o corante é extraído das células com solução de NaOH 0,1 N /Metanol 1:1. As absorbâncias dos sobrenadantes resultantes são lidas no leitor de microplacas Spectramax M2 (Molecular Devices) a Lambda 540 e 605 nm5; Ensaios de proliferação celular- FC e esferóides de FC e cardiomiócitos serão cultivados e submetidos a estimulação de colágeno (via infecção direta, ou exposição a antígenos do parasita) e tratados com inibidores da via de sinalização. A proliferação será avaliada a partir da medida de incorporação 5-bromo-2-deoxiuridina (BrDU). Após fixação, as células serão incubadas com anticorpo anti-BrDU conjugado a peroxidase. Em seguida, o complexo antígeno-anticorpo será detectado pela adição do substrato tetrametilbenzidina (TMB) e a DO será obtida por leitura em Lambda450 nm em leitor de microplacas Spectramax M2 (Molecular Devices); Imunofluorescência indireta- - As amostras serão fixadas com PFA 4%. Após, serão permeabilizadas, bloqueadas e incubadas com anti-Fibronectina overnight a 4oC. Após, serão incubados com anti-Rabbit TRITC, corados com DAPI e montados em gota de DABCO para análise em microscopia de fluorescência confocal.

Bolsista: YASMIN DE CASSIA DA SILVA BALTHAR
Orientador(a): TATIANA MARON GUTIERREZ
Resumo: Introdução: A malária cerebral (MC) é caracterizada por uma neuroinflamação na qual a microglia se torna reativa e libera citocinas inflamatórias e espécies reativas de oxigênio que vão contribuir para o dano neuronal. Os mediadores secretados pela microglia vão ter efeitos em outras células. Todas as alterações causadas pela neuroinflamação podem ocasionar sequelas neurológicas e/ ou cognitivas irreversíveis. Estudos que elucidem os mecanismos celulares e moleculares envolvidos com os danos neurológicos se fazem necessários. Objetivo: Realizar uma padronização tanto para a escolha do percentual de soro fetal bovino completo e depletado, SFBc e SFBd, em meio de cultura RPMI 1640, como também para a escolha da concentração ideal de heme em um modelo in vitro para avaliação da produção de mediadores inflamatórios e disfunção mitocondrial na microglia. Metodologia: O estudo foi realizado em células microgliais da linhagem BV-2. A atividade metabólica e viabilidade celular foram avaliadas pelo ensaio com o reagente PrestoBlue em um primeiro momento após a incubação com diferentes percentuais de SFBc e SFBd que foi avaliada em cinética e em um segundo momento a partir dos dados obtidos com a primeira parte da padronização foram realizadas as mesmas análises após a incubação com concentrações crescentes de heme (10; 20; 30; 40; 60; 80; 100 µM). Para isso, a BV-2 foi plaqueada (5×10 células/poço) em placas de 96 poços preta de fundo chato transparente e após 24h as diferentes condições de percentuais de SFBc e SFBd foram adicionadas e incubadas por 1, 2, 3, 4, 5 e 6 horas (h), ou em um segundo momento as concentrações de heme foram adicionadas e incubadas por 6h em estufa umedecida a 37°C e 5% de CO. As análises foram realizadas de acordo com as instruções do fabricante. As células metabolicamente ativas converteram a resazurina em resofurina por oxiredução. Os dados foram obtidos por análise de fluorescência com comprimento de onda de excitação e emissão em 560 e 590 nm, respectivamente, realizada em leitor de placa (SpectraMax M3- Molecular Devices). A dosagem de óxido nítrico foi realizada de forma indireta através do método de Griess modificado pela quantificação de nitrito no sobrenadante de culturas de BV2. Os dados foram obtidos por análise espectrofotométrica em leitor de placa no comprimento de onda de 540 nm. Resultados e Conclusão: Em conjunto, os dados sugerem que tanto a ausência de completa de SFB (0%) quanto a adição de 10% de SFBd (SFBd, 10%) alteram de forma semelhante o metabolismo celular, promovendo um aumento na atividade de desidrogenases totais, o que se reflete em viabilidades celulares comparáveis. Nossos dados indicam que o heme apresenta citotoxicidade acima de 30% a partir da concentração de 40 µM inviabilizando assim o uso das concentrações mais altas nas próximas etapas. Além disso, de forma preliminar, nossos dados são sugestivos de que o método de Griess não é aplicável neste modelo experimental. Os dados obtidos reforçam a necessidade de novos experimentos mais específicos, como a respirometria de alta resolução para melhor compreender se há ou não diferença entre o meio de cultura com 0% SFB e 10% SFBd na incubação de células de linhagem microgliais (BV-2) e a necessidade de novos experimentos com outras técnicas para avaliação da produção de mediadores inflamatórios, como ELISA.