Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 3

Bolsista: YASMIM FERNANDES ABREU
Orientador(a): ROMULO JOSE SOARES BEZERRA
Resumo: Os números ainda elevados de casos de Covid-19 no Brasil, considerado como o segundo país das Américas em incidência e mortalidade pela doença durante a pandemia, exige celeridade no desenvolvimento de estudos in vitro para avaliar a resposta imunológica, fatores de agravamento, tratamento, eficácia, efeitos colaterais de drogas antivirais, protótipos vacinais promissores e de cura. Com base nos mecanismos de ação de drogas antivirais, diversas abordagens terapêuticas têm sido propostas, com destaque para os inibidores da polimerase e os inibidores de protease. Entretanto, outras abordagens terapêuticas vêm sendo também avaliadas. Assim, o estabelecimento de tratamentos naturais, aprovados pelo FDA e em ensaios pré-clínicos como modelos in vitro, permitem maior agilidade na obtenção de resultados para o direcionamento de ensaios clínicos em humanos, chegando rapidamente à população. Neste contexto, o presente projeto tem como objetivo avaliar a resposta antiviral e imunomoduladora do composto fitoquímico Indol-3-carbinol (I3C), e dos compostos sintéticos Semicarbazona-ISAPROP e Semicarbazona-ISATINA, como uma nova abordagem de tratamento frente a infecção pelo SARS-CoV-2, nos modelos in vitro, em células de linhagem HEPG2, Vero E6, Vero CCL81, THP-1 e H1299. Foi realizado o cultivo de todas as linhagens celulares; Avaliação de citotoxicidade; Ensaio de Gries e detecção de citocinas por ELISA. A baixa expressão de IL-1Beta observada nos resultados é um indicativo de que os compostos testados, como o I3C, Semicarbazona Isatina e Semicarbazona Isaprop, estão modulando a resposta inflamatória de maneira positiva, evitando uma ativação excessiva da inflamação. Dado que o teste de LDH indicou baixa citotoxicidade dos compostos e Griess indicou baixa ativação celular, aumentando os niveis de IL-10 do composto I3C em todas as concentrações das células Vero CCL81 e H1299. O resultado do composto Semicarbazona Isatina foi elevado para Vero CCL81 e semelhante na H1299. Em contrapartida, o composto Semicarbazona Isaprop apresentou baixos níveis na Vero CCL81 e níveis altos na H1299. De modo geral os resultados demonstram que os compostos I3C, Semicarbazona Isatina e Semicarbazona Isoprop apresentam baixa citotoxicidade e podem ter um efeito imunomodulador, especialmente o I3C, que se destacou por sua capacidade de induzir a produção de IL-10, uma citocina anti-inflamatória. Esses achados sugerem que o I3C tem um grande potencial terapêutico no controle de processos inflamatórios, e as Semicarbazonas demonstraram resultados promissores.

Bolsista: LUARA DA SILVA BRUNO ROMAR
Orientador(a): NATANA CHAVES RABELO VANI
Resumo: As doenças genéticas raras acometem de forma debilitante os indivíduos afetados. Considerando os desafios enfrentados pelos pacientes e seus familiares, o diagnóstico precoce é um aliado para promover uma melhor qualidade de vida a esses indivíduos. Técnicas moleculares como o Sequenciamento de Nova Geração (NGS) e o sequenciamento de Sanger são tecnologias que contribuem para os diagnósticos, além de auxiliarem em pesquisas na área da genética. O presente trabalho vem sendo realizado no Laboratório de Biologia Molecular/Medicina Genômica do Instituto Fernandes Figueira IFF/Fiocruz e tem como objetivo a validação de variantes genéticas identificadas previamente pelo sequenciamento de nova geração (NGS) em amostras de pacientes da rotina do Laboratório de Biologia Molecular/Medicina Genômica - SRDR/IFF. Essas análises serão divididas em dois blocos de investigação: Investigação 1 - Genotipagem para confirmação de variantes previamente identificadas por NGS, e Investigação 2 - Genotipagem familiar de variantes previamente identificadas por NGS. Adicionalmente, serão realizadas análises em bancos de dados e buscas na literatura que possam auxiliar na classificação de patogenicidade das variantes identificadas seguindo as diretrizes do Colégio Americano de Genética Médica (ACMG), além de contribuir para o depósito de variantes genéticas em banco de dados clínicos e genéticos. As amostras de DNA serão amplificadas por meio da técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), utilizando oligonucleotídeos iniciadores. Os produtos amplificados serão analisados por eletroforese em gel de agarose, submetidos à purificação por kit comercial e sequenciados pelo método de Sanger. A análise dos resultados dos sequenciamentos será feita por meio do software BioEdit. Os dados obtidos neste estudo poderão contribuir para a interpretação de variantes candidatas identificadas em indivíduos com DRs, o que favorece um diagnóstico mais preciso e adequado aos pacientes. Ademais, os resultados obtidos poderão contribuir para futuros estudos epidemiológicos e para a ampliação de linhas de pesquisa no Serviço de Referência para Doenças Raras/IFF/Fiocruz.

Bolsista: MAYNARA MARINS HATSCHEK
Orientador(a): JULIANA HELENA DA SILVA BARROS
Resumo: Os tripanosomatídeos são protozoários flagelados com grande diversidade morfológica e ciclos de vida complexos, que infectam uma ampla variedade de vertebrados e invertebrados. Estudos filogenéticos moleculares permitiram a classificação do gênero Trypanosoma em diversos clados, com espécies capazes de infectar peixes, anfíbios, répteis, aves e mamíferos. Canídeos silvestres como Cerdocyon thous, Chrysocyon brachyurus e Lycalopex vetulus, presentes no bioma Cerrado, possuem características ecológicas que os tornam importantes hospedeiros desses parasitas, favorecendo sua disseminação, inclusive para ambientes urbanos. Este projeto analisa amostras de sangue e pele desses animais utilizando diagnóstico molecular, com o objetivo de compreender sua relevância no ciclo de transmissão dos tripanosomatídeos e identificar a diversidade de parasitas que os infectam. Foram analisadas amostras de pele e de sangue de canídeos coletadas entre 2013 e 2014 em fazendas de gado de Cumari, Goiás, com apoio do Programa de Conservação dos Mamíferos do Cerrado (PCMC). A extração de DNA foi realizada com kits específicos (Promega(Marca Registrada) para pele e Qiagen(Marca Registrada) para sangue), seguida de quantificação no Qubit e armazenamento a -4°C. As amostras passaram por Nested-PCR utilizando primers para o gene 18S rDNA, com controles positivos e negativos para garantir a confiabilidade dos resultados. Os produtos positivos foram purificados e enviados para sequenciamento Sanger na Fiocruz. As sequências obtidas foram analisadas com os programas SeqMan, BLAST e MEGA v. 11. Por fim, uma rede de interação ecológica entre parasitos e hospedeiros foi visualizada usando o pacote pyCirclize, com base em uma matriz de dados de infecção. A quantificação das 48 amostras de sangue total revelou concentrações de DNA entre 3,5 e 313 ng/µL. No diagnóstico molecular, 12/48 amostras de sangue e 3/63 amostras de pele testaram positivo para DNA de tripanosomatídeos. As espécies infectadas foram Cerdocyon thous, Lycalopex vetulus e Chrysocyon brachyurus. O sequenciamento nucleotidico de Sanger identificou três espécies de tripanosomatídeos: T. caninum, T. cruzi e T. rangeli. Destaca-se o registro inédito de T. caninum em sangue de mamíferos silvestres (em C. thous e C. brachyurus), até então descrito apenas em cães domésticos. Já o T. cruzi foi encontrado em C. thous e L. vetulus, confirmando a participação dessas espécies no ciclo de transmissão. O T. rangeli foi detectado em três amostras, reforçando seu papel como parasito multihospedeiro. A análise da rede ecológica mostrou que C. thous apresentou maior riqueza de infecção por tripanosomatídeos, evidenciando seu papel de bioacumulador, enquanto L. vetulus e C. brachyurus mostraram menor diversidade parasitária, possivelmente por hábitos noturnos e dieta mais seletiva. A área de estudo, um agroecossistema em Goiás, favorece o contato entre animais silvestres, domésticos e humanos. O levantamento sorológico apontou possíveis casos de coinfecção e reatividade cruzada entre T. cruzi, T. caninum e Leishmania spp. Algumas amostras positivas no PCR foram negativas no ELISA, sugerindo infecções recentes ou limitações do teste. Em conjunto, os dados reforçam a importância dos canídeos silvestres como sentinelas na vigilância epidemiológica de tripanosomatídeos.

Bolsista: MARIA EDUARDA DO NASCIMENTO FERNANDES
Orientador(a): MARTHA CECILIA SUAREZ MUTIS
Resumo: Introdução: Os Testes Rápidos de Diagnóstico (RDTs) para malária baseiam-se na detecção de antígenos específicos de Plasmodium spp. e desempenham um papel crucial no diagnóstico das espécies, um pilar essencial para a eliminação da doença. Os RDTs mais comuns são aqueles que detectam a Proteína 2 Rica em Histidina (HRP2) de Plasmodium falciparum. A Proteína 3 Rica em Histidina (HRP3), também presente em P. falciparum, é estruturalmente análoga ao antígeno HRP2 e, por isso, pode reagir de forma cruzada nos testes. O antígeno HRP2 é codificado pelo gene pfhrp2, enquanto o antígeno HRP3 é codificado pelo gene pfhrp3. Estudos recentes têm relatado o aumento de populações de P. Falciparum com a deleção dos genes pfhrp2 e pfhrp3 em vários países endêmicos para malária, incluindo aqueles que fazem fronteira com o Brasil. Confirmar a presença desses parasitos em áreas endêmicas brasileiras é essencial, visto que indivíduos infectados por P. falciparum com deleções de pfhrp2/3 podem apresentar resultados falso-negativos nos RDTs. Este estudo teve como objetivo monitorar a deleção dos genes pfhrp2/3 em amostras clínicas de P. falciparum obtidas em 2 áreas endêmicas do Brasil, contribuindo para a vigilância genômica da malária.Método: Foram analisadas 274 amostras de indivíduos sintomáticos infectados por P. falciparum coletadas durante ações de vigilância epidemiológica nos municípios de Mâncio Lima, Rodrigues Alves e Cruzeiro do Sul, no Vale do Rio Juruá, Acre, e em Boa Vista, Roraima. O diagnóstico de Plasmodium spp. foi realizado por meio da técnica de gota espessa e confirmado pela detecção do gene 18S de rRNA via PCR. A detecção dos genes pfhrp2 e pfhrp3 foi conduzida de acordo com protocolos bem estabelecidos e padronizados pela OMS.Resultados: Das 274 amostras analisadas, 77 (28,10%) apresentaram deleção do gene pfhrp2, 160 (58,39%) deleção do gene pfhrp3, e 31 (11,32%) apresentaram deleção de ambos os genes (pfhrp2 e pfhrp3). Diferenças estatisticamente significativas foram observadas na frequência de deleções entre o Acre, que apresentou maior frequência de deleções de pfhrp3, e Boa Vista, onde a frequência de deleções de pfhrp2 foi mais elevada.Conclusão: Os achados deste estudo estão alinhados com estudos globais realizados em áreas de alta prevalência de parasitos mutantes. Os resultados destacam a importância do monitoramento contínuo da presença e disseminação de parasitos com deleção de pfhrp2 para assegurar a eficácia dos RDTs. Este monitoramento contribui para a vigilância genômica da malária e, consequentemente, para a eliminação da doença em áreas endêmicas

Bolsista: ANNA JULIA DA SILVA COELHO
Orientador(a): ELEN MELLO DE SOUZA
Resumo: A infecção pelo vírus zika (ZIKV) em mulheres grávidas está associada a uma variedade de defeitos congênitos incluindo microcefalia, calcificações intracranianas, doença ocular, déficits auditivos, restrição de crescimento intrauterino e aborto espontâneo, coletivamente denominada síndrome congênita do Zika (SCZ). Estudos demonstraram que o genoma do ZIKV foi detectado no líquido amniótico e no cérebro fetal, confirmando que o vírus atravessa a barreira placentária. No entanto, as alterações funcionais que ocorrem na interface materno-fetal e contribuem para o desenvolvimento da patogênese fetal não estão caracterizadas. Em adição, esta emergência torna urgente a busca pelo desenvolvimento de vacinas e/ou tratamento terapêutico específico para pacientes, em especial para gestantes infectadas pelo ZIKV. Neste contexto, o projeto será desenvolvido utilizando o modelo de infecção de trofoblastos humano (JEG-3), unidade funcional das vilosidades coriônicas da placenta humana, para investigação da secreção de fatores endócrinos e identificação de moléculas sintéticas da classe quinazolinona (QNZ) com ação antiviral. Até o momento, observamos que a infecção pelo ZIKV em cultura de trofoblastos reduz a produção de hormônios importantes para o desenvolvimento e manutenção da gravidez e identificamos a potencial atividade antiviral de moléculas quinazolinona, especialmente a QNZ7.

Bolsista: KAROLINE MOREIRA LEITE
Orientador(a): JUAN MIGUEL VILLALOBOS SALCEDO
Resumo: As hepatites virais constituem doenças endêmico-epidêmicas consideradas graves problemas de saúde pública no Brasil. Seu comportamento epidemiológico no mundo inteiro tem sofrido enormes mudanças nos últimos anos entre os infectados. Variações na sequência de resíduos de nucleotídeos dos genes correlacionados à resposta imunogenética têm sido descritas, sendo tais polimorfismos associados a mudanças da expressão da proteína e a diferenças interindividuais. A variação no quadro clínico dos pacientes acometidos por essa infecção intriga a ala popular, devido a diversidade quanto à associação do hospedeiro e vírus. A caracterização da resposta imunogenética frente a infecção por HBV e/ou HDV pode estar intimamente correlacionada ao perfil de regulação da resposta da imunidade inata mediada por citocinas e a participação de genes como os codificadores. Trabalhos que investigam polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) do genoma humano são potentes vias para o esclarecimento dos efeitos de evolução clínica de indivíduos infectados pelo vírus da hepatite B e coinfectados com vírus da hepatite D, descrevendo fatores potenciais para compreensão de alelos e/ou genótipos susceptíveis, ajudando futuramente a traçar novas alternativas de tratamento viral com potente espectro. Com isso, o objetivo visa analisar clinicamente a doença hepática avançada e identificar biomarcadores de hepatocarcinoma celular em pacientes infectados por HBV e/ou HDV. A metodologia consistirá em investigar o perfil clínico e epidemiológico a partir da análise de prontuários, além de identificar biomarcadores de hepatocarcinoma celular, buscando esclarecer eventuais influências de fatores imunogenéticos frente ao prognóstico clínico e permitindo avaliar se a evolução clínica do paciente, que é fortemente relacionada à resposta imunológica contra esta infecção, pode ser influenciada por questões genéticas previamente existentes no hospedeiro. Uma melhor compreensão deste cenário sobre o comportamento viral e a influência imunogenética tem certo potencial para identificação de possíveis formas de melhorias em abordagens terapêuticas que podem ser inseridas em sistemas de saúde.