Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 3

Bolsista: DANIEL VIEIRA DA SILVA
Orientador(a): LUCIANA VELOSO DA COSTA
Resumo: Bio-Manguinhos e Farmanguinhos são as duas unidades de produção de medicamentos da Fiocruz. Para assegurar a qualidade de vacinas e medicamentos produzidos nesses institutos, rígidas normas de Boas Práticas de Fabricação devem ser seguidas. Um programa de monitoramento ambiental é considerado um dos principais elementos para garantir que áreas de produção farmacêutica sejam mantidas dentro dos níveis estabelecidos de contaminação microbiológica. Para assegurar a eficiência desse programa, é fundamental que se atinja um nível adequado de identificação bacteriana. Para atingir esse objetivo, algumas metodologias automatizadas são utilizadas, como o sistema VITEK(Marca Registrada) 2 (bioMérieux), que é capaz de identificar microrganismos, como bactérias e leveduras. Porém, alguns microrganismos de origem ambiental, podem não expressar plenamente suas propriedades fenotípicas, o que poderá comprometer a correta identificação por meio desse sistema. Com isso, a tecnologia de Espectrometria de Massas por Ionização/Dessorção a Laser Assistida por Matriz por Tempo de Voo (MALDI-TOF MS) é uma grande aliada na identificação microbiana, sendo de simples execução e permitindo uma liberação dos resultados de forma rápida e com baixo custo. Contudo, frequentemente, os perfis metabólicos ou proteicos de espécies bacterianas ambientais, cujas necessidades nutricionais são as mais diversas, não são incluídos nas bases de dados dos sistemas de identificação utilizados. Portanto, o depósito dos microrganismos isolados de ambiente de produção farmacêutica em coleções microbiológicas se mostra uma prática interessante para a manutenção segura dessas linhagens, assim como para a garantia da sua autenticidade, auxiliando assim na tomada de ações preventivas e corretivas nas unidades farmacêuticas depositantes e no fornecimento dessas linhagens para estudos de tipificação que visam determinar as fontes de contaminação de produtos e/ou processos farmacêuticos. Neste sentido, este estudo teve como objetivo caracterizar linhagens isoladas em Bio-Manguinhos e Farmanguinhos através de análise proteômica e sequenciamento genético e criar a Coleção de Bactérias da Indústria Farmacêutica - subcoleção da CBAS (IOC/Fiocruz). Para isso, foram selecionadas 28 linhagens bacterianas isoladas de diferentes amostras de cadeias produtivas farmacêuticas, sendo 25 de Bio-Manguinhos e 3 de Farmanguinhos, e que já se encontravam criopreservadas em caldo infusão cérebro-coração (BHI) com glicerol 20% a < ou = -70°C. Em Bio-Manguinhos, as linhagens foram analisadas por MALDI-TOF MS utilizando o equipamento MALDI Biotyper(Marca Registrada) (Bruker) e, posteriormente, foram enviadas à CBAS, onde foi realizada a caracterização macroscópica, microscópica, a coloração de Gram e os ensaios de pureza e viabilidade. Na CBAS, também foi realizada a amplificação e o sequenciamento completo do gene 16S rRNA com uso do kit BigDye(Trade Mark) Terminator v3.1 Cycle Sequencing. Após a realização dos ensaios para autenticidade das linhagens, elas foram depositadas na CBAS, onde receberam um número de registro e foram criopreservadas < ou = -70°C. De 28 linhagens isoladas, foram identificados 20 gêneros bacterianos, o que demonstra uma grande diversidade de microrganismos em locais em que a sua presença desses seres é indesejada. A metodologia MALDI-TOF MS foi capaz de identificar apenas 4 (14,3%) das 28 linhagens com alta confiança, o que demonstra a necessidade de utilização de outras metodologias, como o sequenciamento do gene 16S rRNA, para que se obtenha uma identificação mais precisa desses microrganismos, o que é essencial para a tomada de ações preventivas e corretivas, em casos de desvios de processo, assim como para orientar o programa de sanitização das áreas produtivas. A criação da subcoleção de bactérias pode trazer inúmeros benefícios para a indústria farmacêutica, permitindo a criopreservação dessas linhagens, a sua autentificação e possibilidade de utilização em outros processos na indústria, sempre que necessário.

Bolsista: KEYLA RODRIGUES NOVAES VENUTO
Orientador(a): Luciana Lopes de Almeida Ribeiro
Resumo: A Doença de Chagas (DC), descoberta em 1909 por Carlos Chagas, é causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi e afeta cerca de 7 milhões de pessoas, principalmente na América Latina. Apesar da principal manifestação da doença ser cardíaca, alterações neurológicas vêm sendo descritas desde a sua descoberta. Na fase aguda pode ocorrer a meningoencefalite, e na fase crônica, alguns pacientes podem desenvolver o acidente vascular cerebral. Estudos apontam que alterações vasculares e microvasculares podem contribuir para o desenvolvimento de AVC. Nosso grupo demonstrou que a infecção experimental aguda causada pelo T. cruzi leva a microvasculopatia cerebral com redução da densidade capilar funcional, intensa inflamação microvascular, disfunção endotelial, aumento do estresse oxidativo, aumento de células CD3+ e F4/80+ no tecido cerebral e diminuição do fluxo sanguíneo cerebral. Estudos mostram comprometimento cognitivo tanto em pacientes quanto em modelo experimental. O déficit cognitivo está associado à neuroinflamação e à redução da plasticidade sináptica. A principal droga utilizada é o benznidazol, no entanto seus efeitos adversos sem o devido acompanhamento médico podem levar os pacientes a abandonarem o tratamento. Desta forma, se faz necessária a busca por novas alternativas terapêuticas. O selênio é um antioxidante envolvido em várias funções do sistema nervoso central com efeitos da neuroprotetores descritos. Ainda, seus efeitos benéficos foram observados na DC tanto em modelo experimental, quanto em pacientes. Nesse contexto, no presente estudo investigamos o efeito do tratamento com diferentes doses de selênio sobre o fluxo sanguíneo cerebral e a expressão de proteínas ligadas a neuroplasticidade (PSD-95 e Sinaptofisina) no tecido cerebral de camundongos durante a infecção aguda por T. cruzi.

Bolsista: MAYARA APARECIDA RODRIGUES DE SOUSA
Orientador(a): TACIO VINICIO AMORIM FERNANDES
Resumo: A resistência multidroga (MDR) constitui um dos principais desafios no tratamento de neoplasias hematológicas, como a Leucemia Mieloide Crônica (LMC). Entre os mecanismos moleculares que contribuem para a MDR, destaca-se a superexpressão da glicoproteína-P (P-gp), uma bomba de efluxo codificada pelo gene ABCB1, que embora desempenhe funções fisiologicas na absorção intestinal, na barreira hematoencefálica e no metabolismo de fármacos, torna-se um obstáculo terapêutico ao expulsar agentes quimioterápicos de células tumorais. Neste contexto, a linhagem celular multidroga resistente K562-Lucena 1, derivada da linhagem celular K562 e caracterizada pela superexpressão de P-gp, foi selecionada como modelo experimental para investigar substâncias capazes de modular a atividade dessa proteína. Este projeto propõe uma abordagem integrada, combinando dados experimentais com ferramentas computacionais de predição ADMET (Absorção, Distribuição, Metabolismo, Excreção e Toxicidade) para identificar moléculas com potencial inibitório da P-gp. O objetivo é desenvolver uma plataforma baseada em um método de modelagem computacional de relação quantitativa estrutura-atividade (QSAR), utilizando descritores moleculares, algoritmos e técnicas de aprendizado de máquina para construir um modelo preditivo robusto e confiável. Tal modelo auxiliará na seleção de candidatos a fármacos que vençam o caráter de células multidroga-resistentes. Inicialmente, foram selecionadas substâncias com potencial modulador da P-gp, incluindo compostos conhecidos, como verapamil, e moléculas oriundas do banco de amostras do Laboratório de Farmacologia Molecular e de Síntese de Farmanguinhos/FIOCRUZ. Estas substâncias foram utilizadas para a construção de uma base de dados contendo propriedades físico-químicas e referências de ensaios que indicam sua atividade frente à glicoproteína-P. As substâncias foram submetidas a ensaios de inibição da P-gp in vitro utilizando a linhagem K562-Lucena 1. Os ensaios experimentais foram realizados por citometria de fluxo e por espectrofotometria, a fim de comparar padrões semelhantes entre ambas metodologias. Os ensaios incluíram: (1) o ensaio clássico de inibição por citometria de fluxo, no qual as células foram expostas a 800 ng/mL de rodamina 123 , testada em combinação com verapamil, utilizado em cinco concentrações diferentes: 10 microM, 5 microM, 2,5 microM, 1,25 microM e 0,6 microM; (2) o ensaio com 800 ng/mL de rodamina 123 e 10microM de diferentes compostos, incluindo verapamil, ponatibine, ácido betulínico e ácido ursólico; (3) o ensaio de inibição por espectrofotometria, utilizando 5 microM de rodamina 123 e 10 microM de verapamil. As análises dos ensaios com o verapamil por ambos os métodos, foram interpretadas como auxílio do software GraphPad Prism versão 5.01. Os resultados demonstraram aumento da fluorescência intracelular de forma dose-dependente, comprovando a atividade inibitória do verapamil sobre a glicoproteína-P.

Bolsista: ANDRE LUIZ PIMENTEL SOLIS
Orientador(a): PAULO ROBERTO SOARES STEPHENS
Resumo: Resumo do Relatório Parcial Iniciação CientíficaProjeto: Mediação Escolar e Transtornos Específicos de Aprendizagem: Desafios, Barreiras e Possibilidades para uma Inclusão EfetivaAluno: André Luiz Pimentel SolisOrientador: Dr. Paulo Roberto Soares StephensCoorientador: Luã Teixeira (Doutorando)Laboratório: LITEB IOC/FIOCRUZO projeto tem como foco a relação entre mediação escolar e Transtornos Específicos de Aprendizagem (TEAp), com ênfase na percepção dos professores e nas estratégias de inclusão. O aluno iniciou suas atividades em fevereiro de 2025, participando de reuniões para alinhar metas, cronograma e metodologia. Trouxe como contribuição a ampliação do projeto anterior, inserindo discussões sobre a mediação escolar.Na primeira etapa, foram definidos os principais elementos da pesquisa (pergunta norteadora, objetivos, metodologia, etc.) e iniciada a revisão bibliográfica com foco na Discalculia do Desenvolvimento. Foram analisados 66 artigos, organizados em uma planilha com critérios como título, autores e fator de impacto.Na segunda etapa, André participou da criação de um questionário para investigar o conhecimento de professores sobre Dislexia e Discalculia, com o objetivo de identificar lacunas e desenvolver um guia informativo. O questionário foi submetido ao Comitê de Ética em Pesquisa do IOC.Além disso, está envolvido na criação de um jogo pedagógico voltado à inclusão de alunos com TEAp, especialmente em matemática e língua portuguesa, baseado na BNCC. O jogo está em fase inicial e terá como tema o sistema solar.

Bolsista: ELIAS DE ALMEIDA SOMBRA NETO
Orientador(a): Marcos Roberto Lourenzoni
Resumo: O projeto ATTILA 2.0, visa acelerar a prospecção e análise in silico de regiões VH e VL com potencial de reconhecimento específico, contribuindo para o desenvolvimento de anticorpos e fragmentos aplicáveis em terapias como CAR-T. A iniciativa envolve o desenvolvimento de uma plataforma web integrada que permite acesso à ferramenta ATTILA 2.0, à sua documentação, ao download do software e à visualização de dados derivados do sequenciamento por meio de dashboards interativos.A arquitetura da plataforma inclui um data warehouse otimizado, que viabiliza a consulta eficiente aos dados, e dashboards desenvolvidos em Metabase, oferecendo visualizações específicas para cada região CDR, com filtros dinâmicos e análise de propriedades físico-químicas. Além disso, foi implementado um sistema de autenticação e gerenciamento de usuários com integração entre o site e o aplicativo desktop do ATTILA, além de um mecanismo de upload e versionamento das distribuições da ferramenta. O conjunto de soluções permite aos usuários explorar dados estruturais e de sequência de anticorpos com mais agilidade, favorecendo aplicações em biotecnologia e imunoterapia.

Bolsista: ANA RITA BUENOS AIRES DA SILVA
Orientador(a): JULIANA HELENA DA SILVA BARROS
Resumo: Os tripanosomatídeos são uma família de protozoários flagelados e unicelulares pertencente à classe Kinetoplastida, que inclui parasitas importantes para a saúde humana e animal. O cão doméstico é um importante hospedeiro e reservatório de diferentes membros da família Trypanosomatidae, dos gêneros Leishmania e Trypanosoma. Em muitas áreas endêmicas de Leishmaniose Visceral também é descrita a ocorrência de Trypanosoma caninum infectando os cães domésticos. O conhecimento das taxas de infecção por Leishmania spp. e T. caninum em cães domésticos é importante principalmente no aspecto epidemiológico, o que ressalta a importância da adoção de ferramentas diagnósticas que possam discriminar com segurança os agentes etiológicos. A técnica de PCR (Reação em Cadeia da Polimerase) é um método utilizado para amplificar segmentos específicos de DNA, produzindo bilhões de cópias de uma região-alvo. O foco deste projeto é padronizar as reações de PCR específica para amplificação de T. caninum a partir de sequências da região parcial do gene ribossomal 18S rDNA, desenhado na fase anterior a este projeto e uma PCR duplex empregando o alvo molecular da região conservada dos minicírculos do kDNA do gênero Leishmania e um par de primers específicos para amplificação de DNA de Trypanosoma caninum. O emprego da PCR duplex neste estudo visa a identificação do parasito, não necessitando de etapas de sequenciamento nucleotídico, o que resulta em otimizar o diagnóstico final. Além disso, o custo é inferior, tendo em vista que as etapas de sequenciamento não fazem parte do diagnóstico. Incialmente, foi realizado o teste do limiar de detecção de DNA para T. caninum e um teste de especificidade do primer de T. caninum com DNA de Leishmania braziliensis e L. infantum, Trypanosoma vespertilionis, Trypanosoma desterrensis e Crithidia mellificae frente ao protocolo da reação de PCR específica para detecção molecular de T. caninum previamente estabelecido. Com o objetivo de realizar essas padronizações, foram testadas diferentes condições da PCR específica para T. caninum, como concentração de primer e volume da enzima. Foi realizado também um teste da PCR duplex para T. caninum e Leishmania spp. com amostras em diferentes concentrações de DNA. As condições ideais para amplificação do primer específico foram alcançadas com os protocolos utilizando 12,5 ng/µl de Master Mix Gotaq, nas três concentrações de primer testadas (10, 16 e 20 pmol). O protocolo utilizando o primer na concentração de 10 pmol destacou-se por ser o mais econômico. As amostras de DNA de T. caninum apresentaram amplificação a partir de 1 ng/µl, e na PCR duplex, até 0,1 ng/µl. Amostras de outros tripanosomatídeos não amplificaram, confirmando a especificidade do primer para T. caninum frente os parasitos testados. A PCR duplex mostrou-se aplicável ao diagnóstico rotineiro, com controles de 1 e 10 ng/µl. O uso de primers específicos permite um diagnóstico molecular preciso, auxiliando no diagnóstico diferencial da Leishmaniose Visceral Canina, principalmente em áreas endêmicas.