Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 3

Bolsista: Maria Gabriela Sarah Santos
Orientador(a): Milena Botelho Pereira Soares
Resumo: A doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, é uma enfermidade endêmica negligenciada na América Latina, responsável por importantes agravos cardíacos, incluindo inflamação crônica, fibrose miocárdica e distúrbios de condução elétrica, caracterizando a cardiomiopatia chagásica crônica (CCC). Na ausência de terapias eficazes para essa fase da doença, alternativas como o uso de células-tronco mesenquimais (MSCs) têm sido exploradas. Neste contexto, o presente estudo investigou o potencial terapêutico de MSCs geneticamente modificadas para superexpressar o fator inibidor de leucemia (LIF), denominadas MSC_LIF, em comparação com MSCs não modificadas (MSC-WT), em modelo murino de CCC. Camundongos C57BL/6 foram infectados com 1000 tripomastigotas da cepa Colombiana de T. cruzi por via intraperitoneal. Após seis meses de infecção, os animais foram distribuídos em grupos e tratados semanalmente, por via intravenosa, com MSC-WT, MSC_LIF ou veículo (PBS), quinzenalmente, por dois meses. O grupo controle não infectado foi mantido para comparação. A avaliação da resposta terapêutica incluiu análise funcional (teste de esforço em esteira), inflamação e fibrose cardíaca (colorações histológicas de hematoxilina-eosina e picrosirius red) e expressão da proteína de junção comunicante Cx43 (conexina 43), por imunofluorescência confocal. Os resultados demonstraram que os animais infectados apresentaram redução significativa no desempenho físico em relação ao grupo controle, sem recuperação funcional evidente nos grupos tratados com MSCs, até o momento da análise. No entanto, os animais tratados com MSCs, especialmente MSC_LIF, apresentaram redução significativa no infiltrado inflamatório e na deposição de colágeno no miocárdio, indicando efeito anti-inflamatório e antifibrótico das terapias celulares. Em relação à Cx43, observou-se uma redistribuição da proteína em animais não tratados, com acúmulo citoplasmático e lateralização da expressão. Nos grupos tratados, especialmente com MSC_LIF, houve uma restauração parcial do padrão fisiológico de distribuição da Cx43 nos discos intercalares, ainda que com intensidade de marcação reduzida. Conclui-se que as MSCs, em especial as MSC_LIF, foram capazes de modular a inflamação e a fibrose cardíaca em modelo murino de CCC, além de contribuir para a preservação da arquitetura de junções comunicantes, mesmo sem impacto funcional significativo observado no teste de esforço. Esses dados reforçam o potencial das MSCs como estratégia terapêutica adjuvante na CCC e indicam a necessidade de estudos complementares para elucidar seus efeitos sobre a função elétrica e molecular do miocárdio chagásico. As próximas etapas incluirão quantificação da expressão de Cx43, avaliação eletrofisiológica (ECG) e análise de expressão gênica de citocinas inflamatórias.

Bolsista: MARIA CLARA BARBOSA FERREIRA DE FRANCA
Orientador(a): FLAVIA MARTINEZ DE CARVALHO
Resumo: As fendas orais (FO) são anomalias congênitas de herança multifatorial, decorrentes de fatores genéticos e ambientais com distribuição distintamente associada a etnia, a origem geográfica e ao nível socioeconômico. Em sua epidemiologia as FO são tidas como uma das malformações congênitas mais comuns, possuindo uma prevalência global aproximada de 1 em 700 nascimentos, e mais especificamente por categoria de 7,2 - 10.000 nascimentos para fenda labial, 10,7 - 10.000 nascimentos para fenda palatina e 10,3 -1.000 nascimentos para fenda lábio-palatina. No Brasil esse valor tem sido descrito entre 0,36 - 1,54/1.000 nascimentos, com surgimento aproximado de 4.000 casos novos ao ano. As fendas apresentando-se de forma sindrômica responsável por 30% dos casos de FO, ou não sindrômica representando a maior prevalência englobando 70% de todos os casos de FO. Estudos envolvendo a morfologia craniofacial se mostram como um método em desenvolvimento objetivando a identificação de indicadores de predisposição genética as FO, onde numa família determinados membros possuem fendas visíveis e outros fenótipos subclínicos (úvulas bífidas, descontinuidade do músculo orbicular da boca, fenda submucosa e insuficiência velofaríngea). Nos últimos anos diversos estudos buscaram agentes etiológicos associados às FO, entre os genes associados o gene IRF6 (Fator Regulador do Interferon 6) foi fortemente associado às formas não sindrômicas e sindrômicas (SVW e SPP). O gene IRF6 está localizado no cromossomo 1q32.2, participa de uma família com nove interferons, entretanto ao contrário de sua família que regula o desenvolvimento e função no sistema imunológico, este regula a diferenciação e proliferação de queratinócitos epidérmicos, atuando no desenvolvimento epidérmico, craniofacial e cutâneo, essencialmente na fusão e adesão nos processos para a geração do palato e do lábio. Em vista do importante impacto que as FO causam na qualidade de vida tanto dos afetados quanto dos familiares, é necessário realizar o rastreio de famílias para direcionamento correto do tratamento ao indivíduo afetado, mas também uma avaliação de risco aos parentes próximos, pois em caso de suspeita de síndrome é importante o aconselhamento genético, sendo o status genético dos progenitores o fator preditor, visando assim também a promoção da conscientização do planejamento familiar.O objetivo geral do projeto é aprofundar o conhecimento sobre os principais fatores genéticos na causalidade das FO no Brasil para aplicação em aconselhamento genético bayesiano. Para cumprir o proposto para o bolsista de iniciação tecnológica (PIBITI) as principais atividades programadas são: (1) Realizar revisões bibliográficas associadas ao tema do estudo; (2) Ser capacitado em técnicas em biologia molecular, sendo elas extração de DNA, quantificação de DNA, PCR convencional, eletroforese em gel de agarose e PCR em tempo real; (3) Genotipar por PCR de tempo real os marcadores tipo SNVs no gene IRF6, em uma amostra de 100 famílias pertencentes a dois centros referência para tratamento e acompanhamento aos portadores de FO sendo eles o CEFIL-HMNSL e o CTAC-RJ, situados no Estado do Rio de Janeiro; (4) Conduzir um estudo de associação familiar entre os SNVs em IRF6 e as fendas orofaciais e calcular o risco combinado dos alelos a partir de um score genético que leve em consideração o genótipo dos indivíduos; (5) Investigar o formato da face em imagens tridimensionais, disrupção do músculo orbicular do lábio por imagens de ultrassonografia do lábio superior e presença de anomalias dentárias em pais de indivíduos portadores de FL/P com a finalidade de descrever o observado neste universo de famílias portadoras de FO coletadas e (6) Avaliar se a metodologia desenvolvida é eficaz para detectar algum padrão de repetição craniofacial característico.

Bolsista: CLAUDIA DE MATTOS GIOVANNINI BUSNARDO
Orientador(a): VERONICA MARQUES ZEMBRZUSKI
Resumo: A Esclerose Lateral Amiotrófica (ELA) é caracterizada como uma doença neurodegenerativa, de caráter progressivo, sem cura e fatal, responsável por causar fraqueza muscular devido à morte de neurônios motores, sendo uma doença com significativas variações em relação às suas apresentações clínicas, variando de sintomas não motores a alterações comportamentais e cognitivas; tem tanto caráter familiar como surgimento esporádico, que ocorre em 90% dos casos. A idade média de início dos sintomas ocorre entre 50 e 60 anos e o tempo de sobrevida podendo variar de três até 10 anos ou mais. No Brasil, estima-se uma incidência da doença em cerca de 1,5 casos por 100.000 habitantes. Em relação aos aspectos patológicos, as principais características da ELA envolvem a perda de corpos celulares dos neurônios motores inferiores e superiores, assim como a degeneração dos tratos corticobulbar e espinhal, levando à desnervação de músculos. Os testes genéticos se tornaram um aliado importante no diagnóstico da ELA, sobretudo mediante redução de custos de modo a torná-los mais acessíveis. Entre todos os genes previamente identificados como causadores da doença, o gene C9ORF72 é um dos mais frequentemente mutados. Esse gene possui uma repetição hexanucleotídica GGGGCC no seu primeiro íntron, que se caracteriza como a principal causa de doenças neurodegenerativas como a ELA e a Demência Frontotemporal (DFT). Entre os objetivos deste estudo, temos: 1. Analisar as características clínicas e demográficas dos 62 pacientes do Rio de Janeiro; 2. Realizar a genotipagem da expansão hexanucleotídica encontrada no gene C9ORF72; 3. Correlacionar os resultados obtidos após a genotipagem do gene com os dados clínicos dos pacientes na busca de informações que complementem o diagnóstico genético. Os pacientes incluídos na amostra foram previamente diagnosticados com ELA no Instituto de Neurologia Deolindo Couto (INDC/UFRJ) e amostras do seu DNA genômico foram extraídas a partir de sangue total. Foram realizadas duas reações de PCR para o sequenciamento de microssatélites no gene. A análise foi realizada na Plataforma de Sequenciamento de DNA do Instituto Oswaldo Cruz/FIOCRUZ - RJ (RPT01A) O programa PeakScanner 2.0 e a plataforma de análise de microssatélites da ThermoFisher foram utilizados para a verificação dos resultados. A maior parte dos pacientes estudados apresentava ELA do tipo esporádica e ausência de histórico familiar prévio; a maioria dos indivíduos era do sexo feminino e a idade média de início dos sintomas foi de 50 anos. Entre os sintomas mais comuns, fraqueza, fasciculações e atrofia foram os mais identificados, e entre o total de pacientes, 40,3% destes possuíam algum tipo de alteração comportamental. Em relação ao número total de pacientes, 97% destes apresentaram resultado na faixa normal de repetições, isto é, possuíam entre 2 e 29 repetições, não tendo, portanto, uma expansão caracterizada como mutante e causadora da doença. Dois pacientes apresentaram um número de repetições no segundo alelo acima da faixa normal de repetições, isto é, acima de 30 repetições, considerado patogênico. O estabelecimento de relações que associam o genótipo ao fenótipo da doença e auxiliam no seu rastreio é essencial no entendimento da sua fisiopatologia. Assim, o estudo permitirá o rastreio completo de genes já associados a doença, como o caso do C9ORF72, de modo a estabelecer um padrão fenotípico dos pacientes e correlacionar este com o perfil clínico de cada um, além de entender a variação genotípica da população local e auxiliar na melhor compreensão da doença e do desenvolvimento de métodos de diagnóstico mais precisos e tratamentos eficazes.

Bolsista: GIULIA LOPES DE SOUZA NEVES
Orientador(a): FELIPE FERRAZ FIGUEIREDO MOREIRA
Resumo: A ordem Coleoptera inclui os insetos popularmente conhecidos como besouros, é a mais diversa do planeta, contendo mais de 385.000 espécies descritas no mundo atualmente . No Brasil, são registradas cerca de 34.000 espécies atualmente, divididas entre quatro subordens (Adephaga, Archostemata, Myxophaga e Polyphaga), esse número correspondendo a aproximadamente 10% da fauna mundial. Os besouros possuem uma ampla distribuição geográfica, sendo encontrados em todos os continentes exceto no continente antártico, além de estarem incluídos em diversos tipos de ambientes aéreos e aquáticos de água doce, como também em alguns limítrofes ao ambiente marinho, embora apenas uma pequena percentagem esteja nos ambientes aquáticos. Adephaga é a segunda subordem mais diversa de Coleoptera, com aproximadamente 46.000 espécies descritas, distribuídas em 11 famílias, onde 8 são consideradas predominantemente aquáticas (Amphizoidae, Aspidytidae, Dytiscidae, Gyrinidae, Haliplidae, Hygrobiidae, Meruidae e Noteridae). A Mata Atlântica é a segunda maior floresta tropical da América do Sul, com uma área original de 1,6 milhões de hectares, embora sua extensão tenha sido reduzida a quase ¾ pela ação humana. É um importante bioma, que devido a uma história evolutiva complexa, é uma das regiões mais biodiversas do planeta. O bioma fornece importantes serviços ecossistêmicos para o mundo ao prover a mais de 100 milhões de pessoas água e alimentos, além da manutenção de um clima estável. Foram selecionadas 10 áreas ao longo da Mata Atlântica onde os dados sobre adephagos aquáticos são inexistentes ou escassos e há alto potencial para descoberta de espécies inéditas e novos registros de distribuição geográfica. Em cada uma, serão explorados os diferentes ecossistemas aquáticos. Em todas as áreas selecionadas, insetos aquáticos foram coletados por meio de técnicas ativas e passivas. Todo o material está sendo analisado com o auxílio de microscópio estereoscópio, em solução de álcool 96°GL, em placas de Petri e manuseados com pinças moles e de ponta fina, a fim de observar as estruturas. Os adéfagos estão sendo separados dos demais insetos na triagem para em seguida serem identificados até o menor nível taxonômico possível com o auxílio de chaves de identificação, assim como o auxílio de especialista. Ademais, uma lista está sendo elaborada a fim de registrar os táxons identificados. A maioria do material já coletado foi triado e identificado até o nível de gênero, seis a nível de espécie, em um total de 687 espécimes e 25 gêneros. Três famílias foram identificadas (Gyrinidae, Dytiscidae e Noteridae), sendo a família Gyrinidae a mais abundante, com um total de 381 espécimes, e a família Dytiscidae a mais diversa, com um total de 18 gêneros. As seis espécies identificadas são todas Thermonectus succinctus (Aubé, 1838). Alguns gêneros ocorreram em apenas um ponto de coleta. Aglymbus e Enhydrus ocorreram somente no Parque Estadual dos Três Picos; Microdessus e Liodessus ocorreram somente no Parque Nacional do Caparaó; Pachydrus, Anodocheilus, Mesonoterus e Canthysellus ocorreram apenas em Murici; Hydrodytes ocorreu apenas na Reserva Biológica de Sooretama; Desmopachria ocorreu somente na Reserva Biológica de Saltinho; Hydaticus, Rhantus e Hydroporus, ocorreram apenas no Parque Nacional da Serra do Itajaí; e Dytiscus e Megadytes ocorreram somente no Parque Nacional do Iguaçu.O projeto terá continuidade com a identificação dos espécimes em nível específico, assim como o levantamento de informações a fim de descobrir se há novos registros de táxons para as localidades que posteriormente vão gerar publicações.

Bolsista: ANA LUIZA ANACLETO DE SOUSA
Orientador(a): Gilvan Pessoa Furtado
Resumo: O Rituximabe foi o primeiro anticorpo monoclonal aprovado para tratamento oncológico, tendo como alvo a proteína CD20, expressa em linfócitos B maduros e ausente em plasmócitos e células-tronco hematopoiéticas. É amplamente utilizado no tratamento da leucemia linfocítica crônica e dos linfomas não-Hodgkin (LNH), doenças que representam um número significativo dos casos oncológicos no Brasil. Apesar do uso consolidado deste biofármaco, sua eficácia terapêutica pode ser aprimorada por técnicas de engenharia de anticorpos, destacando-se a geração de fragmentos variáveis de cadeia única (scFv). Esses fragmentos são menores, apresentam facilidade de manipulação laboratorial, custo reduzido de produção e podem ser otimizados por evolução dirigida e seleção via phage display, possibilitando ainda sua fusão a fragmentos cristalizáveis (Fc). O fragmento resultante, denominado fragmento variável de cadeia única fusionado ao fragmento cristalizável (scFv-Fc), permite avaliar tanto a capacidade de reconhecimento e ligação ao antígeno quanto a ativação de funções imunológicas efetoras. Nesse contexto, o presente estudo descreve o desenvolvimento e a caracterização preliminar de um scFv-Fc derivado do anticorpo monoclonal Rituximabe, direcionado contra a proteína CD20. O fragmento foi obtido com sucesso através de clonagem molecular e expressão recombinante em células CHO, seguido por purificação utilizando cromatografia de afinidade e exclusão molecular. A expressão correta e a integridade estrutural do scFv-Fc recombinante foram confirmadas por SDS-PAGE e Western blot, utilizando anticorpo secundário anti-Fc humano e proteína L como ferramentas específicas de detecção. O rendimento final obtido (13,1 mg/L de cultura) mostrou-se satisfatório, viabilizando o avanço para as próximas etapas do projeto, que envolvem a geração de clones com mutações sítio-dirigidas visando aumentar a afinidade ao antígeno CD20 e sua subsequente caracterização funcional. Espera-se que esses fragmentos recombinantes modificados possam oferecer eficácia terapêutica superior aos anticorpos convencionais atualmente disponíveis.

Bolsista: ERICA GONCALVES DE OLIVEIRA ALMEIDA
Orientador(a): VANIA REIS GIRIANELLI
Resumo: As violências ocorridas no ambiente escolar contribuem para que os estudantes se sintam inseguros na escola podendo levar ao absenteísmo, baixo resultado acadêmico e evasão. Além de afetar a saúde física e mental, levando a solidão, ansiedade, estresse, baixa autoestima, depressão, automutilação e suicídio. O objetivo do estudo é analisar a violência autoprovocada e interpessoal vivenciadas por escolares LBGTQIA+ brasileiros(as). A pesquisa baseia-se em revisão de escopo em curso sobre violência autoprovocada e interpessoal vivenciada pela população LGBTQIA+ brasileira e dentre as publicações identificadas serão selecionadas as que envolverem escolares. Os dados serão consolidados considerando: características do estudo, dos indivíduos, da violência e dos agressores. Um resumo descritivo será elaborado no formato de infográfico utilizando tabelas, figuras e/ou mapas, com base nas frequências das variáveis estudadas das pesquisas quantitativas; e exemplos de relatos de violência vivenciada pelos(as) estudantes disponíveis em publicações de pesquisas qualitativas. Foram identificados 613 estudos e exportados para o gerenciador de referências EndNote Web, sendo que 227 eram duplicados e foram removidos, totalizando 386 registros que foram avaliados pelos revisores. Destes, 147 atenderam aos critérios de elegibilidade na fase 1 e estão sendo avaliados na fase 2. Até o momento, foram identificados oito artigos elegíveis que envolvem escolares. Os resultados apresentados são preliminares e a fase 2 ainda está em curso. Espera-se que os resultados do estudo subsidiem as políticas públicas de enfrentamento das violências ocorridas em escolares LGBTQIA+.