Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 3

Bolsista: HEITOR GARCEZ MARTINS LOUZEIRO
Orientador(a): BEATRIZ FATIMA ALVES DE OLIVEIRA
Resumo: Apesar do curto período de atuação do bolsista Heitor Garcez Martins Louzeiro no projeto decorrente de uma substituição recente , sua participação foi marcada por engajamento, responsabilidade e rápida assimilação dos objetivos propostos. Demonstrou capacidade de adaptação ao conteúdo técnico da pesquisa, especialmente no que diz respeito à familiarização com os indicadores de saúde materna, ao uso das bases de dados secundárias (SIM e SINASC) e à interface do painel interativo Materna Vida. Até o momento, foram executadas as seguintes atividades.Executou a coleta, organização e padronização dos dados secundários provenientes do Sistema de Informação sobre Mortalidade (SIM) e do Sistema de Informações sobre Nascidos Vivos (SINASC), referentes aos anos de 2022 e 2023.Contribuiu para a alimentação e atualização da base de dados utilizada no painel interativo Materna Vida, favorecendo a construção de visualizações gráficas e mapas que evidenciam a distribuição temporal e espacial dos indicadores.Participou do processo de testes de navegação e usabilidade da interface do painel, contribuindo com sugestões para aprimoramento da interatividade e acessibilidade da plataforma.

Bolsista: ANNA RAQUEL ELIAS GOMES
Orientador(a): CARINA CANTELLI PACHECO DE OLIVEIRA
Resumo: A segurança dos alimentos está inserida dentro do contexto de Uma Só Saúde (One Health), tornando-se cada vez mais relevante o monitoramento da circulação viral em alimentos, frente aos surtos alimentares registrados mundialmente. A bovinocultura leiteira é um segmento importante para o desenvolvimento econômico, sendo o Brasil o 3º maior produtor mundial. Os vírus de transmissão entérica estão entre os principais patógenos causadores das Doenças de Transmissão Hídrica e Alimentar (DTHAs). Entre os alimentos envolvidos nos surtos alimentares, estão os de origem animal, como o leite e derivados. A contaminação pode ocorrer de diversas formas, no processo de manipulação, contaminação cruzada de pessoas ou animais, higiene inadequada ou pela falta de boas práticas durante a fabricação, possuindo alto impacto em saúde pública, e crescimento socioeconômico do agronegócio, comércio e turismo.No Brasil, de acordo com dados do Boletim Epidemiológico de Surtos e Doenças de Transmissão Alimentar, o leite e derivados lácteos foram os responsáveis por 6,7% dos surtos de DTHAs no período de 2012 a 2023. A vigilância de infecções virais transmitidas por alimentos é insipiente e embora estudos tenham reportado o possível papel de leite e derivados como veículos de transmissão, ainda não é preconizada pelas normativas brasileiras a avaliação viral como requisito para comprovação da inocuidade destes alimentos. Mundialmente, os norovírus e adenovírus humanos (HAdV) são considerados importantes agentes virais em surtos de gastroenterite aguda (GA) de origem alimentar. Os HAdV possuem importância epidemiológica e são recomendados como importante biomarcador viral de contaminação ambiental, sendo considerado na avaliação da qualidade da água, devido sua ampla distribuição, alta concentração, bem como estabilidade e resistência às condições ambientais adversas, devido sua constituição genômica (DNA fita dupla). O gênero Mastadenovirus é considerado patogênico para humanos, equinos, bovinos, ovinos, suínos, dentre outros mamíferos, considerando-se a possibilidade de transmissão zoonótica.O crescente aumento nos registros de envolvimento destes vírus em surtos e a crescente diversidade genética, reforçam a necessidade da implementação das vigilâncias epidemiológica e laboratorial no Brasil. Assim, durante o período de 2025-2027, amostras de leite cru de tanques de refrigeração obtidos das regiões Sudeste e Sul do país (Rio de Janeiro, Minas Gerais e Rio Grande do Sul) serão analisadas. Diferentes abordagens metodológicas visando melhor recuperação (concentração) e detecção viral (ensaio de qPCR comparado a metodologia de amplificação isotérmica, sigla LAMP) em leite cru serão avaliadas e padronizadas para o HAdV.Uma vez as metodologias disponíveis, o monitoramento para o HAdV poderá ser realizado, sendo utilizado como ferramenta de garantia da qualidade na cadeia produtiva e vigilância epidemiológica em diferentes regiões do Brasil. Os dados trarão informações sobre a qualidade sanitária, contribuindo na avaliação do risco associado ao leite cru, e auxílio em estratégias de prevenção/controle da contaminação, e melhorias na cadeia produtiva de laticínios, potencializando a expansão da bovinocultura leiteira no País. Os métodos padronizados (possuindo baixo custo e maior especificidade) serão disponibilizados para avaliações interlaboratoriais e assim validação da metodologia aqui proposta, para ações de esclarecimento de surtos e avaliação da qualidade deste importante insumo/alimento (Vigilância Epidemiológica e Sanitária), com perspectiva de inclusão da análise viral nesta matriz nas normativas sanitárias brasileiras.

Bolsista: Gabriel Lucca Ribeiro
Orientador(a): TANIA MARIA DE ALMEIDA ALVES
Resumo: O Instituto Nacional de Câncer (INCA) estimou, para o período de 2020 a 2022, o surgimento de 65,8 mil novos casos de câncer de próstata no Brasil, correspondendo a 62,95 novos casos a cada 100 mil homens. Este estudo tem como objetivo a bioprospecção de espécies vegetais visando à descoberta de extratos ativos contra a linhagem de adenocarcinoma de próstata humano (LNCaP), assim como realização do fracionamento de um extrato para isolamento de substâncias bioativas. Foram selecionados 115 extratos vegetais da extratoteca com histórico de atividade antitumoral contra MCF-7 para teste de triagem in vitro contra câncer de próstata. Nos ensaios antitumorais de triagem e IC50 células da linhagem LNCaP (3x104/poço) foram semeadas em placas de 96 poços, tratadas com extratos a 100 µg/mL, e incubadas por 24 h. A leitura foi realizada a Lambda595 nm pelo método de MTT. Para a caracterização química, foram empregadas as técnicas de cromatografia em camada delgada (CCD) em fase normal e cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC-UV). Para a detecção de flavonoides por CCD, foi utilizada fase móvel composta de acetato de etila, ácido fórmico, ácido acético e água (100:11:11:26) e como reveladores aminoetil difenilborinato 1% e polietilenoglicol 4000 5%. Para a detecção de alcaloides, foi utilizada uma solução de hexano, acetato de etila e trietilamina (65:25:10) como fase móvel, e o reagente de Dragendorff como revelador. Para a identificação dos flavonoides por HPLC-UV, o extrato foi injetado em coluna C18 (4.6 x 250 mm, 5 µm), usando fluxo de 1mL/min com gradiente de eluição de água e acetonitrila com 0,1% de ácido fosfórico. A detecção foi realizada no ultravioleta em Lambda210 e Lambda254 nm. O fracionamento em microescala foi realizado por UHPLC-DAD em coluna C18 (2,2 microm, 150 × 2,0 mm) a 40°C usando gradiente de água e acetonitrila contendo 0,1% de ácido fórmico, fluxo de 400 microL/min e as frações coletadas em placas de 96 poços. Na etapa da triagem, foram selecionados 3 extratos com citotoxicidade superior a 75% a saber Simarouba amara (EX384), Solanum lycocarpum (EX393) e Ruta graveolens (EX467), os quais prosseguiram para a determinação de IC50. Foram obtidos valores de IC50 correspondentes a 21,6 (EX384), 31,0 (EX393) e 44,8 µg/mL (EX467), em nível de inibição próximo à droga de referência bicalutamida (9,3 µg/mL). Iniciou-se com a caracterização química do EX467 por CCD para detecção de flavonoides. Após a revelação visualizou-se em câmara UV a 365nm, bandas de flavonoides nas cores amarelo, laranja e azul, assim como uma banda amarela com mesmo fator de retenção (Rf) do padrão de Rutina (0,4). Na análise para detecção de alcaloides visualizou-se bandas nas cores azul e lilás, e a revelação provocou mudança de coloração para marrom alaranjado no extrato e no padrão de Berberina utilizado. Estes resultados sugerem a presença de flavonoides e alcaloides no EX467. O perfil cromatográfico do extrato por HPLC-UV permitiu identificar alguns flavonoides. Uma mistura de padrões de flavonoides, contendo rutina, quercitrina, luteolina e crisina foi injetado e seus tempos de retenção (Rt) obtidos foram, respectivamente, 11,3, 12,5, 16,6 e 21,4 min. Através da sobreposição dos cromatogramas do EX467 e da mistura de padrões e comparação dos Rt, foi possível confirmar a presença dos flavonoides supracitados nas partes aéreas de R. graveolens. O EX467 foi fracionado em microescala por UHPLC-DAD e enviado para o ensaio de triagem antitumoral para identificação das frações bioativas. A caracterização química e fracionamento biomonitorado por UHPLC-DAD dos EX384 e EX393 será realizado posteriormente. Ao menos um extrato promissor será selecionado para fracionamento por HPLC preparativo e isolamento/identificação das substâncias bioativas por espectrometria de massas (UHPLC-MS) e ressonância magnética nuclear (RMN).Palavras-chave: Produtos naturais bioativos; câncer de próstata; extratos de plantas; linhagem LNCaP.

Bolsista: Alícia Ribeiro Aguiar
Orientador(a): Marcelo Luiz Lima Brandao
Resumo: O objetivo deste projeto foi realizar uma caracterização polifásica de linhagens do complexo Burkholderia cepacia (CBc) isoladas de uma indústria farmacêutica produtora de imunobiológicos. Foram avaliadas 372 linhagens do CBc isoladas no período de 2008 a 2023, de diferentes tipos de amostras coletadas em diversas etapas da cadeia produtiva. Destas, 40 linhagens foram selecionadas para os ensaios: caracterização fenotípica por VITEK(Marca Registrada) 2, caracterização proteômica por MALDI Biotyper(Marca Registrada) , caracterização molecular por sequenciamento completo do gene 16S rRNA, tipificação por MLST, e avaliação das relações genéticas e ocorrência de complexos clonais (CC) nas áreas de produção ao longo do período estudado. As 372 linhagens foram identificadas como pertencentes ao CBc sem distinção de espécie pelo VITEK(Marca Registrada) 2. Foram categorizadas em 51 grupos e 24 singletons, apresentando um total de 286 perfis distintos codificados de I-CCCLXXII, com uma taxa de 1,301 perfil/linhagem. O MALDI-TOF/MS identificou 40 linhagens em nove possíveis espécies: B. cepacia, B. cenocepacia, B. lata, B. metallica, B. pyrrocinia, B. vietnamiensis, B. latens, B. seminalis, e B. stabilis. O sequenciamento completo do gene 16S rRNA apresentou 27 possibilidades de espécies: B. aenigmatica, B. ambifaria, B. anthina, B. cenocepacia, B. cepacia, B. contaminans, B. diffusa, B. dolosa, B. lata, B. metallica, B. multivorans, B. orbicola, B. puraquae, B. pyrrocinia, B. savannae, B. seminalis, B. territorii, B. ubonensis, B. vietnamiensis, B. arboris, B. latens, B. stabilis, B. stagnalis, B. catarinensis, B. pseudomultivorans, B. glumae e B. oklahomensis. Uma linhagem apresentou percentual de identificação < ou = 97,70% (0,13%), sendo considerada com uma possível nova espécie. Após tipificação por MLST, foram descritos quatro novos alelos (1025, 1026, 1027, 1028) para o gene gltB, três (1504, 1505, 1506) para o gene gyrB, dois (955 e 956) para o gene lepA, e um (726 e 920, respectivamente) para os genes phaC e trpB. Até o momento, foi possível identificar os STs 102 (n=5; 12,5%), 762 (n=4; 10%), e 482 (n= 1; 2,5%); e seis novos descritos neste estudo: ST2484 (n= 19; 47,5%), ST2480 (n= 2; 5,0%), ST2482 (n= 2; 5,0%), ST2485 (n= 2; 5,0%), ST2481 (n= 1; 2,5%), e ST2483 (n=1; 2,5%). O gene recA é descrito como um bom marcador na identificação de espécies do gênero Burkholderia. A partir dos resultados deste alelo, todas as linhagens foram identificadas como pertencentes a espécie B. contaminans. Foi possível observar a formação de dois CC. O CC1 formado pelos STs 2484 e 2483, ambos descritos neste estudo; e o CC2 pelos STs 2481 e 482. A maioria das cepas avaliadas foi isolada de amostras de águas, e pode-se observar a maior ocorrência e predominância do ST2484 que foi predominante na indústria no ano de 2023. No presente estudo, o sequenciamento do gene recA possibilitou a identificação das linhagens como pertencentes à espécie B. contaminans. Conclui-se que: 1) a caracterização fenotípica demostrou uma grande diversidade de fenótipos entre as 372 linhagens avaliadas, com uma taxa de 1,301 perfil/linhagem; 2) a caracterização proteômica permitiu a identificação das linhagens a nível de gênero. Quando comparado ao resultado do sequenciamento do gene recA, que identificou todas as linhagens como pertencentes a espécie B. contaminans, todas as amostras teriam sido identificadas de forma errônea em nível de espécie; 3) O sequenciamento do gene 16S rRNA com o objetivo de diferenciar espécies do gênero Burkholderia não forneceu resultados conclusivos; 4) a tipificação por MLST resultado na identificação de nove STs distintos, sendo seis novos descritos neste estudo (ST2480-2485). Estes resultados demonstram que os ambientes de indústria ainda são pouco explorados, e estudos genéticos com essas linhagens e as isoladas de fontes clínicas é importante para avaliar seu potencial patogênico para humanos. Foi possível observar a prevalência do ST2484.

Bolsista: GUSTAVO CAVALCANTI DE ALBUQUERQUE
Orientador(a): Gabriel da Luz Wallau
Resumo: Com o avanço humano em áreas silvestres e as mudanças climáticas, o contato com mosquitos tem aumentado, elevando o risco de transmissão de doenças como Mayaro e Oropouche.. Este estudo buscou caracterizar o hábito alimentar de mosquitos silvestres em Pernambuco e gerar dados moleculares sobre espécies pouco estudadas. Mosquitos encontrados em Passira, interior de Pernambuco, foram coletados, armazenados e processados. O DNA das espécimes foi extraído e amplificado via PCR, utilizando primers específicos para identificar (por meio da Citocromo Oxidase subunidade 1) tanto os mosquitos quanto suas fontes alimentares (utilizando 2 conjuntos de primers, ModFVertR e VertFModR). De um total de 108 amostras (soma de amostras dos dois conjuntos de primers), 43 amostras foram selecionadas para serem sequenciadas por sequenciamento de Sanger. Foram identificados alguns vertebrados como fontes alimentares, incluindo aves, bovinos e humanos. Por fim, esses dados podem contribuir para o entendimento dos ciclos de transmissão e podem orientar estratégias de controle de vetores e mitigação de riscos à saúde pública.

Bolsista: ENZO CARVALHO AVILA
Orientador(a): MARCELO ALVES PINTO
Resumo: Introdução e Objetivos: com definição de 5 cepas de SARS-CoV-2 como variantes de preocupação em 2022 pela OMS através da observação de presença de mutações-chaves, além da possibilidade de infecção de biomodelos (com agravamento da doença) e a participação do miRNA no processo viral, objetiva-se a determinação do Mesocricetus auratus (hamster sírio) como modelo experimental para infecções por SARS-CoV-2, com avaliação de especificidades do fenômeno viral (como fenótipo da lesão e virulência), análise da expressão do miRNA e do perfil histopatológico, e com desafio do modelo através de anticorpos IgY anti-SARS-CoV-2. Justificativa: Pesquisas tornam-se necessárias para compreensão da interação entre agente infeccioso e hospedeiro uma vez que as mutações possibilitaram mudanças na glicoproteína spike, fundamental na infecção, além da possibilidade de análises acerca da função do miRNA. Metodologia: O projeto foi aprovado pela CEUA-Fiocruz LW-9-20 (termo aditivo P-16-20.4). O princípio de Russell-Burch baseia a parte experimental da pesquisa, através da redução, substituição e refinamento. 120 hamsters sírios serão alojados em laboratório de biossegurança nível 3 em salas com propriedades adequadas, com análises clínicas diárias pelo médico veterinário responsável do projeto (guideline ARRIVE). Eutanásia será realizada quando constatado sofrimento animal e/ou impossibilidade de acesso à água ou ração, com intervenção e ponto final humanitário. A inoculação viral administrada será preparada a partir de pacientes com COVID-19, com amplificação das amostras de SARS-CoV-2 e de Adenovírus. Métodos de imunomarcação para detecção de antígenos serão utilizados. Serão procurados marcadores inflamatórios e alterações morfológicas, com análise da expressão do miRNA através da colaboração com a plataforma de PCR (tempo real) da Fiocruz. Discussão de Resultados e Conclusões: O projeto está em andamento, mas ainda não pode se desenvolver em sua totalidade por causa das obras no prédio previamente utilizado pelo LADTV. Além de discussões metodológicas do projeto e de perspectivas futuras, um treinamento em biossegurança nível 3 será realizado, com preenchimento do formulário de Registro de Treinamento já realizado. Paralelamente, uma Revisão Sistemática sobre alterações fisiopatológicas multissistêmicas causadas por COVID Longa está sendo realizada. Com a retomada das atividades no prédio utilizado pelo Laboratório de Desenvolvimento Tecnológico em Virologia, o progresso do projeto será alcançado de forma definitiva. Perspectivas: Espera-se que, com a conclusão do projeto (2027), seja possível a caracterização de determinados marcadores que auxiliem na compreensão do padrão inflamatório do Mesocricetus auratus, além da definição com maior clareza do papel do miRNA, da proposta de anticorpos IgY e protótipo vacinal híbrido SARS-CoV-2-HEV. Outras Atividades Desenvolvidas no Período: desenvolvimento de Revisão Sistemática com orientação do Dr. Marcelo Alves Pinto, conclusão do QBA/online e de outros 5 cursos (com cargas horárias variando de 10h a 45h), realização de prática em capela (com paramentação e pipetagem), observação de práticas laboratoriais (como utilização de centrífuga, ação do agitador de tubos vortex, esterilização através da capela, realização de PCR em tempo real com a tecnologia Taqman, entre outras) e observação de eutanasia humanizada de biomodelos. Avaliação: A participação no projeto com orientação do Dr. Marcelo Alves Pinto e Co-orientação do Dr. Gentil Arthur Lins Bentes Mendonça de Vasconcelos é uma experiência incomparável. As possibilidades de compreender os processos de realização de projetos de pesquisa, com a aplicação de diversas metodologias e rigor científico são de extrema importância para a minha formação enquanto estudante da área da saúde, mostrando-me as diferentes etapas da prática científica e a importância da construção da pesquisa brasileira.