Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 3

Bolsista: BRUNNO ALEXANDER DOS SANTOS
Orientador(a): CECILIA JACQUES GONCALVES DE ALMEIDA
Resumo: Papel da Caveolina-1 e Caveolina-2 na regulação da resposta inflamatória de células endoteliaisAs caveolinas (Cav) são uma família de proteínas fundamentais para a formação de cavéolas e envolvidas na regulação de diversos processos celulares. Cav-1 e Cav-2 são abundantes em células endoteliais. Cav-1 interage e inibe a atividade das óxido nítrico sintases (NOS) reduzindo a produção de óxido nítrico (NO), com efeitos na vasodilatação, inflamação e angiogênese. Em estudo anterior, sugerimos que Cav-1 e Cav-2 tenham papel antagônico na resposta inflamatória que envolve a produção de NO durante a sepse. Pretendemos estudar como Cav-1 e Cav-2 regulam a produção de óxido nítrico (NO) em células endoteliais in vitro.Objetivos:1) Verificar em células endoteliais, estimuladas ou não com LPS, a expressão de Cav-1, PY14-Cav-1, Cav-2, PY19-Cav-2, eNOS e iNOS por Western blot e quantificar os níveis de NO produzidos.2) Verificar a expressão de eNOS e a produção de NO após silenciamento de Cav-1 ou Cav-2 com siRNAs específicos.Metodologia:Neste trabalho, fizemos cultura de células da linhagem bEnd.3 e as estimulamos por 24 h com diferentes concentrações de LPS O111:B4, como protótipo de estímulo inflamatório. Após 24h, recolhemos o sobrenadante para ensaio de viabilidade, quantificação da produção de NO e de citocinas. As células foram lisadas para análise da expressão de proteínas por Western blot. Também iniciamos a otimização do silenciamento de Cav-1 nestas células.Resultados:As células bEND.3 apresentaram morfologia alongada e fusiforme, organizando-se de forma alinhada umas com as outras, compatível com a morfologia endotelial. A estimulação com LPS nas concentrações utilizadas (0,1 1 ug/mL) não alterou a viabilidade celular, o que foi verificado por ensaio de liberação de lactato desidogrenase (LDH), conforme esperado. Por outro lado, também não foi capaz de estimular a produção de NO pelo método de Griess. O ensaio funcionou a contento, conforme verificado pela quantificação de quantidades conhecidas de NO.Identificamos Cav-1 e Cav-2 por Western blot, utilizando anticorpos específicos para estas proteínas. No entanto, não conseguimos identificar eNOS com os anticorpos disponíveis no laboratório, nas condições utilizadas. Tentaremos concentrar os anticorpos em novas tentativas. Também iniciamos a otimização do protocolo de silenciamento de Cav-1 e Cav-2, utilizando siRNAs comerciais já validados (QIAGEN) e Lipofectamina 2000 (Thermo), como agente carreador para dentro das células. O resultado do Western blot, apresentou resultados inconsistentes com o desenho experimental e iremos repetir o experimento.Conclusão: Nossas culturas de células bEND.3 apresentam morfologia compatível com a de células endoteliais e expressam caveolina-1 e caveolina-2, detectadas por Western blot. O estímulo com LPS, nas diferentes concentrações utilizadas, não alterou a viabilidade celular pelo método de LDH. Diferente das nossas expectativas, também não foi capaz de alterar a produção de NO. Sendo assim, vamos alterar os protocolos experimentais para definir um estímulo inflamatório que permita estudar a regulação da atividade de óxido nítrico sintases pelas caveolinasAtividades Complementares: Participei de outros projetos do meu grupo e de outros pertencentes ao laboratório e aprendi cultura de outras linhagens celulares, como Calu-3, VERO e BV.2; Imunofluorescência de células da linhagem Calu-3; Silenciamento de Caveolina-1 em células Calu-3; Ensaio de Griess em células microgliais (BV2) in vitro; ELISA de amostras in vitro de células microgliais (BV2) infectadas com bactéria e tratadas farmacologicamente.Além disso, realizei o XVII Curso de Biossegurança Laboratorial e Coleções Científicas - Módulo Introdutório de Biossegurança em Laboratórios de Pesquisas Biomédicas.

Bolsista: Gustavo Oitaven Menezes
Orientador(a): Luciano Kalabric Silva
Resumo: O vírus da hepatite E (HEV) pode ser transmitido esporadicamente ou sob a forma de surtos entre pessoas e pelo consumo de água e alimentos contaminados, notadamente pelo consumo de carne suína e de caça. O objetivo desse estudo é validar um método para determinação do anti-corpo anti-HEV IgG de porcos e analisar a similaridade entre sequências do HEV-RNA obtidas de criadores de suínos para subsistência familiar e seus rebanhos na região metropolitana de Salvador-BA. O estudo será realizado em porcos de rebanhos de criadores de subsistência familiar residentes na Região Metropolitana de Salvador (RMS) e cadastrados na Agência de Defesa Agropecuária da Bahia (ADAB). Amostras de sangue dos animais serão coletadas e analisadas por método sorológico (ELISA) e por biologia molecular para detecção do HEV-RNA. Um ELISA comercial para determinação do anti-HEV IgG humano (Wantai) será modificado para permitir a determinação do anti-corpo anti-HEV IgG de porcos utilizando um anticorpo secundário anti-porco IgG conjugados a HRP (CUSABIO). Na perspectiva de uma Saúde Única, este estudo pode contribuir sobre o conhecimento da saúde animal, no caso, o suíno, que é reservatório do HEV. Os resultados da vigilância agropecuária dos suínos serão relatados à ADAB que se encarregará de comunicar aos proprietários e propor medidas sanitárias paliativas.

Bolsista: Maria Fernanda Soares de Lisboa
Orientador(a): OLINDO ASSIS MARTINS FILHO
Resumo: A febre amarela é uma doença aguda febril com elevada mortalidade. Não há tratamento específico e, dessa forma, a vacinação é a única medida eficaz para o controle da doença. Embora seja uma das vacinas mais seguras que se tem conhecimento, a ocorrência de eventos adversos pós-vacinação pode ser observada. Logo, a avaliação da resposta vacinal em populações vulneráveis e/ou que apresentam condições clínicas desfavoráveis à manutenção de uma resposta imunológica eficiente, como por exemplo pacientes diagnosticados com doenças reumáticas inflamatórias imunomediadas (DRIM), torna-se uma constante demanda para a formulação de políticas públicas, visto o cenário epidemiológico atual de franca expansão da febre amarela. Uma importante ferramenta para monitorar a imunidade induzida pela vacina antiamarílica se baseia na utilização de microarranjos de peptídeos. Nesse sentido, este estudo busca avaliar como pacientes DRIM respondem à vacina da febre amarela, utilizando o Microarranjo de Peptídeos VFA. Para isso, foi realizada uma análise exploratória do Microarranjo de Peptídeos VFA utilizando ferramentas estatísticas avançadas, além de estratégias para otimizar seu desempenho. Este estudo trata-se de uma investigação observacional longitudinal utilizando amostras de pacientes DRIM atendidos no Ambulatório de Reumatologia do Hospital Universitário da Universidade Federal do Espírito Santo. Foram selecionados 40 pacientes abrangendo diagnósticos de artrite reumatoide (AR), espondiloartrites (EpA), lúpus eritematoso sistêmico (LES) e síndrome de Sjögren (pSS), tais pacientes foram posteriormente segregados de acordo com seus resultados positivos de anticorpos neutralizantes, DRIM/PRNT(+), e resultados negativos, DRIM/PRNT(-). Um grupo controle (CO) de 10 indivíduos saudáveis sem diagnóstico de DRIM também foi incluído. Foi realizada uma cinética vacinal abrangendo os dias 0 (antes da vacinação, NVD0) e 28 dias após a vacinação (PVD28). A caracterização do repertório de imunoglobulinas foi realizada no Grupo Integrado de Pesquisas em Biomarcadores da FIOCRUZ-Minas, utilizando o Microarranjo de Peptídeos VFA. Os resultados encontrados demonstraram padrões diferenciais de reconhecimento dos 726 peptídeos do vírus vacinal 17DD entre os tempos analisados (NVD0 e PVD28) em cada um dos grupos. No entanto, apesar das diferenças pontuais visualizadas, descobriu-se que a maioria dos peptídeos não era reconhecida diferencialmente pelos grupos, logo pôde-se identificar uma ausência de imunodominância no reconhecimento. Além disso, foi encontrado um amplo conjunto de peptídeos, em todos os grupos de estudo com Delta de Reatividade (PVD28 - NVD0) acima de 50% do total de indivíduos de cada um dos grupos. De forma específica, a análise dos dados revelou que os grupos CO e DRIM/PRNT(+) tiveram maior amplitude nos valores de aumento e queda das medianas do Delta de Reatividade. O grupo DRIM/PRNT(-) apresentou um padrão distinto, com predomínio de queda nos valores encontrados. Análises de Diagramas de Venn confirmaram que todos os grupos apresentaram especificidades em seus conjuntos de peptídeos exclusivos ou compartilhados, além de confirmar a predominância de um conjunto de peptídeos com padrão de queda em DRIM/PRNT(-). Por fim, os resultados evidenciaram a presença de conjuntos exclusivos de peptídeos em cada um dos grupos, indicando a heterogeneidade dos perfis imunológicos. Dessa forma, os dados obtidos nesse subprojeto representaram uma exploração inovadora do perfil de reconhecimento de peptídeos antiamarílicos e sua possível relação com a soroconversão em indivíduos controle e pacientes com DRIM. Os achados deste estudo reforçam a importância do uso de metodologias como o Microarranjo de Peptídeos VFA para caracterizar padrões de reconhecimento imunológico, contribuindo para futuras investigações mais detalhadas sobre o repertório de imunoglobulinas em indivíduos vacinados e a influência de características individuais na resposta imune.

Bolsista: NATHALIA JACOME DE LIMA SANTOS
Orientador(a): DEBORAH ANTUNES DOS SANTOS
Resumo: O presente relatório parcial descreve a análise computacional do impacto estrutural de mutações na proteína receptora de AMP cíclico (CRP) em Mycobacterium bovis BCG. A CRP constitui um regulador transcricional global pertencente à família CRP/FNR, essencial em processos metabólicos e de virulência micobacteriana. Objetivou-se caracterizar mediante modelagem molecular comparativa as consequências estruturais e funcionais das mutações E178K e L47P nos homólogos da proteína CRP de cepas BCG Pasteur e Moreau, elucidando potenciais relações com atenuação bacteriana e perfil imunogênico.A metodologia empregada baseou-se na construção de modelos tridimensionais utilizando o programa MODELLER v10.4, tendo como molde a estrutura cristalográfica da proteína CRP de Mycobacterium tuberculosis (PDB ID 3MZH). Foram gerados 100 modelos para cada homólogo, selecionados conforme parâmetros energéticos (DOPE Score) e subsequentemente validados quanto à qualidade estereoquímica mediante análise do MolProbity Score, distribuição conformacional no diagrama de Ramachandran e QMEAN. O impacto da substituição de aminoácidos na superfície eletrostática foi analisado utilizando o método de coloração de Coulomb integrado ao software ChimeraX.Os resultados revelaram elevada identidade sequencial entre os homólogos das cepas BCG Pasteur (99,11%) e Moreau (99,55%) em relação à estrutura de referência, confirmando a adequação da abordagem por modelagem comparativa. Os modelos selecionados apresentaram parâmetros estruturais superiores à referência cristalográfica, notadamente quanto ao MolProbity Score e à distribuição de resíduos em regiões favorecidas do diagrama de Ramachandran. A análise eletrostática evidenciou alterações significativas no potencial de superfície, particularmente na região próxima ao sítio de ligação ao DNA. A substituição E178K em ambas as cepas resultou em aumento do potencial de carga positiva, postulando-se uma interação mais favorável com o DNA, dada sua natureza aniônica.Conclui-se que as mutações investigadas provavelmente impactam a interação proteína-DNA e a ativação pelo cAMP, possivelmente correlacionando-se com diferenças funcionais entre as cepas vacinais. Os estudos subsequentes incluirão simulações de dinâmica molecular para avaliar a estabilidade estrutural dos complexos ao longo do tempo e cálculos de energia livre de ligação pelo método MMPBSA, visando quantificar a afinidade de interação dos homólogos mutantes com seus ligantes biológicos.

Bolsista: SUZANA DIONIZIO CESAR VELOSO
Orientador(a): Romulo de Paula Andrade
Resumo: O presente relatório tem por objetivo descrever as atividades do projeto intitulado O projeto de educação alimentar dentro de políticas públicas de alimentação no Brasil: uma intervenção para o desenvolvimento (1940-1970).Este subprojeto é originário do projeto principal História do Combate à Fome no Brasil: Ideias, Atores e Instituições (1946-1965), desenvolvido pelo Prof. Dr. Rômulo de Paula Andrade, o qual tem como objetivo geral empreender uma análise acerca de atores, órgãos governamentais, instituições e programas sociais relacionados à alimentação e à história das políticas de superação da fome no Brasil.Embora com recortes temporais distintos, ambos os projetos seguem uma abordagem semelhante, uma vez que busco analisar o projeto de educação alimentar aplicado dentro do Serviço de Alimentação da Previdência Social (SAPS) criado em 1940, voltado para alimentação da classe trabalhadora, do Departamento Nacional da Criança (DNCr), também criado em 1940, que se dedicava ao cuidado materno infantil e adolescente e a Campanha de Merenda Escolar, sancionada em 1955 e destinada a crianças em idade escolar e mais tarde a todos os escolares brasileiros da educação básica. Assim, essas iniciativas parecem figurar como objetos de estudos em que, entre outros fatores, a educação alimentar pode ser elencada como projeto de incentivo à melhoria de hábitos no que se refere às práticas alimentares. Dessa forma, este subprojeto está sendo desenvolvido como uma das linhas de perfeita articulação com o projeto maior acima mencionado.Desse modo, a delimitação temporal entre 1940 e 1970 permite analisar o surgimento e a consolidação de programas sociais como o SAPS e o DNCr. No entanto, a década de 1970 marca o fim dessas iniciativas, com a extinção do SAPS em 1967 e do DNCr em 1969. A única política social desse período que se mantém até os dias atuais é o Programa Nacional de Alimentação Escolar.Essas políticas públicas implementadas à época foram fundamentadas em estudos cientificamente empreendidos por meio da atuação de atores sociais, órgãos e instituições governamentais que buscaram soluções para superar o problema da fome e da desnutrição, fatores prejudiciais que eram muito comuns naquela época. Conforme relata Eronides (2000, p. 28), elas surgem, [...] não como ato isolado, mas situado numa rede de relações sociais em interação, de onde teriam surgido os vários modos de conhecer as realidades existentes à época da sua produção. Este estudo tem como objetivo analisar e evidenciar a aplicação da educação alimentar dentro de algumas políticas públicas no Brasil, destacando seu ideal de formação de hábitos alimentares saudáveis entre a população. A construção de políticas públicas eficazes para o combate à fome exigiu a consideração dos diversos atores e organizações envolvidos nesse debate. A análise dos discursos e ações desses atores permite identificar os desafios e as oportunidades para a construção de um sistema alimentar mais equilibrado.

Bolsista: BRUNA BORNHOFEN BARROS
Orientador(a): Catia Cristina Martins de Oliveira
Resumo: Realizar revisão de escopo sobre sobre estratégias na atenção primária à saúde com foco na doença cardiovascular, contribuir com o diagnóstico do problema no Brasil e apoiar a elaboração do modelo teórico lógico da intervenção.