Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 3

Bolsista: SABRINA PEREIRA CAMPOS
Orientador(a): FERNANDO BERTON ZANCHI
Resumo: Este projeto visa desenvolver uma plataforma de docking molecular co maceleração GPU para pesquisadores sem familiaridade na operação de softwares por linha de comando ou preparo de macromoléculas destinadas ao docking molecular contra alvos do Plasmodium spp. O software já está em funcionamento para P.falciparum (https://plasmodocking-unir.ecotechamazonia.com.br/) e este projeto pretende ampliar para os alvos de P.vivax.

Bolsista: MATHEUS BARROS DE ARAUJO
Orientador(a): Osvaldo Pompilio de Melo Neto
Resumo: Introdução: A família Trypanosomatidae é composta por protozoários flagelados parasitas com capacidade de infectar uma gama de hospedeiros. Seus principais representantes pertencem aos gêneros Leishmania e Trypanosoma. Diferente dos demais eucariotos, os tripanosomatídeos apresentam uma regulação gênica predominantemente mediada por mecanismos pós-transcricionais, responsáveis pelo controle do processamento, tradução e degradação do mRNA. Ao nível da tradução esta regulação deve envolver o complexo eIF4F de iniciação da tradução, formado por três subunidades em mamíferos (eIF4A, eIF4E e eIF4G) e que é responsável pelo reconhecimento e recrutamento dos mRNAs que serão traduzidos. Estudos mostraram que os dois principais gêneros da família Trypanosomatidae apresentam uma variedade de homólogos para as subunidades do complexo eIF4F, formando no mínimo cinco complexos distintos identificados com diferentes funções no que tange ao reconhecimento diferencial do mRNA. Essa seletividade parece estar diretamente relacionada à presença de proteínas parceiras ligadoras ao RNA, as RBPs, específicas para diferentes complexos. As RBPs constituem um grupo de proteínas que auxiliam em processos importantes no metabolismo dos mRNAs, influenciando seu processamento, transporte intracelular, localização e tradução. Com base no exposto, o presente trabalho tem como propósito estudar quatro proteínas de ligação a mRNA em T. brucei, sendo: três com o domínio RRM, as RBP8, RBP12, RBP28; e uma com o domínio Pumilico, a PUF6. Objetivo: O objetivo deste estudo é caracterizar as proteínas RBP8, RBP12, RBP28 e PUF6, sua expressão, e possíveis parceiros proteicos no controle da tradução, em formas procíclicas de Trypanosoma brucei. Para isso pretende-se: clonar os respectivos genes deste parasita; avaliar a expressão das proteínas alvo ao longo de curvas de crescimento e do ciclo celular do parasita, após transfecção em células da forma evolutiva procíclica; e investigar possíveis proteínas parceiras associadas às RBPs investigadas e com possível participação no controle da tradução. Metodologia: Os genes alvos do estudo são amplificados através da técnica de PCR com DNA total de T. brucei como molde e pares de primers para seus respectivos genes. Posteriormente os inserto são ligados em vetor plasmidial pGEM-T-Easy, com os plasmídeos resultantes purificados e submetidos a sequenciamento automático e digestão com enzimas de restrição, como a EcoRI e os pares de enzimas BamHI e HinDIII ou BglII e HinDIII. Discussão de resultados: Através da PCR, foi possível amplificar os genes de interesse com sucesso nos tamanhos esperados, RBP8 540pb, RBP12 1101pb, RBP28 1071pb e PUF6 2529pb. Os insertos foram ligados no vetor de clonagem pGEM-T-Easy. A primeira extração dos plasmídeos resultantes foi realizada por minipreparação de lise alcalina, com estes plasmídeos enviados para sequenciamento, onde foi possível identificar as extremidades referente aos genes das RBP12 e RBP28, e o gene completo da RBP8, validando as clonagens. Nova extração de DNA plasmidial com sistema comercial, gerou DNA passível de digestão com as enzimas de restrição. A digestão dos plasmídeos com genes codificantes de RBP8 e RBP28 gerou fragmentos do tamanho esperado compatíveis com os genes inteiros, enquanto que o plasmídeo com o gene da PUF6 liberou dois fragmentos compatíveis com um sítio interno já conhecido da enzima HinDIII. Já o plasmídeo com o gene da RBP12 liberou fragmento diferente do esperado, o que ainda está sendo investigado. Fragmentos obtidos na digestão dos genes RBP8 e RBP28 foram purificados e estão prontos para futura ligação em vetor de transfecção para células de T. brucei. Conclusão: Os genes RBP8, RBP12, RBP28 e PUF6, foram amplificados e purificados de forma satisfatória, com ao menos três destes com clonagem confirmada em vetor plasmidial. Novas etapas visam confirmar a clonagem ainda pendente e a realização da subclonagem para transfecção e expressão em T. brucei.

Bolsista: MARIANA MIRANDA NOGUEIRA DE CASTRO
Orientador(a): JOSE BENTO PEREIRA LIMA
Resumo: Instituto Oswaldo Cruz - FIOCRUZIniciação em Desenvolvimento Tecnológico e Inovação (PIBITI)Estabelecimento da base para monitoramento da resistência de Aedes (Stegomyia) albopictus (Skuse, 1894) (Diptera, Culicidae) por meio de bioensaiosRESUMOConhecido como mosquito-tigre-asiático, o mosquito Aedes (Stegomyia) albopictus (Skuse, 1894) (Diptera, Culicidae) é um vetor de grande importância epidemiológica em todo o mundo, tendo sido introduzido no Brasil em 1986. Possui ciclo de vida similar ao do Aedes aegypti e age como vetor secundário de dengue, chikungunya, Zika e febre amarela no território nacional. O controle dessas arboviroses tem como foco a eliminação do vetor, sendo o controle químico o método mais disseminado em todo o mundo. Todavia, seu uso intenso leva a uma grande pressão e seleção de populações de insetos resistentes, tornando-se um dos principais problemas para o controle de Aedes. O monitoramento da resistência a inseticidas é parte essencial da vigilância entomológica, sendo requerido para determinar níveis, mecanismos envolvidos e distribuição geográfica da resistência para escolha apropriada dos compostos empregados no controle de vetores. Para mosquitos adultos, dois bioensaios podem ser aplicados, sendo um que utiliza garrafas e o outro que usa papel de filtro, ambos impregnados com o inseticida a uma dosagem pré-determinada. O guia da Organização Mundial da Saúde (OMS) publicado em 2022 traz as concentrações indicadas para diferentes inseticidas a serem usadas para testes com Ae. albopictus. Contudo, essas doses não estão disponíveis para alguns compostos ou formulações mais novas que envolvem misturas de ingredientes ativos. Tendo em vista o aumento significativo da presença de Ae. albopictus em diversas regiões do país, muitas vezes em simpatria com Ae. aegypti, e a recomendação de novos produtos pela OMS e pelo Ministério da Saúde para uso no Brasil, incluindo formulações que envolvem misturas de ingredientes ativos, esse projeto almeja determinar a concentração discriminatória para um ativo que ainda não apresenta dose estabelecida para Ae. albopictus e avaliar o status de resistência de cinco populações de campo a alguns inseticidas. Os resultados obtidos servirão como base para o estabelecimento do monitoramento da resistência de Ae. albopictus no Brasil.

Bolsista: HELEN GAMA GIL
Orientador(a): FILIPE SANTOS PEREIRA DUTRA
Resumo: Listeria monocytogenes é um bacilo Gram-positivo amplamente distribuído no ambiente, sendo encontrado em matéria vegetal em decomposição, esgoto, água, solo, animais e alimentos. Essa bactéria é o agente etiológico da listeriose, uma doença transmitida por alimentos, geralmente associada ao consumo de produtos contaminados e/ou mal manipulados. Corpúsculos lipídicos (CLs) são organelas dinâmicas envolvidas em diversos processos celulares, incluindo respostas imunes a infecções virais e bacterianas. Além de participarem da resposta do hospedeiro, os CLs podem ser explorados por patógenos intracelulares como fonte de energia e como parte de estratégias de evasão do sistema imune, destacando sua importância na interação patógeno-hospedeiro. Estudos anteriores do nosso grupo demonstraram que os CLs desempenham um papel relevante durante a infecção por L. monocytogenes em macrófagos, contribuindo para a evasão da resposta imune. No entanto, a função dessas organelas em outros tipos celulares envolvidos na resposta fisiopatológica ainda não está completamente elucidada. Neste estudo, iniciamos a investigação do metabolismo lipídico e do acúmulo de CLs em hepatócitos infectados por L. monocytogenes. Para isso, padronizamos um modelo de infecção utilizando a linhagem celular HUH-7, semeando 2 × 10 células por poço e avaliando a expressão gênica de marcadores relacionados ao metabolismo lipídico, utilizando o gene GAPDH como controle endógeno. Os resultados preliminares indicam uma redução na expressão relativa da maioria dos genes avaliados, sugerindo uma possível repressão do metabolismo lipídico em hepatócitos infectados. Uma exceção foi observada para o gene FABP4, que apresentou tendência de aumento na expressão. As próximas etapas incluem a realização de experimentos cinéticos para avaliar alterações temporais na expressão gênica e a investigação da produtividade da replicação bacteriana em HUH-7, bem como sua associação com a formação ou redução de CLs. Novos experimentos serão conduzidos para validar e aprofundar os achados iniciais.

Bolsista: THAYS LOPES DE MELO CARMELINO
Orientador(a): Marcelo Raul Romero Tappin
Resumo: A este projeto trata investigação das propriedades terapêuticas de derivados de ácidos triterpênicos presentes na espécie Rosmarinus officinalis tanto de ácidos isolados quanto em uma fração purificada. É investigado tanto o processo de obtenção desta fração purificada quanto a produção destes derivados. Até o momento foram realizadas quatro produções de lote de fração purificada com resultados de rendimento e teor variados levando a necessidade da quantificação destas substâncias no extrato bruto. Foi realizado o isolamento de cerca de 60 mg de ácido micromérico, que será utilizado para ensaios farmacológicos e para modificações estruturais. Para as modificações estruturais, já foram obtidos todos os quatros intermediários 4-aminoquinolínicos 11a-d, com ótimos rendimentos entre 67 e 98%. Além disso, o teste inicial de acetilação do ácido ursólico demonstrou eficaz e será aplicado posteriormente ao sistema do extrato AT. O método de quantificação dos ácido triterpênicos no extrato bruto está sendo desenvolvido.

Bolsista: MARIANA DE OLIVEIRA DUARTE
Orientador(a): Najla Benevides Matos
Resumo: Streptococcus agalactiae (Estreptococo do Grupo B GBS) é reconhecido como um importante patógeno neonatal, sendo responsável por quadros graves de sepse e meningite em recém-nascidos, especialmente nos primeiros dias de vida. A principal via de transmissão é vertical, durante o parto, a partir da colonização retovaginal em gestantes. A diversidade capsular dos isolados de GBS, classificada em diferentes sorotipos, e o aumento da resistência a antimicrobianos, sobretudo aos macrolídeos e lincosamidas, reforçam a importância de estudos regionais que subsidiem estratégias de vigilância e prevenção, principalmente em áreas com poucos dados epidemiológicos, como a Amazônia brasileira. O presente estudo teve como objetivo identificar e caracterizar isolados de Streptococcus agalactiae provenientes de recém-nascidos atendidos em um hospital público de Porto Velho, Rondônia, abordando aspectos clínicos, epidemiológicos, tipagem capsular e perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos. Trata-se de um estudo observacional analítico, com inclusão de 169 neonatos avaliados entre abril de 2023 e março de 2024. Foram coletadas amostras de secreção nasal, retal e umbilical dos neonatos, imediatamente após o parto, para identificação microbiológica e análise molecular. A taxa de colonização neonatal por GBS foi de 4,7% (8/169), sem associação estatisticamente significativa com fatores clínico-obstétricos. No entanto, observou-se maior frequência de colonização em filhos de mães mais jovens e partos sem antibioticoterapia intraparto. Dos 22 isolados obtidos, 9 foram considerados não repetidos e incluídos nas análises fenotípicas e genotípicas. Os isolados demonstraram 100% de sensibilidade à penicilina, ampicilina, cefazolina, vancomicina e cloranfenicol. Contudo, verificou-se elevada taxa de não sensibilidade à tetraciclina (66,7%), seguida por levofloxacina e azitromicina (33,3%), eritromicina (22,2%) e clindamicina (11,1%). Esses dados reforçam a necessidade de vigilância contínua frente ao aumento da resistência a antimicrobianos alternativos, importantes para o tratamento de gestantes alérgicas à penicilina. A tipagem capsular revelou a presença dos sorotipos Ia (33,3%), Ib (22,2%), II (22,2%), IV (11,1%) e VI (11,1%), sendo observada a colonização simultânea por dois sorotipos em um neonato, indicando diversidade genética entre os isolados da região. Os resultados deste estudo contribuem para o entendimento da epidemiologia local da colonização neonatal por GBS, destacando a importância da ampliação dos programas de rastreamento em gestantes e da adoção sistemática da profilaxia intraparto. Além disso, reforçam a necessidade de monitoramento contínuo dos perfis de resistência antimicrobiana e da caracterização molecular dos isolados, a fim de subsidiar estratégias de controle e prevenção da infecção neonatal por GBS, especialmente em regiões da Amazônia brasileira com escassez de dados científicos.