Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 3

Bolsista: LIVIA VILLELA VALENTIM
Orientador(a): Flavia Carneiro
Resumo: INTRODUÇÃO E OBJETIVOS: A Leucemia Linfoide Aguda de Células T (LLA-T) representa cerca de 15% dos casos pediátricos e 25% dos casos adultos de leucemia linfoblástica aguda, caracterizando-se como uma doença agressiva e de tratamento complexo. Apesar dos avanços terapêuticos, os efeitos colaterais permanecem significativos. Nesse cenário a busca de novos alvos terapêuticos é fundamental para se propor terapias de maior precisão. Análises in silico prévias do grupo identificaram o gene TRIM28 (Tripartite Motif Containing 28) como um potencial novo alvo para essa neoplasia. Este gene pertence à família TRIM, que está envolvida em uma variedade de processos celulares e vias de sinalização. TRIM28 não apenas funciona como uma E3 ligase para a degradação de proteínas alvo e sumoilação, como também tem papel importante como um repressor transcricional. Além disso, vem sendo associado à tumorigênese, proliferação celular e inflamação. O presente trabalho tem como objetivo avaliar a expressão desse gene em linhagens celulares de LLA-T em comparação a amostras de PBMC (Peripheral Blood Mononuclear Cells) de indivíduos saudáveis, tanto em relação ao mRNA quanto em relação aos níveis proteicos. MATERIAL E MÉTODOS: As linhagens de LLA-T, Jurkat e Molt-4, foram cultivadas em meio RPMI com 10% de soro fetal bovino. Foram realizadas análises de expressão gênica por RT-qPCR para a quantificação da expressão de TRIM28, utilizando ACTB e RPL13 como genes de referência e dois pares de primers específicos para o gene alvo. As reações de RT-qPCR foram executadas com reagente SyBR green. Já a avaliação dos níveis proteicos foi feita por western blotting. Para isso, 20 µg de proteina foram submetidas a eletroforese em gel de poliacrilamida 8% (SDS-PAGE) e posteriormente transferidas para membrana de PVDF. A membrana foi incubada com os anticorpos primários anti-TRIM28 e anti-GAPDH por 16 e 1 hora, respectivamente. Os anticorpos secundários eram conjugados à enzima HRP (Horseradish peroxidase) e a detecção das proteínas foi feita por quimioluminescência. RESULTADOS: Observou-se aumento significativo do mRNA de TRIM28 nas linhagens Jurkat e Molt-4 em relação aos controles, com o uso dos dois genes de referência testados (ACTB e RPL13). Os níveis de proteína também se mostraram muito elevados nas linhagens celulares. Esses resultados reforçam dados in silico prévios obtidos pelo grupo, onde esse gene foi identificado como superexpresso em dados de RNA-seq de Jurkat e Molt-4 disponíveis em banco de dados. CONCLUSÃO: Os resultados confirmam a superexpressão do gene TRIM28 nas linhagens de LLA-T e reforçam a necessidade de se investigar seu papel na tumorigênese dessa malignidade.

Bolsista: CATHARINA D OLIVEIRA LOURES SCHWARTZ CUPOLILLO
Orientador(a): YARA MARIA TRAUB CSEKO
Resumo: Desenvolvimento de métodos alternativos para o controle da leishmaniose: uso do endossimbionte WolbachiaAs leishmanioses, classificadas como doenças negligenciadas pela Organização Mundial da Saúde (OMS), são causadas por protozoários do gênero Leishmania, transmitidos pelas fêmeas de flebotomíneos do gênero Lutzomyia. A espécie Lutzomyia longipalpis é a principal responsável pela transmissão da Leishmania infantum, agente etiológico da leishmaniose visceral nas Américas. Embora inicialmente restritas a áreas rurais e silvestres, as leishmanioses passaram por um processo de urbanização, atingindo áreas não endêmicas. Atualmente, a leishmaniose é considerada endêmica em 99 países, com mais de 12 milhões de pessoas infectadas e uma estimativa anual de 700 mil a 1 milhão de novos casos. As manifestações clínicas variam de acordo com a espécie do parasita e a resposta imunológica do hospedeiro, podendo ser assintomática ou evoluir para formas graves. Existem três formas principais da doença: cutânea, mucocutânea e visceral, sendo a cutânea a mais comum, especialmente nas Américas, Mediterrâneo, Oriente Médio e Ásia Central. O parasita apresenta um ciclo de vida digenético, com duas formas evolutivas: promastigota (flagelada, presente no intestino do vetor) e amastigota (sem flagelo, encontrada no interior de macrófagos de hospedeiros vertebrados). A transmissão ocorre pela picada de fêmeas infectadas, que ingerem formas amastigotas presentes em macrófagos. Após serem liberadas no intestino do vetor, transformam-se em promastigotas, sofrem divisão binária até se diferenciarem em formas metacíclicas infectantes que migram para probóscide, podendo infectar um novo hospedeiro vertebrado durante o repasto sanguíneo. Vale ressaltar que os cães desempenham um papel importante na transmissão da leishmaniose visceral, atuando como um principais reservatórios do parasita e contribuindo para a urbanização da doença. Como estratégia de controle, são adotadas medidas como o diagnóstico precoce, tratamento dos casos humanos, uso de inseticidas e eliminação de reservatórios infectados, porém, essas estratégias têm se mostrado insuficientes diante da expansão da doença. Diante disso, são necessárias novas medidas de controle da transmissão, entre elas o uso da bactéria endossimbionte Wolbachia pipientis, presente naturalmente em 40% a 70% dos artrópodes. A Wolbachia é conhecida por modificar características reprodutivas de seus hospedeiros, como feminização, morte seletiva de machos, partenogênese e incompatibilidade citoplasmática, além de bloquear a infecção por patógenos. Em Aedes aegypti, por exemplo, a cepa wMel demonstrou bloquear a infecção por vírus como dengue, Zika e Chikungunya. Além disso, foi descoberta a presença natural da bactéria em Lutzomyia longipalpis, possibilitando seu uso como agente de controle biológico.. O projeto tem como objetivo geral analisar os impactos da Wolbachia pipientis em fêmeas de L. longipalpis, estabelecer a infecção nesses vetores e avaliar a possibilidade do método como estratégia de bloqueio da infecção por Leishmania spp.. Os objetivos específicos são o desenvolvimento e padronização de metodologias de infecção oral e microinjeção da cepa wMelPop-CLA, análise da estabilidade da colonização bacteriana ao longo do tempo e avaliação do impacto da presença da bactéria na carga parasitária de Leishmania nas fêmeas infectadas.

Bolsista: MARIA EDUARDA ANDRADE CANDEIAS
Orientador(a): Marilda de Souza Gonçalves
Resumo: A anemia falciforme (AF) é uma doença hereditária causada pela homozigose da mutação no gene da hemoglobina BetaS, com manifestações clínicas heterogêneas, como hemólise e vaso-oclusão. A HU, apesar de eficaz no aumento da hemoglobina fetal e redução de complicações, apresenta resposta variável entre os indivíduos, o que pode estar relacionado a fatores genéticos, como variantes em genes de enzimas metabolizadoras de drogas (EMD). O estudo teve como objetivo: investigar a influência de polimorfismos em genes de EMD na resposta à HU em indivíduos com AF. A pesquisa foi um estudo longitudinal com 12 crianças com AF, em uso contínuo de HU. Foram realizadas coletas de sangue para análises laboratoriais, moleculares e farmacocinéticas, utilizando métodos como HPLC-MS para quantificação da HU e PCR-RFLP para detecção dos polimorfismos. Os resultados apontaram que: (1) a maioria das crianças apresentava o haplótipo CAR, associado a quadros clínicos mais graves; (2) apesar da HU elevar os níveis de HbF, marcadores de hemólise permaneceram altos, indicando efeito parcial da terapia; (3) o perfil farmacocinético da HU mostrou grande variabilidade entre os participantes, com AUC média de 22.605 ng*h/mL e Cmáx média de 9.998 ng/mL, ambos abaixo dos valores descritos na literatura, e clearance acima do esperado; polimorfismos como CAT -21A>T e CYB5R3 rs1928113659 mostraram associação significativa com alterações nos parâmetros laboratoriais e farmacocinéticos, sugerindo influência no metabolismo da HU. Houve também associação de variantes NAT2 com parâmetros hematológicos, como número de reticulócitos e volume plaquetário. A análise clínica demonstrou que todos os pacientes apresentaram internações, além de alta incidência de infecções, crises vaso-oclusivas e outras complicações, evidenciando a gravidade da doença mesmo sob tratamento com HU. O estudo reforça a importância da personalização do tratamento com HU, considerando o perfil genético dos pacientes. Os dados obtidos apontam para a necessidade de estratégias terapêuticas individualizadas, como o ajuste de dose guiado por farmacocinética e farmacogenética, para otimizar os efeitos da HU e melhorar o prognóstico clínico.

Bolsista: ALBERTO NUNES ROMERO FILHO
Orientador(a): Viviane Santos Veiga
Resumo: O relatório apresenta as atividades desenvolvidas pelo bolsista de Iniciação Científica Alberto Nunes Romero Filho no subprojeto "Compartilhamento de dados de pesquisa na Fiocruz: diagnóstico e percepção do pesquisador", entre março de 2024 e abril de 2025. O foco principal do subprojeto é compreender a percepção dos pesquisadores da Fiocruz sobre o compartilhamento de dados de pesquisa, com vistas à criação de infraestrutura para gestão e abertura desses dados na área da saúde.Objetivos do Bolsista:* Atualizar o levantamento bibliográfico sobre Planos de Gestão de Dados (PGD);* Contribuir com a divulgação científica da pesquisa;* Participar do Grupo de Trabalho (GT) de Indexação da Fiocruz;* Apoiar o desenvolvimento de templates de PGD específicos, com ênfase na Rede Fiocruz Pesquisa Clínica.Metodologia: A pesquisa adota uma abordagem interdisciplinar com base teórica na Construção Social da Tecnologia (SCOT), valorizando a flexibilidade interpretativa. O levantamento bibliográfico foi realizado em três bases de dados: Web of Science, Portal CAPES e BRAPCI, utilizando estratégias de busca em português e inglês. A busca resultou em 345 documentos, que foram filtrados e analisados, resultando em 186 publicações relevantes.Tratamento dos Resultados: Após exclusão de duplicatas e documentos sem acesso ao texto completo, os resumos foram analisados e os textos classificados em seis categorias temáticas:1. Políticas e Diretrizes2. Desafios do PGD3. Sistemas Relacionados à Gestão de Dados4. Olhar dos Profissionais da Informação5. Saúde (excluída posteriormente)6. Princípios FAIRA categorização foi realizada por três membros da equipe, incluindo o bolsista, e está sendo revisada para validação. Os dados foram organizados em planilhas e analisados graficamente para identificação de padrões.Resultados Parciais:* A categoria Sistemas Relacionados à Gestão de Dados foi a mais representativa (25%), seguida por Políticas e Diretrizes (23%) e Desafios do PGD (20%).* A Web of Science teve predominância de artigos sobre sistemas; o Portal CAPES evidenciou diretrizes e sistemas; e a BRAPCI apresentou maior número de textos sobre políticas.* A categorização revelou a importância crescente das tecnologias e diretrizes para operacionalização dos PGD, além da necessidade de treinamento e apoio institucional.Divulgação Científica: O bolsista participou da criação de conteúdos para redes sociais, utilizando o perfil da Rede de Bibliotecas Fiocruz no Instagram, e propôs um novo perfil voltado exclusivamente à divulgação científica com linguagem acessível e recursos da cultura pop.GT de Indexação: Participação ativa do bolsista nas reuniões dos subgrupos (vocabulário, política de indexação e padronização), com elaboração de atas e apoio à sistematização das diretrizes de indexação voltadas para PGD.Atividades Complementares:* Participação em cursos sobre ciência aberta, acesso e dados abertos (40h);* Apoio na organização do evento científico Dia do Bibliotecário;* Participação em aulas sobre fontes de informação em saúde, com ênfase na Biblioteca Virtual em Saúde (BVS) e uso dos Descritores em Ciências da Saúde (DeCS). Avaliação: O bolsista destaca a importância da experiência para seu desenvolvimento acadêmico, especialmente por ser seu primeiro contato com a pesquisa científica. Ressalta o aprendizado em gestão de dados, divulgação científica e atuação em grupo de pesquisa. Relata que a área de gestão de dados despertou seu interesse para futuras investigações e atuações profissionais.

Bolsista: CAROLINE BURI SOUZA
Orientador(a): MICHELLE CHRISTIANE DA SILVA RABELLO
Resumo: A hanseníase é uma doença infectocontagiosa que afeta principalmente a pele, os nervos periféricos e os olhos, sendo considerada uma doença negligenciada e endêmica em diversas regiões, como o Brasil. Apesar do diagnóstico clínico ser o principal método utilizado, muitas vezes é tardio e limitado pela baixa sensibilidade dos exames laboratoriais tradicionais. Nesse contexto, este estudo propõe padronizar e otimizar a técnica de amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP) para o diagnóstico da hanseníase, propondo como uma alternativa rápida, de baixo custo e adaptável a locais com poucos recursos. Durante a padronização, dois alvos genéticos foram testados e em diferentes condições de reação tendo como foco melhorar a performance do teste e garantir a especificidade e a reprodutibilidade dos resultados. Além disso, a análise em diferentes condições de temperatura de anelamento e concentrações de reagentes ou adição de outros reagentes foi necessária para melhorar a amplificação dos alvos, nas quais a melhor visualização do padrão de bandeamento pode ser avaliada por eletroforese. Durante a otimização do LAMP, essa ferramenta molecular se mostrou mais sensível para detecção do DNA de M. leprae obtido das lâminas de pacientes paucibacilares do que o índice baciloscópico, reforçando a importância da implementação da biologia molecular na rotina para o diagnóstico precoce da doença. De maneira geral, a realização da avaliação de reprodutibilidade desta técnica usando diversos tipos de amostras biológicas de pacientes com hanseníase é essencial para validar esta metodologia de forma que os resultados possa ser detectado de forma mais simples, através da visualização colorimétrica da amplificação do DNA de M. leprae, viabilizando o desenvolvimento de métodos mais rápidos, acessíveis e que poderão, futuramente, ser implementados como testes do tipo point-of-care, fortalecendo o diagnóstico da hanseníase em regiões endêmicas, como Pernambuco.

Bolsista: JULIA ALVES CORREA GONCALVES
Orientador(a): LETICIA DA CUNHA GUIDA
Resumo: A Síndrome de Prader-Willi (SPW) é uma condição genética complexa, com uma prevalência de aproximadamente 1 em 15.000 nascidos vivos. Caracteriza-se por uma série de anormalidades endócrinas, neurológicas e comportamentais, incluindo hipotonia severa na fase neonatal, desenvolvimento motor atrasado, hiperfagia, obesidade severa, baixa estatura, hipogonadismo e comportamentos compulsivos. As deficiências hormonais observadas na SPW são frequentemente atribuídas a disfunções no eixo hipotálamo-pituitário, embora a base fisiopatológica ainda não seja completamente compreendida. A síndrome resulta da perda de função de genes no cromossomo 15q11-q13, com a maioria dos casos (cerca de 70%) sendo causados por deleções, enquanto 20-30% são atribuídos à dissomia uniparental materna (matUPD) e menos de 3% aos defeitos no Centro de Imprinting (IC).O diagnóstico da SPW é crucial e atualmente depende de técnicas moleculares que identificam as deleções e dissomias. O projeto propõe o uso da técnica de Curva de Dissociação em Alta Resolução (HRM) para identificar casos de matUPD, visando melhorar o diagnóstico e o aconselhamento genético. O estudo foi aprovado eticamente e envolve a coleta de amostras de sangue de pacientes suspeitos de SPW e seus genitores, além de controles saudáveis.Os objetivos específicos incluem o desenho de primers para regiões polimórficas do cromossomo 15, a realização de PCR e a comparação da eficácia de diferentes métodos moleculares no diagnóstico da SPW. A metodologia abrange a extração de DNA, a padronização de reações de PCR e a análise por HRM, além de técnicas de MLPA para identificar alterações genéticas.Até o momento, as atividades realizadas incluem a extração de DNA, a realização de PCR convencional e a análise por HRM, com resultados preliminares indicando a eficácia dos primers desenhados. A análise de microssatélites permitirá estabelecer a origem parental do cromossomo 15 nos pacientes com SPW e contribuirá para o entendimento da frequência dos alelos característicos da população brasileira.As conclusões parciais destacam a importância do conhecimento da etiologia molecular para o aconselhamento genético e a análise de risco de recorrência, além de sua relevância para a correlação fenótipo-genótipo, visando melhorar o atendimento clínico e os tratamentos oferecidos aos pacientes com SPW. O projeto continua em andamento, com a expectativa de realizar análises adicionais em amostras de trio (mãe, pai e filho) para aprofundar o entendimento da síndrome.