Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 3

Bolsista: ANNA BEATRIZ DEODATO DA SILVA
Orientador(a): PAOLA CRISTINA RESENDE SILVA
Resumo: O presente relatório descreve as atividades da bolsista Anna Beatriz Deodato da Silva realizadas entre os dias 19 de fevereiro e a 09 de abril de 2025 no Laboratório de Vírus Respiratórios, Exantemáticos, Enterovírus e Emergências Virais (LVRE) do Instituto Oswaldo Cruz (IOC), vinculado à Fundação Oswaldo Cruz (Fiocruz) sob a orientação da Dra. Paola Cristina Resende. O foco principal das atividades foi a introdução a vigilância genômica de vírus respiratórios, com ênfase no vírus sincicial respiratório (VSR) e no vírus Influenza. Essas atividades englobaram treinamentos e práticas laboratoriais, abrangendo desde a coleta de amostras biológicas até a análise e interpretação dos dados genômicos obtidos, e ainda, capacitações teóricas e palestras de pesquisadores internacionais.

Bolsista: JOAO PEDRO LEITE DOS PASSOS
Orientador(a): Marilda de Souza Gonçalves
Resumo: A anemia falciforme (AF) configura-se como a hemoglobinopatia hereditária de maior impacto global, com elevada prevalência e expressivo ônus socioeconômico. Sua fisiopatologia é caracterizada pela polimerização da hemoglobina S (HbS) em condições de hipóxia, promovendo alterações morfofuncionais dos eritrócitos, vasoclusão e estresse oxidativo. Dentre as abordagens terapêuticas disponíveis, a hidroxiureia (HU) representa o fármaco padrão-ouro no manejo da doença falciforme (DF), notadamente pela indução da hemoglobina fetal (HbF) e potencial aumento da biodisponibilidade de óxido nítrico (NO). Entretanto, estudos recentes sugerem que a HU pode apresentar propriedades antioxidantes adicionais, ainda não plenamente elucidadas.Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo investigar a atividade antioxidante da HU em modelos celulares endoteliais (HUVEC), expostos a microambiente pró-oxidante induzido por hemina. Inicialmente, avaliou-se a capacidade de eliminação de radicais livres da HU por meio do ensaio de DPPH, demonstrando atividade antioxidante significativa em diferentes concentrações, comparável ao antioxidante de referência BHT, sem diferenças estatisticamente significativas.As atividades experimentais contemplaram ainda o cultivo de células HUVEC, treinamento em técnicas laboratoriais essenciais (pipetagem, cálculos de diluição, preparo de soluções, manutenção celular), além da realização de ensaios de RT-qPCR. Os testes preliminares de expressão gênica permitiram a validação de primers específicos para genes antioxidantes relevantes (NFE2L2, SOD1, CAT, GPX, GSR, HMOX1), evidenciando perfis de amplificação com alta especificidade. A análise dos produtos de RT-qPCR encontra-se em andamento, com perspectivas de elucidar o papel modulador da HU na expressão gênica antioxidante e no controle do estresse oxidativo.Os resultados obtidos até o presente momento corroboram a hipótese de que a HU possui potencial antioxidante relevante, além de sua já consolidada ação na indução de HbF. A confirmação destes achados poderá contribuir substancialmente para o avanço das estratégias terapêuticas empregadas na DF, visando à redução do dano oxidativo e à prevenção das complicações vasoclusivas características da patologia. O desenvolvimento contínuo deste estudo é imprescindível para a compreensão aprofundada dos mecanismos moleculares associados à ação antioxidante da HU no contexto da anemia falciforme.

Bolsista: FELLYPE BORGES SILVA COSTA
Orientador(a): MARIO CAMPOS JUNIOR
Resumo: O projeto de pesquisa tem como foco o estudo das mutações no gene RFX6 e seu impactoem pacientes com suspeita de diabetes monogênico. A diabetes monogênica, emborarepresente uma fração menor dos casos de diabetes, é de especial relevância clínica porresultar de alterações em um único gene, o que pode facilitar abordagens terapêuticaspersonalizadas. O gene RFX6, crucial para a formação e função das células betapancreáticas, foi selecionado devido à sua associação histórica a síndromes de diabetesneonatal, além de novas evidências que sugerem seu envolvimento em formas maisbrandas de diabetes, como o MODY.Para a realização desse projeto, foi implementada uma metodologia que incluiu a coleta deamostras biológicas, extração de DNA, amplificação por PCR e sequenciamento de exoma.As amostras foram obtidas a partir de sangue periférico e saliva de indivíduos previamenteselecionados. A troca do sequenciamento de Sanger pela análise de exoma foi uma decisãoestratégica devido a dificuldades técnicas no primeiro. As variantes identificadas foramanalisadas utilizando a plataforma Franklin by Genoox, que emprega inteligência artificialpara interpretação de dados, e os achados foram avaliados segundo diretrizesinternacionais.Os resultados preliminares demonstraram que, embora tenham sido identificadas 46variantes no gene RFX6, todas foram classificadas como benignas, indicando uma baixafrequência de mutações patogênicas neste gene na amostra estudada. A predominância devariantes sinônimas sugere que alterações significativas para a fisiopatologia do diabetesmonogênico podem não estar diretamente associadas ao RFX6 como um marcadordiagnóstico isolado, indicando a necessidade de uma abordagem mais abrangente.

Bolsista: GABRIELE HADDAD DE LIMA
Orientador(a): RAQUEL ELISA DA SILVA LOPEZ
Resumo: As leishmanioses representam um complexo de enfermidades crônicas que acometem vísceras e pele, e são responsáveis por um amplo espectro de doenças crônicas tegumentares e viscerais com variada morbidade, mortalidade e epidemiologia. Elas estão associadas à pobreza, mudanças climáticas, desmatamento, urbanização, dentre outros fatores e os números de casos e mortes têm aumentado anualmente. É uma doença de controle complexo, pois é transmitida por vários insetos vetores e muitos mamíferos são fontes de infecção. A terapia medicamentosa é um dos principais mecanismos de controle das leishmanioses, contudo, desde a década de 1940, os antimoniais pentavalentes têm sido as drogas de escolha para o tratamento. Embora eficazes, são muito tóxicas e pode até levar a morte do hospedeiro. Além de que, o esquema terapêutico possui um custo elevado e são observados parasitos viáveis nas cicatrizes de pacientes curados. Os medicamentos de segunda linha são usados em áreas com altos índices de resistência aos antimoniais, contudo, são drogas mais tóxicas, mais caras e com menor índice terapêutico. Todos os fármacos para o tratamento das leishmanioses são parenterais, com altas doses e com grande toxicidade, o que exige a internação e a adesão dos pacientes, que muitas vezes abandonam o tratamento, favorecendo o aparecimento de cepas resistentes. Sendo assim, é necessário desenvolver drogas mais específicas, eficazes, de baixo custo, com reações adversas menos agressivas para o hospedeiro e de modo racional baseado nos alvos quimioterápicos da Leishmania. O grupo de pesquisa de Bioquímica de Proteases e inibidores de proteases de origem natural (BIOPRON) investiga proteases e IPs de leguminosas para fins terapêuticos e identificou um extrato aquoso de folhas de Canavalia ensiformis (CE-A) com importante atividade proteolítica e capacidade desbridante em modelos ex vivo. Deste extrato foram purificadas e caracterizadas duas serino proteases, contudo, as metaloproteases, responsáveis pela degradação de matriz extracelular e importantes na cicatrização de feridas, ainda não foram reportadas. Sendo assim, os objetivos deste subprojeto são o isolamento, a purificação, caracterização bioquímica, cinética e estrutural de metaloproteases do CE-A e a avaliação da atividade debridante de feridas de tais proteases utilizando o modelo ex vivo de pele de porco. Resultados preliminares utilizando cromatografia de afinidade em Gelatina-Sepharose isolou uma ou mais metaloproteases, contudo, sua caracterização ainda não foi iniciada. Além disso, as proteases com as melhores características bioquímicas e cinéticas, maior poder desbridante serão selecionadas para desenvolver futuramente protótipos de hidrogeis tópicos com potencial para tratar as lesões cutâneas de leishmanioses.

Bolsista: ANA JULIA MACENA DA SILVA
Orientador(a): RODOLFO DE ALMEIDA LIMA CASTRO
Resumo: O saneamento básico é um conjunto de infraestrutura e serviços que garante o manejo de resíduos, o abastecimento de água, a coleta e o tratamento de esgoto e o escoamento de águas pluviais nas áreas urbanas (BRASIL, 2020). Dessa forma, o seu pleno funcionamento garante maior segurança à saúde da população, evitando possíveis contaminações da água, do ar e do solo e evitando diversas doenças relacionadas ao saneamento ambiental inadequado (DRSAI). O objetivo deste estudo foi mapear e atualizar a lista das DRSAI, buscando na literatura doenças que podem ser relacionadas ao saneamento ambiental inadequado e, também, os indicadores em uso e outros índices de saneamento através de uma revisão sistemática. Foi realizada uma revisão sistemática sobre doenças endêmicas e epidêmicas com potencial de classificação como DRSAI no Brasil e no mundo, incluindo doenças (re-)emergentes. Este estudo foi conduzido para mapear as DRSAI e obter uma lista de doenças possivelmente mais ampla do que a em uso. Para isto, foi desenvolvida uma estratégia de busca por publicações nas principais bases de dados bibliográficos (PubMed, Web of Science, Embase, Cochrane Library e Lilacs) utilizando o acrônimo PICOS. Após o rastreamento dos títulos e resumos avaliados, os textos completos dos estudos elegíveis tiveram seus dados extraídos para a plataforma digital Research Electronic Data Capture (REDCap), que permite a coleta, gestão dos dados de pesquisa. Com os dados extraídos foi realizada uma meta-análise da incidência das doenças ou, na impossibilidade, apresentou-se uma síntese dos estudos incluídos com uma lista atualizada das DRSAI. A meta-análise de todos os estudos resultou em uma grande heterogeneidade e um sucesso das diversas intervenções em saneamento na redução de 26% (intervalo de confiança 95% entre 18% e 35%) da chance de ocorrência de DRSAI. Os resultados demonstraram subgrupos adicionais de doenças e evidenciaram a importância da discussão da inclusão de ao menos três novas DRSAI: infecções respiratórias agudas, Influenza e Viroses intestinais por Sapovirus. Uma atualização da busca para inclusão de novos artigos ainda será realizada.

Bolsista: ELLEN DAMASIO MASCARENHAS
Orientador(a): TATIANA ALMEIDA PADUA
Resumo: A malária é uma doença infecciosa grave que continua sendo um desafio de saúde pública. No Brasil e em outros países da América do Sul, o Plasmodium vivax é o principal agente causador, frequentemente associado a complicações pulmonares graves. Nesse contexto, os neutrófilos desempenham um papel crucial na amplificação da resposta inflamatória durante a malária, agravando a condição do hospedeiro. Estudos mostram que o sistema endocanabinoide, surge como um possível alvo terapêutico para modular esse processo inflamatório. Dados do nosso grupo mostraram que o Beta-cariofileno (BCP), como agonista do receptor CB2, inibiu o influxo de neutrófilos para a cavidade torácica em modelo murino de inflamação pulmonar induzido por Plasmodium berghei (dados não publicados). Desta forma, o objetivo deste projeto é investigar o efeito do Beta-cariofileno em neutrófilos ativados por mediadores inflamatórios presentes na infecção por Plasmodium spp. Para isso, células da linhagem HL-60 foram diferenciadas em semelhantes a neutrófilos (dHL-60) conforme descrito por Millius A., 2010. Para a avaliação da capacidade migratória, a HL-60 ou dHL-60 foram estimuladas com os quimiotáticos rhIL-8 (12,5; 25 e 50 ng/mL) por 1 hora ou fMLP (10 uM) por 1 e 3 horas e as células que migraram foram contadas na câmara de Neubauer. Para a investigação da ação do Beta-cariofileno na viabilidade celular da dHL-60, foi realizado ensaio de metabolismo celular por lactado desidrogenase (LDH). Durante o processo de diferenciação celular foram observadas mudanças morfológicas como: diminuição de tamanho celular, formação de grumos e o aparecimento de células com núcleos multilobulados. Além disso, houve aumento da expressão do marcador de maturação CD16, dessas células comparada à HL-60 não diferenciada O ensaio de quimiotaxia mostrou que o processo de diferenciação tornou as células responsivas principalmente ao quimiotático fMLP tanto após 1 hora como 3 horas de incubação. Além disso, observamos uma maior expressão do receptor CB2 em células dHL-60 estimuladas com IL-8 e fMLP, sugerindo um possível envolvimento desse receptor na mediação da migração celular. O ensaio de LDH mostrou que o Beta-cariofileno não é citotóxico nas concentrações avaliadas. Os resultados até o momento indicam Em conjunto, esses resultados sugerem que a linhagem dHL-60 representa um modelo celular útil para estudar a função de neutrófilos e o papel do receptor CB2 na resposta quimiotática. No entanto, são necessários mais estudos para investigar a participação CB2 na ativação de neutrófilos e a sua modulação pelo BCP.Palavras-chave: malária, neutrófilo, Beta-cariofileno, receptor CB2.