Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 3

Bolsista: LARICA PARAGUASSU MOREIRA DA SILVEIRA
Orientador(a): Theolis Costa Barbosa Bessa
Resumo: A tuberculose (TB) é a doença responsável pelo maior número de mortes anuais em todo o mundo, entre as doenças infecciosas causadas por um único patógeno. O bacilo causador da TB infecta um quarto da população mundial. Na imensa maioria dos indivíduos o bacilo encontra-se em uma forma latente, intracelular, contra a qual os fármacos anti-tuberculose têm ação limitada. Neste trabalho, exploramos a modulação do processo de autofagia, um mecanismo celular evolutivamente conservado e com papel demonstrado na eliminação de patógenos intracelulares, como possível via para a proposição de novas terapias direcionadas ao hospedeiro (HDTs) no controle da TB, com a utilização de fármacos já aprovados e em uso em populações humanas para outras condições. Enfatizamos que alguns dos medicamentos anti-TB apresentam atividade demonstrada sobre a via autofágica, a qual pode ser modulada farmacologicamente. Portanto, nosso objetivo é avaliar a modulação da via autofágica através da utilização de fármacos anti-TB em culturas de macrófagos derivados de monócitos de linhagem THP-1 infectados por M. bovis (linhagem vacinal BCG Moreau-RJ). Especificamente, pretendemos avaliar o efeito dos fármacos isoniazida e etambutol, reportados com atividades diferentes sobre a modulação da autofagia, na sobrevivência intracelular de BCG, e verificar como a sobrevivência intracelular das micobactérias pode ser alterada pelo emprego dos fármacos rapamicina e cloroquina, respectivamente indutor e inibidor de autofagia. Dentre os objetivos alcançados durante o período do projeto estão: a padronização do cultivo e expansão de M. bovis BCG, que garantem às condições adequadas para o experimento; a padronização do cultivo e diferenciação de células THP-1 em macrófagos para realização dos experimentos; a infecção das células com as micobactérias; e a padronização do protocolo de lise celular e plaqueamento para contagem das unidades formadoras de colônias (CFU). A estudante tem desenvolvido competências e expertise em técnicas experimentais e métodos utilizados pelo grupo de pesquisa no ambiente laboratorial, além de aprimorado o seu aprofundamento teórico, através da participação em grupo de estudo e apresentação em sessões científicas do grupo, além da participação em eventos do programa institucional de iniciação científica.

Bolsista: YASMIN CRELIER GOMES DA SILVA
Orientador(a): FAUSTO KLABUND FERRARIS
Resumo: Visando garantir a eficácia, segurança e conformidade com as regulamentações da ANVISA, esteprojeto tem como objetivo desenvolver uma metodologia inovadora de ensaio de potência farmacológicopara determinar a eficácia terapêutica das tinturas da espécie vegetal Mikania glomerata, que possui atividadeanti-inflamatória e está contemplada na lista do RENISUS. Para isso, será utilizado um ensaio in vitro coma linhagem celular de macrófagos J774A.1 e o marcador fitoquímico cumarina. A curva de crescimento dascélulas J774A.1 mostrou um pico proliferativo no 7º dia, seguido por uma queda significativa após o 8º dia,indicando esgotamento de nutrientes e morte celular. A estimulação das células J774A.1 com LPS resultouem um aumento significativo na produção de mediadores inflamatórios, como óxido nítrico (NO), fator denecrose tumoral (TNF) e interleucina-6 (IL-6). Esses mediadores foram identificados como possíveis alvospara a modulação da cumarina no ensaio in vitro. A cumarina apresentou citotoxicidade em concentrações apartir de 200 µg/mL, inviabilizando cerca de 47% das células. Para futuros ensaios, foi selecionada aconcentração segura de 100 µg/mL. A tintura de guaco mostrou ser segura para as células J774A.1 emdiluições iguais ou superiores a 1/200, garantindo 100% de viabilidade celular. Por ser o marcadorfitoquímico da espécie vegetal Mikania glomerata e apresentar um potencial significativo como agentemodulador da resposta inflamatória, a cumarina pode ser usada como alvo para a construção de um ensaiode potência farmacológico. Esse ensaio, alinhado com o ensaio farmacopeico de dosagem de teor decumarina, pode ser uma importante ferramenta para avaliação da qualidade e eficácia terapêutica das tinturasà base de Guaco.

Bolsista: JULIANA MANNARINO PRATES
Orientador(a): ILCE FERREIRA DA SILVA
Resumo: Introdução: Apesar de sua marcada queda nos últimos 30 anos, o câncer gástrico é considerado como um dos principais problemas de saúde pública mundialmente, permanecendo como uma das principais causas de óbito relacionadas ao câncer no mundo todo. Objetivo: Descrever o perfil clínico-epidemiológico e nutricional dos pacientes diagnosticados com o câncer gástrico primário atendidos numa unidade de referência do Rio de Janeiro de 2007 a 2017. Métodos: Trata-se de um estudo descritivo da coorte de pacientes com diagnóstico de câncer gástrico atendidos no Hospital de câncer-I do Instituto Nacional de Câncer no período de 2007 a 2017. As informações sociodemográfcas, história clínica, características do tumor, hábitos de vida e estado nutricional ao diagnóstico serão obtidas por meio de prontuários físicos e eletrônicos utilizando um questionário padronizado. As variáveis contínuas serão analisadas por meio de medidas de tendência central e dispersão, enquanto as variáveis categóricas serão avaliadas por frequências absolutas e relativas. As diferenças entre as distribuições serão analisadas pelos testes t-student (varáveis normais) e teste Kruskal-Wallis (variáveis não-normais). As diferenças entre as proporções serão avaliadas por meio do teste Qui-quadrado de Pearson (variáveis normais) e de Fisher (variáveis não-normais). Resultados Parciais: Até o momento foram avaliados 209 prontuários dos anos de 2007, 2008, 2009 e 2013. Espera-se que sejam avaliados mais 300 prontuários até julho de 2025. Nesse período a aluna adquiriu expertise em avaliar os prontuários e gerenciar bancos de dados em Access e Excel. Está em treinamento nas análises estatísticas básicas.

Bolsista: RUBEM MIGUEL DA SILVA MENDES FERREIRA
Orientador(a): RAFAEL MARIANTE MEYER
Resumo: Toxoplasma gondii é o protozoário causador da toxoplasmose, zoonose de grande relevância médica, especialmente para indivíduos imunocomprometidos e mulheres grávidas. Transmitido pela ingestão de água e alimentos contaminados, o parasito é encontrado na fase latente em cerca de 30% da população humana mundial. Normalmente assintomática, a doença pode se manifestar de forma grave quando transmitida congenitamente, ocasionando calcificação cerebral, coriorretinite, malformação fetal ou mesmo morte neonatal. Apesar disso, até o momento não existe cura parasitológica para toxoplasmose, e os tratamentos disponíveis são limitados, principalmente na fase crônica, devido à baixa capacidade de penetrar o cérebro, onde preferencialmente fica alojado o parasito, e aos graves efeitos colaterais que provocam. Portanto, é urgente o desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas para contra T. gondii. Extraídos da Cannabis sativa, os canabinoides têm sido cada vez mais empregados na clínica devido ao grande potencial terapêutico que apresentam, com efeitos que vão desde analgesia até neuroproteção. Apesar de alguns estudos apontarem para uma possível atividade antiparasitária destes compostos, seus efeitos sobre a replicação de T. gondii e o desfecho da infecção são amplamente desconhecidos. Na tentativa de encontrar uma estratégia terapêutica mais eficiente e com menos efeitos colaterais contra T. gondii, investigaremos o potencial terapêutico de extratos naturais de Cannabis sativa ricos em canabinoides como tetrahidrocanabinol ou canabidiol, bem como canabinoides sintéticos, como WIN 55212-2 e canabivarina, avaliando por meio de ensaios de proliferação e análises ultraestruturais e in silico, o efeito parasiticida dos compostos, as alterações morfológicas e estruturais ocasionadas no parasito, e possíveis mecanismos de ação das drogas. Nossa expectativa é que os canabinoides investigados demonstrem alta seletividade e atividade contra o T. gondii, possibilitando futuros testes e validações em modelos animais de toxoplasmose.

Bolsista: Victoria Miranda Machado
Orientador(a): Isabela Penna Ceravolo
Resumo: A eficácia in vivo de potenciais antimaláricos é geralmente avaliada por determinação microscópica direta da parasitemia de camundongos infectados com Plasmodium em esfregaços sanguíneos corados por Giemsa. Esse processo é demorado, requer técnicos experientes e não é automatizado. Recentemente, Arias et al. (2017) conseguiu demonstrar a existência de correlação da parasitemia de animais experimentalmente infectados com Plasmodium berghei quantificada por microscopia óptica, e de uma técnica que utiliza o fluoróforo SYBR green I (SYBRG I) que se liga ao DNA do parasito, sendo a intensidade da fluorescência emitida pelo fluoróforo proporcional à quantidade de parasitos presentes na amostra. Neste projeto, propomos implementar a avaliação de potenciais antimaláricos utilizando a técnica de detecção de fluorescência na rotina do laboratório. Essa metodologia apresenta muitas vantagens em relação à microscopia que é de poder se processar com maior rapidez a triagem de potenciais antimaláricos, bem como de diminuir a obtenção de resultados inconsistentes que podem ser influenciados por fatores humanos. Em nossos ensaios recentemente realizados, cinco camundongos suíços por grupo foram experimentalmente infectados com a cepa NK65 de P. berghei. Do segundo ao quarto dia após a infecção, eles foram tratados por via oral com a droga-teste MEFAS a 5 mg/Kg ou 10 mg/Kg (híbrido de cloridrato de mefloquina com artesunato, Farmanguinhos, FIOCRUZ). No quinto dia o sangue foi retirado da cauda do animal visando-se o plaqueamento e posterior incubação com SYBRG I, ou a confecção de esfregaços. A correlação entre as técnicas de fluorescência e microscopia foi realizada utilizando-se a correlação de Spearman que avalia a força e a direção da relação monotônica entre as duas variáveis. Foram encontradas correlações de 0,5455 e 0,6658 (correlação moderada), 0,7524 e 0,7617 (correlação forte) em quatro experimentos independentes em um nível de confiança de 95%. Até o momento, os dados da parasitemia dos camundongos, obtidos por microscopia convencional e fluorescência, demonstraram fortes indícios de correlação; no entanto, ensaios adicionais de validação com diversas drogas-teste ainda precisam ser realizados.

Bolsista: MARIA EDUARDA GONCALVES DE SOUZA
Orientador(a): MARIANA ROCHA DAVID
Resumo: A transmissão de arbovírus como dengue, Zika e chikungunya representa um grave problema de saúde pública no Brasil e no mundo, sendo amplamente dependente da presença dos mosquitos vetores Aedes aegypti e Aedes albopictus. A ausência de vacinas amplamente disponíveis para estas doenças torna urgente o desenvolvimento de estratégias alternativas de controle vetorial. Nesse contexto, a manipulação da microbiota intestinal dos vetores, especialmente por meio da paratransgênese modificação genética de simbiontes bacterianos para expressar moléculas com potencial bloqueador de patógenos surge como uma abordagem promissora. No entanto, ainda são necessárias investigações mais aprofundadas sobre a diversidade microbiana associada a populações naturais desses mosquitos, assim como a caracterização funcional e genética de seus simbiontes. Assim, este subprojeto tem como objetivo isolar, preservar e identificar bactérias cultiváveis da microbiota intestinal de Ae. aegypti e Ae. albopictus coletados em áreas urbanas do estado do Rio de Janeiro. As coletas foram realizadas em 16 localidades urbanas dos municípios do Rio de Janeiro e Niterói entre junho de 2022 e junho de 2023, com inclusão também de mosquitos criados em laboratório. No total, foram processadas 665 fêmeas de Ae. aegypti, 65 de Ae. albopictus e 42 indivíduos de colônias laboratoriais. Os intestinos médios das fêmeas foram dissecados e submetidos ao isolamento bacteriano em diferentes meios de cultura seletivos e não seletivos, totalizando 141 isolados bacterianos criopreservados. Até o momento, 71 destes foram identificados taxonomicamente por sequenciamento de uma região hipervariável do 16S rDNA, revelando representantes de quatro filos (Proteobacteria, Firmicutes, Actinobacteria e Bacteroidetes) e 17 famílias bacterianas. Dentre os gêneros identificados destacam-se Pseudomonas (14,3% dos isolados identificados), Leuconostoc (8,6%), Enterococcus (7,1%), Staphylococcus, Carnimonas, Rosenbergiella, Asaia, Gluconobacter, Acinetobacter, entre outros. Alguns isolados puderam ser identificados apenas ao nível de família, como é o caso de representantes de Enterobacteriaceae e Bacillaceae, cujos marcadores genéticos 16S rRNA apresentam baixa resolução para discriminação de gêneros próximos. Bactérias do gênero Asaia, em particular, foram identificadas tanto em Ae. aegypti quanto em Ae. albopictus, sendo considerada uma candidata promissora para aplicações em paratransgênese, dada sua capacidade de colonizar múltiplos tecidos do mosquito, ser cultivável, geneticamente manipulável e transmissível de forma horizontal e vertical. Bactérias simbióticas como Asaia e membros das Enterobacteriaceae, por exemplo, são de especial interesse por sua localização em tecidos como o epitélio intestinal, zona crítica para ativação imune do inseto e potencial interferência na infecção por patógenos. A continuidade do projeto prevê a realização de sequenciamento genômico de dois a três isolados bacterianos, com o objetivo de caracterizar sua genômica funcional e avaliar sua adequação para manipulação genética. Esses avanços permitirão explorar mais profundamente a ecologia dos simbiontes e viabilizar sua utilização em programas de controle biotecnológico de vetores.