Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 3

Bolsista: ISABELA COSTA ARAUJO
Orientador(a): Ivano Raffaele Victorio de Filippis Capasso
Resumo: Neisseria meningitidis é uma bactéria Gram-negativa aeróbica que pode causar infecções graves como meningite e sepse, com taxa de letalidade entre 10% e 20%. A transmissão ocorre por gotículas respiratórias, levando frequentemente à colonização da nasofaringe. A cápsula polissacarídica permite a classificação em 12 sorogrupos, sendo A, B, C, W, Y e X os mais associados à doença invasiva. A cápsula é o principal antígeno e base para vacinas eficazes contra os sorogrupos A, C, W e Y. A infecção se instala quando a bactéria invade a corrente sanguínea, facilitada por danos no epitélio respiratório, como infecções virais ou exposição à fumaça. A doença é mais comum em lactentes, crianças menores de cinco anos e adultos jovens, com maior letalidade em maiores de 25 anos. Os sintomas incluem febre, rigidez de nuca, náuseas, vômitos, cefaleia e confusão mental. Mesmo com tratamento adequado, a taxa de mortalidade continua elevada.Este estudo analisou 38 cepas de N. meningitidis isoladas da orofaringe de estudantes do Rio de Janeiro e Niterói entre 2016 e 2018, previamente identificadas por MALDI-TOF e sequenciamento do gene rpIF, com sorogrupos determinados por PCR. As cepas estão armazenadas na Coleção de Bactérias Patogênicas do LMR-INCQS/FIOCRUZ. A susceptibilidade aos antimicrobianos foi avaliada por disco-difusão e E-test, conforme diretrizes do CLSI (2023), utilizando os antibióticos penicilina, ampicilina, rifampicina, sulfametoxazol-trimetoprima e ceftriaxona.No contexto do programa PIBITI, iniciado em novembro de 2024, foi realizada a reativação das cepas criopreservadas e testes de antibiograma. Algumas cepas não cresceram, mas foi possível extrair DNA de cepas com resistência confirmada ou intermediária à penicilina para análises posteriores. Géis de agarose foram utilizados para verificar a integridade do DNA extraído.Resultados prévios (Coelho-Sousa, 2020) mostraram que 76,3% das cepas foram resistentes à penicilina e 58,3% à ampicilina no teste de CIM. Apenas 5,2% apresentaram resistência à rifampicina, enquanto 7,9% mostraram resistência confirmada à sulfametoxazol-trimetoprima. Todas as cepas foram sensíveis à ceftriaxona. Especificamente, as cepas MCRJ 00314, 00324 e 00253 apresentaram resistência à penicilina; a cepa 00253 também foi resistente à ampicilina; e a MCRJ 00353 mostrou resistência intermediária à penicilina.A produção de beta-lactamase foi testada com discos de Nitrocefin, e nenhuma das cepas apresentou atividade enzimática, sugerindo que o mecanismo de resistência envolve alterações no alvo do antibiótico, como mutações no gene penA, responsável pela codificação da proteína PBP2, que interage com a penicilina na parede bacteriana.O DNA das cepas com resistência a beta-lactâmicos foi extraído para o sequenciamento do gene penA, visando identificar mutações associadas à resistência. A análise dessas mutações pode indicar novos mecanismos de resistência entre cepas brasileiras, auxiliando na compreensão da evolução dessas bactérias e na formulação de estratégias de controle mais eficazes.Conclusão:Os dados apontam um aumento importante na resistência a penicilina e ampicilina entre cepas de N. meningitidis isoladas de portadores assintomáticos. A ausência de produção de beta-lactamase sugere um mecanismo de resistência por alteração do alvo, possivelmente via mutações no gene penA. Esses achados são relevantes para o monitoramento da resistência e o controle da disseminação de cepas virulentas.Perspectivas:As próximas etapas envolvem o sequenciamento do gene penA nas cepas resistentes ou com resistência intermediária, comparando com cepas sensíveis. A identificação de mutações que alterem a estrutura da proteína PBP2 poderá esclarecer mecanismos de resistência e embasar políticas públicas de saúde voltadas à prevenção e controle da doença meningocócica no Brasil.

Bolsista: SARAH OLIVEIRA DA SILVA
Orientador(a): SIMONE PATRÍCIA CARNEIRO DE FREITAS
Resumo: Estudo da Entomofauna Triatomínica, em localidades endêmicas da doença de Chagas no estado do Piauí, aliado a Ações educacionais para Promoção da saúde e Vigilância epidemiológicaAutores: Sarah Oliveira da Silva1, Maurício Luiz Vilela2, Simone Patrícia Carneiro de Freitas31Bolsista PIBIC, Fiocruz Piauí, 2Pesquisador IOC, Laboratório Interdisciplinar de Vigilância Entomológica em Diptera e Hemiptera, Fiocruz RJ, 3Bolsista Fiotec, Fiocruz Regional do Piauí. A doença de Chagas continua sendo um grave problema de saúde pública no estado do Piauí, sendo endêmica em grandes áreas, principalmente na região sudeste. Essa endemicidade está diretamente relacionada a falhas nos serviços de vigilância; e, devido à maioria da população viver nas áreas rurais, em domicílios sem reboco, à probabilidade de invasão e colonização por insetos vetores. Um inquérito entomológico foi realizado em oito localidades rurais do município de Arraial, Piauí, nas quais foram feitas capturas de triatomíneos, pelo método de busca ativa, nos ambientes domiciliares e peridomiciliares. Para estimar a soroprevalência da doença de Chagas nos moradores, foi realizada a coleta de amostras de sangue (5ml) por punção venosa a vácuo. As amostras de sangue foram dissoradas, e o soros encaminhados ao LACEN, onde foram analisados pelos métodos ELISA e IFI. Para as ações educacionais foram usados materiais que abordaram epidemiologia e vigilância da doença de Chagas. Durante as buscas por triatomíneos, não foi capturado nenhum espécime nas unidades domiciliares. No entanto, foram recebidos dois espécimes mortos encontrados pelos moradores, um adulto de Triatoma pseudomaculata e um adulto de Panstrongylus lutzi. Nas moradias, foi feito uma atividade de informação e sensibilização sobre os triatomíneos, usando cards e placas com os espécimes montados à seco. O uso do material auxiliou no questionamento sobre o conhecimento dos moradores em relação a presença dos insetos em suas casas. Na pesquisa sorológica, foram coletadas 374 amostras de sangue, as quais, até o momento, foram analisadas 101, sendo 70 de Chapadinha I e 31 de Malhada de Candeias. As 273 amostras restantes estão em processo de análise. Nos resultados, quatro pessoas testaram positivo para a doença de Chagas: Dois casos em Chapadinha I, uma mulher de 86 anos, analfabeta, e um homem de 76 anos, alfabetizado; e dois casos em Malhada das Candeias, uma mulher de 79 anos (sem informação sobre escolaridade) e um homem de 40 anos, com ensino médio incompleto. Além disso, duas amostras, sendo uma de cada localidade, apresentaram resultado indefinido. As demais 95 amostras analisadas foram negativas para a doença de Chagas. Os resultados dos exames foram entregues na UBS do município de Arraial e, na ocasião, os pacientes positivos foram informados sobre o resultado sorológico, receberam orientações sobre a doença e realizaram exames de eletrocardiograma para avaliar os sinais cardíacos. Diante disso, o presente trabalho contribui para um melhor entendimento da doença de Chagas no município de Arraial e fortalece as medidas preventivas. A continuidade das pesquisas e das ações educativas é essencial para reduzir os casos da doença e melhorar a qualidade de vida das pessoas que vivem em áreas de risco.

Bolsista: LARISSA APARECIDA PEREIRA SOUSA
Orientador(a): LUCIANE ALMEIDA AMADO LEON
Resumo: O cenário atual do COVID-19, com frequente surgimento de variantes de SARS-CoV-2, aumento do número de casos de COVID-19 em 2024, que pode estar associada à baixa cobertura vacinal, alertam para o potencial de novas ondas de transmissão. Desta forma, destacamos a importância de continuar pesquisando a epidemiologia e a biologia molecular desse vírus, assim como conhecer os desfechos dos pacientes críticos para um melhor manejo da doença e desenvolvimento de estratégias de tratamento eficazes. Estudar os perfis de expressão gênica pode ser uma alternativa para a melhor compreensão dos processos biológicos envolvidos na COVID-19, buscando entender as possíveis diferenças entre pacientes que resolvem a infecção de forma rápida e eficaz, e aqueles que desenvolvem quadros clínicos mais graves e, eventualmente, evoluem a óbito. MicroRNAs (miRNAs) são moléculas de RNA fita simples que não codificam proteínas, que estão relacionadas à regulação gênica a nível pós-transcricional, provocando a degradação do RNA mensageiro (mRNA) ou inibindo a tradução de proteínas. Desta forma, os miRNAs podem ser potenciais biomarcadores para COVID-19, visto que há a possibilidade de monitorar a progressão clínica da COVID-19, auxiliando na estratégia de manejo e prognóstico de cada indivíduo. O Objetivo principal deste estudo é avaliar a associação de microRNAs séricos com parâmetros clínicos e desfechos na COVID-19, a fim de identificar seu potencial como biomarcadores não invasivos de gravidade e mortalidade na COVID-19. Para isso, foram incluídos no estudo indivíduos internados no HUCFF-UFRJ com infecção por SARS-CoV-2 confirmada laboratorialmente, que foram classificados em não grave (n=67) e grave (n=39), para comparações de dados clínicos, sociodemográficos e laboratoriais. Indivíduos sem COVID-19 doadores de sangue, provenientes do HEMORIO foram incluídos no estudo como grupo-controle. Todos os pacientes foram acompanhados durante o período de internação até o desfecho (alta ou óbito) e os dados sociodemográficos e clinico-laboratorial foram obtidos dos prontuários. Inicialmente foi realizada a padronização das técnicas de detecção de miRNA em soro, utilizando controle exógeno (cel-mir-39) e controle endógeno (U6) para validar a padronização. A partir dos resultados da padronização, foi realizada a análise da expressão gênica por RT-qPCR, de miRNAs pre-selecionados com perfil de expressão significativamente diferente (DE) entre os grupos com COVID-19 grave e não grave, utilizando o método do Ct comparativo (Ct). Foi feita a avaliação de correlação e área sob a curva (AUC) da expressão dos miRNAs DE com parâmetros clínicos-laboratoriais nos pacientes com COVID-19 grave. O miRNA-143 apresentou um perfil de expressão significativamente maior no grupo grave, comparado ao grupo não-grave e controle (p<0,05). Foi observada uma correlação positiva significativa (r=0,64; p=0,03) entre o miRNA-143-5p e proteína C reativa. Foi observado que o miRNA-143-5p combinado com pico de ferritina (AUC: 0.95; sensibilidade: 1,0; especificidade: 0,88), lactato desidrogenase (AUC: 0.88; sensibilidade: 1.0; especificidade: 0.66), proteína C reativa (AUC: 0.83; sensibilidade 0.78; especificidade: 0.88) e contagem de neutrófilos (AUC=0.82; sensibilidade: 0.78; especificidade: 0.88), aumentaram o potencial preditivo da gravidade da COVID-19, devido a maiores valores observados de AUC. Estes resultados sugerem o potencial do miR-143 como biomarcador de prognóstico da COVID-19 e demonstram que a combinação da expressão do miR-143 com parâmetros clínicos associados à gravidade da COVID-19 pode melhorar a precisão do prognóstico em pacientes infectados por SARS-CoV-2.

Bolsista: Juliana de Azevedo Cuba Fernandes
Orientador(a): CARLOS ROBERTO ALVES
Resumo: As leishmanioses são doenças parasitárias negligenciadas que podem ser identificadas por diferentes metodologias, incluindo a PCR. Pacientes com leucemia oriundos de áreas endêmicas para leishmaniose podem estar infectados com Leishmania spp., e a sintomatologia da leucemia aguda assemelha-se significativamente à da leishmaniose visceral, o que pode levar a um atraso no tratamento adequado, agravando o quadro clínico. Este estudo visa à detecção de Leishmania spp. em amostras biológicas de pacientes com leucemia por meio de diferentes abordagens moleculares. Até o presente momento, foram obtidas 150 amostras de sangue periférico de pacientes atendidos no HEMONORTE (Rio Grande do Norte), das quais o DNA total vem sendo extraído utilizando um kit comercial. Foram utilizados primers direcionados às sequências de DNA de Leishmania infantum e Leishmania chagasi, variando entre 100 pb e 300 pb. Diferentes condições de PCR convencional foram testadas, incluindo HSP70, ITS, kDNA1 e KDNA3. Para otimização, foram utilizadas amostras de DNA do parasito L. infantum cultivado. A abordagem com o gene KDNA3 foi escolhida para a continuidade do estudo, aplicando-se a estratégia de Touchdown-PCR (TD-PCR). A estratificação das amostras mostrou diversidade na classificação hematológica dos pacientes, com diagnósticos de leucemia linfoide aguda (LLA-B, LLA-T e LLA PRO-B) e doença residual mínima. Quinze amostras não evidenciaram leucemia, mas serão analisadas para Leishmania spp., e duas amostras tiveram confirmação de infecção pelo parasito na microscopia óptica. De maneira geral, as abordagens de PCR convencional com HSP70, ITS, kDNA1 e KDNA3 mostraram amplificação com bandas nítidas, porém algumas reações inespecíficas persistiram. A aplicação da TD-PCR com o KDNA3 permitiu a redução dessas amplificações inespecíficas e favoreceu a detecção da sequência-alvo com maior especificidade. A análise cega das amostras de DNA de pacientes testadas (n = 24), até o momento, confirmou a presença de Leishmania spp. em uma das amostras testadas. A TD-PCR mostrou-se uma abordagem promissora para aumentar a especificidade da detecção de Leishmania spp. em amostras biológicas de pacientes com leucemia, favorecendo estudos futuros para melhor identificação de pacientes com leucemia aguda que podem estar infectados com Leishmania spp.

Bolsista: MAYARA DE OLIVEIRA GOMES SANTANA
Orientador(a): FLAVIA MAZZOLI DA ROCHA
Resumo: Introdução: A doença de Chagas (DC) em sua forma cardíaca (CC), responsável por elevada carga de morbimortalidade, possui importante impacto ocupacional e na saúde pública. Considerando o expressivo caráter inflamatório desde a fase aguda da DC, com dano da musculatura esquelética, e durante sua progressão para CC, onde adicionalmente as alterações fisiopatológicas da insuficiência cardíaca impactam na força muscular inspiratória, faz-se necessário investigar o comportamento da força muscular inspiratória durante a evolução da DC. Objetivo: O presente relatório parcial descreve resultado preliminar de um dos objetivos específicos do estudo: Descrever força muscular inspiratória estática e dinâmica e a força muscular periférica na forma indeterminada e na forma cardíaca da DC. Metodologia: Trata-se de um estudo observacional, transversal, que está sendo realizado no Laboratório de Pesquisa Clínica em Doença de Chagas (LapClin-Chagas) do Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas da Fundação Oswaldo Cruz (INI/Fiocruz). Dois grupos estão sendo formados, pacientes com diagnóstico de DC na forma indeterminada (Grupo IF) e pacientes com diagnóstico de DC na forma cardíaca (Grupo CC). Parte da coleta de dados ocorre através do acesso ao prontuário eletrônico (dados sociodemográficos, histórico médico, condições clínicas e função cardíaca pelo último ecocardiograma realizado). Outra parte da coleta de dados, os testes avaliativos, ocorre em uma sala silenciosa, onde são coletados dados da avaliação da força muscular inspiratória estática (manovacuometria - PIM) e dinâmica (resistor linear inspiratório S-Index) e força muscular periférica (dinamometria manual). Resultados preliminares: Em novembro de 2024, iniciou-se o recrutamento dos voluntários da pesquisa. No momento, 9 voluntários foram recrutados (1 do grupo IF e 8 do grupo CC). De acordo com a análise descritiva dos dados, podemos observar que a população inserida se caracteriza como idosa, sendo a maior parte feminina, analfabeta e com sobrepeso. Além disso, observamos hipertensão arterial sistêmica e diabetes mellitus como comorbidades associadas presentes. Dos voluntários com CC, a maioria apresenta cansaço apenas aos grandes esforços e nenhum encontrava-se no estágio B1. Os voluntários apresentaram um valor de PIM e de S-Index acima do valor predito, indicando força muscular inspiratória, estática e dinâmica, preservadas. Além disso, os participantes também apresentaram força muscular periférica normal, ja que os valores medianos masculino (39,3 Kgf) e feminino (19,0 Kgf) se mantiveram acima dos valores de normalidade. Conclusão: Apesar dos resultados preliminares indicarem ausência de fraqueza muscular tanto inspiratória como periférica, o perfil populacional de idosos com comorbidades e sobrepeso sugere um acompanhamento rotineiro destes parâmetros.

Bolsista: MARIANA OLIVEIRA NONOMURA
Orientador(a): VITOR ENNES VIDAL
Resumo: As peptidases desempenham uma série de funções críticas e essenciais para os parasitos da família Tripanosomatidae. Particularmente, a GP63 é um importante fator de virulência bem caracterizada em diversas espécies de Leishmania. Essa molécula é uma metalopeptidase dependente de zinco envolvida em diversas etapas da interação com o hospedeiro vertebrado e o inseto vetor. O número de cópias da GP63 no genoma dos tripanossomatídeos varia desde 5 até mais de 200. Nossa hipótese central é que a expansão gênica está associada com a neofuncionalização, especiação e evolução nos tripanossomatídeos. Neste projeto, objetivamos estudar a filogenia e diversidade de sequências de GP63 em tripanossomatídeos com genoma. Além disso, buscamos comparar a atividade proteolítica e a localização celular da GP63 em diversos tripanossomatídeos. Até o momento, nossos resultados demonstram haver uma expansão gênica da GP63 entre as diferentes espécies de tripanossomatídeos, com alto número de cópias, assim como características conservadas tanto nas sequências analisadas de Leishmania spp., quanto em espécies monoxênicas e em Phytomonas serpens, que infecta plantas, e Bodo sp., um kinetoplastídeo de vida livre. Nossas análises filogenéticas indicam uma diferença das expansões de sequências de GP63 em que entre as leishmanias se deu no cromossomo 10, e entre os monoxênicos essa expansão ocorreu mais relacionadas às sequências dos cromossomos 28 e 31 das Leishmania spp. Quanto à atividade proteolítica das leishmanias e das espécies monoxênicas foi possível observar que L. (Mundinia) enrietti, as paraleishmanias L. herreri e L. equatorensis, e as sauroleishmanias L. (Sauroleishmania) gymnodactyli e L. (Sauroleishmania) hoogstraali, possuem atividade proteolítica associada a uma metalopeptidase. Da mesma forma, os tripanossomatídeos monoxênicos Angomonas deanei, Crithidia fasciculata, Leptomonas seymori e Paratrypanosoma confusum também apresentaram atividade proteolítica de provável metalopeptidase. Os ensaios de western blotting a presença de homólogos de GP63 tanto em tripanossomatídeos dixênicos quanto em monoxênicos. Por fim, foi possível observar a distribuição da GP63 no corpo dos parasitos dos diferentes subgêneros Mundinia, Sauroleishmania, e nas Paraleishmanias. Esses dados reforçam a necessidade de investigar a presença de GP63 e sua atividade em diferentes tripanossomatídeos para uma maior compreensão da evolução da GP63.