Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 2

Bolsista: TAINA DOMINONI BIANCHIN
Orientador(a): Rafi ur Rahman
Resumo: O desenvolvimento de novos produtos de controle de mosquitos é importante para substituir métodos que não demonstram eficácia devido à resistência aos inseticidas, e para aumentar o leque de possíveis estratégias a aplicar no manejo integrado de vetores [1, 2]. Óleos essenciais (OE) são misturas de compostos do metabolismo das plantas produzidos para se protegerem contra microrganismos e insetos. Estes óleos já demonstraram ter potencial para serem usados como larvicidas de mosquito vetores, mas a sua integração como inseticidas em programas de manejo integrado de vectores (IVM) ainda não foi realizada [3, 4]. A aluna Tainá Dominoni Bianchin será inserida no projeto “Um larvicida ambientalmente amigável para controle de mosquitos”, focando na caraterização do impacto que os óleos encapsulados em levedura têm na diversidade bacteriana dos criadores larvares e no comportamento de oviposição do mosquito Aedes aegypti. Os óleos com propriedades atrativas/estimulantes para oviposição podem ser utilizados para melhorar armadilhas focadas nas fêmeas grávidas evitando a postura de ovos em ambientes naturais, o que quebra o ciclo reprodutivo do mosquito, enquanto óleos repelentes/dissuasores da oviposição permitem criar estratégias para proteger locais tipicamente usados por mosquitos como criadores larvares, especialmente aqueles que não podem ser removidos do seu ambiente ou apresentam valor económico (e.g. reservas de água potável; produtos industriais ou comerciais, tais como pneus e plantas). Este subprojeto vai permitir entender se o larvicida altera a flora bacteriana após o tratamento e como isso poderá alterar a oviposição dos mosquitos. Para desenvolver a revisão bibliográfica sobre o impacto das bactérias e metabolitos bacterianos na oviposição de mosquitos Aedes aegypti usaremos a estratégia de organização de pesquisa bibliográfica denominada SPIDER (Sample, Phenomenon of Interest, Design, Evaluation, Research Type)[5]. Na parte experimental do projeto, três óleos essenciais encapsulados em leveduras serão utilizados no nosso subprojeto (óleos serão mantidos em sigilo). Ensaios de oviposição em semi-campo serão realizados dentro gaiola Pop-up com mangas (W60 x D60 x H90 cm) em condições ambientais com luz natural e flutuação de temperatura num pátio protegido da chuva, usando quatro ovitrampas (duas tratados vs. duas controles) serão inseridas dentro de uma gaiola pop-up (uma armadilha em cada canto) com um padrão diagonal que varia ao longo dos ensaios evitando o enviesamento associado à localização da ovitrampa. Em cada gaiola, uma fêmea grávida é inserida dentro de uma gaiola Pop-up para inferir o número de ovos postos em cada condição após 24 h à 72 h. O número de ovos é contado nas placas de madeira e na solução para todas as ovitrampas. Este procedimento será repetido quatro vezes para cada OE/concentração rodando a posição das ovitrampas. O índice de atividade da oviposição (OAI) [6] será utilizado para inferir a atratividade/repelência da substância à oviposição. Para verificar o impacto dos larvicidas de óleo essencial nas populações bacterianas vamos realizar ensaios de atividade antibacteriana com leituras de turbidez do crescimento bacteriano de cinco diferentes espécies de bactérias incubadas com os OE seguindo protocolo de Castro et al. [7]. Numa segunda fase, ensaios de oviposição serão realizados combinando tratamentos com bactérias e OE nos criadouros de forma a identificar a variação na oviposição do mosquito Ae. aegypti quando o tratamento com OE ocorre na presença de bactérias especificas. Referências [1] Moyes C.L. et al.(2017) PLoS Negl Trop Dis,11(7): e0005625. [2] Achee NL et al.(2019) PLoS Negl Trop Dis, 13(1):e0006822. [3] Dias C.N. and Moraes D.F. (2014) Parasitol Res,113(2):565-592. [4] Pavela R et al. (2019) Acta Trop, 193:236–71. [5] Cooke A et al. (2012) Qual Health Res, 22(10):1435-1443. [6] Kramer WL & Mulla MS (1979) Environ Entomol, 8(6):1111-1117. [7] Castro DP et al. (2012) PLoS One, 7(5):e36591.

Bolsista: Júlia Valle Gonçalves Rodrigues
Orientador(a): LUNA BARROCO DE LACERDA
Resumo: A malária está entre as doenças parasitárias mais letais do mundo e apesar de existirem diversos estudos para o desenvolvimento de vacinas maláricas, ainda hoje não existem alternativas eficazes para o combate a esta doença endêmica. A maioria das estratégias vacinais antimaláricas, visam a resposta humoral, voltada para a produção de anticorpos e são direcionadas principalmente para o Plasmodium falciparum. Estudos recentes demonstram a importância da resposta celular na proteção contra Plasmodium spp. e no desenvolvimento de estratégias vacinais. Em conformidade, nosso grupo de pesquisa elucidou recentemente um mecanismo imunológico desencadeado pela infecção com P. vivax, no qual foi caracterizado que reticulócitos infectados com esse parasito são capazes de apresentar antígenos via HLA de classe I, ativando então, células T CD8+, que induzem à morte da célula infectada e do parasito intracelular. Demonstrando assim, a importância da resposta celular na imunidade desencadeada pela infecção com o P. vivax. Nesse contexto, o presente projeto tem como objetivo validar os estudos realizados com os antígenos de P. vivax, selecionados através de análises de imunopeptidômica, da sua capacidade imunogênica e antigênica. Para o avanço de nossos estudos, é fundamental que a geração desses antígenos seja realizada seguindo os princípios das Boas Práticas de Laboratório (BPL) o que apresenta uma garantia de qualidade e rastreabilidade para o desenvolvimento eficaz de uma pesquisa translacional. O estudo das reprodutibilidades dos testes realizados com os antígenos de P.vivax para desenvolvimento de teste diagnostico e/ou vacina visa aprimorar os projetos de pesquisa do nosso laboratório para desenvolvimento estratégias para o combate a malária de forma eficiente e promissora.

Bolsista: BEATRIZ OLIVEIRA BARROS
Orientador(a): NAIARA CRISTINA CLEMENTE DOS SANTOS TAVARES DE PAULA
Resumo: Desde o início do século 20, as infecções virais transmitidas por artrópodes têm sido um grave problema global de saúde pública. Epidemias de febre amarela e dengue no Brasil, desde 1929 e 1981, respectivamente, têm sido enfrentadas há mais de 50 anos, e novas ameaças como CHIKV, ZIKV e WNV surgiram nas Américas nas últimas décadas. Recentemente, OROV e MAYV foram reportados na região da Amazônia e têm potencial para provocar graves epidemias no futuro. A OMS afirma que a vigilância, controle do vetor, testes diagnósticos, vacinas e terapias específicas são necessários para controlar as arboviroses emergentes e reemergentes. O Brasil tem sofrido com essas doenças, com 11,6 milhões de infecções e 7 mil óbitos relacionados à dengue, zika e chikungunya nos últimos dez anos, representando 91% das mortes. É crucial que sejam realizadas pesquisas científicas para gerar inovações e conhecimento sobre prevenção, controle, diagnóstico, prognóstico e tratamento de arboviroses, com o objetivo de reduzir seu impacto na população e melhorar a saúde pública do país. Além disso, é importante destacar que as Emergências em Saúde Pública podem afetar a capacidade de vigilância e resposta dos sistemas de saúde, principalmente em áreas com desastres naturais, comprometendo a detecção de arboviroses. A vigilância em saúde é um fator crucial para detectar e prevenir a disseminação de doenças e surtos epidêmicos. Portanto, o desenvolvimento de um diagnóstico multiplex com PCR quantitativa para vigilância epidemiológica de arboviroses em Minas Gerais é uma medida importante e inovadora. Esse projeto busca desenvolver um diagnóstico de alta sensibilidade e especificidade, que poderá ser útil na identificação rápida de arbovírus relevantes para a saúde pública, fornecendo informações valiosas para profissionais de saúde e permitindo o estabelecimento de medidas preventivas e a contenção de possíveis surtos epidêmicos. Para o desenvolvimento do diagnóstico multiplex, serão utilizados iniciadores específicos para cada arbovírus, que serão desenhados com base nas sequências preditas no NCBI. O RNA viral de cada arbovírus será extraído a partir de amostras clínicas de pacientes infectados, usando um kit específico. Em seguida, será realizada a síntese de cDNA para obtenção de molde para a amplificação por PCR. A amplificação do cDNA será realizada usando os iniciadores desenhados, em uma reação multiplex, que permitirá a detecção de múltiplos arbovírus em uma única reação. Os produtos de PCR provenientes da purificação serão inseridos no vetor pGEM(Marca Registrada) -T Easy, seguido de transformação em bactérias Escherichia coli cepa DH5Alpha, extração plasmidial e sequenciamento. A análise de sequência permitirá a confirmação da identidade dos arbovírus detectados. Será realizada a padronização da reação, definindo as temperaturas de anelamento, o número de ciclos e o tempo de amplificação para obtenção dos Cts. O protocolo da OMS para diagnóstico de Febre Amarela será utilizado como guia e adaptado para cada estudo de iniciadores. Os produtos de amplificação serão submetidos a uma corrida em gel de agarose e purificados. A eficiência dos iniciadores será determinada com a concentração gradiente. A sensibilidade será avaliada com diluições seriadas de plasmídeos e RNA viral, e a especificidade será avaliada em amostras clínicas. Os iniciadores com melhores resultados serão selecionados para a validação clínica em amostras de pacientes. Com base nos resultados obtidos por este estudo, espera-se desenvolver um diagnóstico multiplex que possa contribuir significativamente para a vigilância epidemiológica de arboviroses em Minas Gerais e no Brasil.