Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 2

Bolsista: CAIO MOREIRA DO VALE
Orientador(a): JACENIR REIS DOS SANTOS MALLET
Resumo: Tripanossomatídeos (Excavata, Kinetoplastea) são microeucariotos parasitos de insetos, plantas e vertebrados, de distribuição cosmopolita, muitas vezes causando etiologias em seus hospedeiros e vetores. Meios complexos são rotineiramente utilizados para isolamento e manutenção destas espécies in vitro (como meios NNN, LIT, BHI/Warren, LIBHIT, FYTS entre outros), oriundas de diferentes ecótopos e hospedeiros, subsidiando seu crescimento para análises por diversas abordagens; estas, fundamentais para elucidação de determinantes para compreensão de sua biologia, bioquímica e características moleculares. Entretanto, muitas espécies/cepas não são cultiváveis in vitro, ou de crescimento é considerado fastidioso, inviabilizando estudos de maior complexidade. Neste cenário, estudos que permitam o desenvolvimento de novos meios complexos ou quimicamente definidos são extremamente pertinentes. Para isto, substratos ou frações de meios complexos ou quimicamente definidos serão suplementados, e diferentes amostras de tripanossomatídeos consideradas de crescimento difícil em meios tradicionais terão seu crescimento in vitro avaliado em diferentes intervalos de tempo, utilizando-se hemocitômetro de Neubauer para quantificação. Resultados preliminares indicam a composição de um novo meio de cultura que viabilizou o crescimento exponencial de duas espécies fastidiosas in vitro, obtendo-se um quantitativo de células com suas caraterísticas morfológicas clássicas e viáveis para estudos em diferentes abordagens.

Bolsista: THAMIRES ROSA DA CONCEICAO DE FREITAS
Orientador(a): MONIQUE RAMOS DE OLIVEIRA GARCIA
Resumo: As VEs são estruturas carreadoras de diferentes biomoléculas no organismo, secretadas por distintos tipos celulares, elas possuem a importante função de promover a comunicação intercelular. Elas exercem um papel importante em processos de inflamação, coagulação e homeostase vesicular, também associadas a ativação de respostas inflamatórias e imunes, proliferação celular e apoptose. Alguns estudos descreveram a importância destas estruturas em doenças como dengue e chikungunya. Em razão disso, o estudo e caracterização do conteúdo das vesículas extracelulares durante as infecções virais é uma estratégia interessante para a compreensão dos processos imunometabólicos associados a essas doenças. Metodologicamente, o plasma sanguíneo é a principal fonte de VEs para as investigações clínicas. Porém, a presença de lipoproteínas plasmáticas, que possuem tamanho e densidades semelhantes aos subconjuntos de VEs, torna o isolamento das vesículas extracelulares, sem a presença de contaminantes plasmáticos, um desafio. Portanto, é essencial a redução e/ou eliminação de lipoproteínas e outros conteúdos plasmáticos, buscando evitar resultados cruzados ou suprimidos por essas lipoproteínas em análises de VEs plasmáticas. Para solucionar esse desafio metodológico, recentemente, nosso grupo combinou duas técnicas de isolamento que permite a obtenção das VEs livres dos contaminantes lipoproteicos e plasmáticos, mantendo sua integridade estrutural, para em seguida, realizar análises proteômicas. Com base nisso, temos por objetivo principal deste projeto implementar o uso do novo método de isolamento das VEs, livre de contaminantes, em nossa rotina de pesquisa. Nós pretendemos aplicar o método recentemente desenvolvido para o isolamento eficaz de VEs de diferentes doenças virais e, de nLC-MS/MS e abordagem shotgun-proteomics na caracterização dessas vesículas extracelulares isoladas e identificar das proteínas relacionadas aos processos fisiopatológicos associados às arboviroses estudadas. Acreditamos que a realização deste projeto contribuirá com insights para os mecanismos associados a essas doenças e, no investimento de formação científica para a iniciação da aluna no ambiente de pesquisa laboratorial, promovendo conhecimento científico e despertando senso crítico, sendo assim uma futura experiência a se agregada positivamente para sua formação profissional.

Bolsista: PEDRO HENRIQUE LAZZAROTTO FERNANDES
Orientador(a): FERNANDO AUGUSTO BOZZA
Resumo: Justificativa e Relevância: O Acidente Vascular Cerebral (AVC) acontece quando vasos que levam sangue ao cérebro são obstruídos (AVC isquêmico - AVCi) ou se rompem (AVC hemorrágico- AVCh), provocando dano cerebral. O AVC é a segunda maior causa de morte no mundo, contabilizando 6.55 milhões de mortes em 2019 (Global Burden of Diseases Study, 2019). As hemorragias intracerebrais apresentam alta taxa de morbidade e de mortalidade e não existe tratamento eficaz. Além disso, muitos sobreviventes desenvolvem danos cognitivos, ocasionando elevados custos para o sistema único de saúde (Safanelli et al., 2019). Após uma hemorragia intracerebral, o rompimento das hemácias causa ativação das células de microglia, principal célula imune residente no sistema nervoso central (SNC). Tanto a hemoglobina quanto seu subproduto hemina causam a polarização da microglia para um fenótipo pró-inflamatório (Bi et al., 2021), gerando estresse oxidativo, excitotoxicidade e citotoxicidade que leva a morte neuronal, enquanto o fenótipo anti-inflamatório ajuda na remoção do hematoma e promove regeneração tecidual. A proporção entre os dois fenótipos parece definir o prognóstico. Dessa forma, a modulação da microglia tem grande potencial terapêutico para o tratamento do AVCh. Essa modulação pode ser feita alterando-se a fonte energética, já que os corpos cetônicos como o Beta-hidroxibutirato (BHB) têm efeitos citoprotetores, reduzindo o estresse oxidativo e atuando como sinal anti-inflamatório (Wang et al., 2019). Dietas cetogênicas reduzem a ativação microglial (Longo e Mattson, 2014) e o jejum intermitente reduz a disfunção cognitiva induzida por LPS (Vasconcelos et al., 2014) e a produção de IL-1Beta pós isquemia (Fan et al., 2014). Além disso, BHB reduziu os níveis de TNF-Alpha e IL-1Beta e aumentou os níveis de IL-10 em cultura de microglia estimulada com LPS (Guojin et al., 2017). Objetivo: Estabelecer no laboratório um modelo in vitro de AVCh utilizando células de microglia e hemina e testar a ativação microglial na presença de glicose e na presença de BHB. Objetivos específicos: - Estabelecer no laboratório um modelo in vitro de acidente vascular cerebral hemorrágico; - Avaliar a morfologia microglial e a expressão de iba-1, comparando a condição controle com a condição experimental; - Avaliar a expressão de moléculas inflamatórias no sobrenadante das culturas; - Avaliar se a presença de BHB ou glicose no meio de cultura altera a ativação microglial na condição controle e na condição experimental. Metodologia: Cultura de células BV2: As células da linhagem BV2 (microglia murina) serão mantidas em meio RPMI-1640 suplementado com 2mM de glutamina, 10mM de HEPES, 1mM de piruvato de sódio, 4500mg/L de glicose , 1500mg/L de bicarbonato de sódio, 1% de penicilina-estreptomicina e 10% de soro fetal bovino. As células serão mantidas em garrafas de 75cm2 em estufa 95%O2/5%CO2 a 37°C. As células serão passadas quando alcançarem 75% de confluência numa proporção de 1:10 utilizando tripsina para soltarem do fundo da placa. As centrifugações serão feitas por 7 minutos a 130g. Estímulo com hemina e recolhimento do meio condicionado: As células da linhagem BV2 serão contadas e replaqueadas em uma densidade de 105 células sobre lamínulas de vidro em placas de 24 poços com meio DMEM / F12 suplementado com 10% de SFB. Após adesão, as células são incubadas com meio DMEM com glicose ou meio DMEM com BHB, nas condições controle ou na presença de hemina (100uM) por 24 horas. Para recolhimento do meio condicionado, 24hrs após o estímulo, as culturas serão lavadas para eliminar completamente o estímulo. Em seguida, elas serão mantidas durante mais 24hs em meio DMEM/F12 sem SFB. O meio recolhido será então centrifugado para remover detritos celulares e utilizado imediatamente ou guardado a -80oC. As células microgliais nas diferentes condições serão processadas para imunocitoquímica. ELISA: As concentrações de IL-1Beta e de TNF-a no meio condicionado das culturas de microglia submetidas às diferentes condições experimentais será avaliado através da técnica de ELISA seguindo as instruções dos fabricantes (Duo Set Kit, R&D Systems). Imunocitoquímica: Para realização de imunocitoquímica, as culturas serão fixadas com paraformaldeído a 4% (PFA) durante 15 min e permeabilizadas com 0,2% de Triton X-100 durante 5 minutos à temperatura ambiente. Após a permeabilização, as células serão bloqueadas com soro normal de cabra durante 1 h e incubadas durante a noite a 4 ° C com o anticorpo primário: Mouse anti-Iba-1. Após incubação, as células serão lavadas com PBS e incubadas com o anticorpo secundário Alexa Fluor 488 anti-mouse durante 2 h à temperatura ambiente. Os núcleos serão contra-corados com DAPI.

Bolsista: RUTE CRISTINA MARQUES COSTA
Orientador(a): Felipe Arley Costa Pessoa
Resumo: Os insetos do gênero Culicoides são diminutos, com 1-3 mm de comprimento. É o gênero mais estudado dentro da família Ceratopogonidae, por serem vetores de patógenos de importância médica e veterinária como vírus Língua Azul em ruminantes domésticos e selvagens, e em humanos, vírus Oropouche e algumas espécies de filárias, também são suspeitos a serem vetores de leishmanias. Existem poucos estudos de Culicoides Latreille na região e nenhum estudo para o município de Urucurituba-AM. Essa falta de estudo pode estar relacionada à falta de investimentos, e por conta da dificuldade de se identificar esses dípteros, devido seu diminuto tamanho. Identificar um inseto que possui importância ecológica, econômica e epidemiológica pode contribuir na solução de problemas entomológicos que possam ocorrer. O foco desse trabalho é conhecer a biodiversidade de Culicoides Latreille no município de Urucurituba, identificando as espécies de Culicoides que ocorre na área de estudo e comparando a riqueza, abundância e diversidade nos seguintes ambientes: florestas, borda de florestas e peridomicílio. O trabalho será realizado no município de Urucurituba no estado do Amazonas, em ambientes florestais e periurbanos nos arredores de Urucurituba, entre os rios Madeira e Tapajós. Para a coleta dos insetos será utilizada armadilhas luminosas tipo CDC. As armadilhas serão instaladas a 1,5m acima do solo e permanecerão por 12h no campo, no período de 18h à 6h. As coletas serão realizadas em transecto horizontal. Alguns morfotipos serão processados individualmente no processo de dissecação para a montagem de lâmina para a análise microscópica e identificação morfológica e identificadas em nível de espécie, através de observações por microscopia óptica, utilizando chaves de identificação, artigos com descrição de espécies. Para avaliar os efeitos dos ambientes na abundância e riqueza dos insetos, serão realizados modelos lineares generalizados mistos (GLMM) com distribuição Poison (para riqueza) e distribuição Gaussiana (para abundância). O estudo visa contribuir com o conhecimento sobre a biodiversidade de Culicoides na área de estudo, verificar se há presença de espécies já apontadas com vetoras de doenças, mostrar diferenças na composição de espécies nos diferentes ambientes e relatar quais espécies estão se adaptando ao peridomicílio.

Bolsista: RODRIGO PARANHOS SANTOS
Orientador(a): Maria da Conceição Chagas de Almeida
Resumo: Parece um consenso que ao longo dos anos houve o aumento do desejo de ingresso no funcionalismo público (FRANCO, DRUCK e SELIGMANN. 2010)(SILVA, SOUZA e TEIXEIRA. 2017), resultando em uma intensificação de disputa entre trabalhadores estáveis e não estáveis (FRANCO, DRUCK e SELIGMANN. 2010) mesmo com uma fragilização do reconhecimento social e valorização simbólica (FRANCO, DRUCK e SELIGMANN. 2010), provavelmente ocorridas pelas garantias de desprecarização idealizadas sobre o serviço público ou pela estabilidade oferecida (SILVA, SOUZA e TEIXEIRA. 2017). Entretanto, não foi identificada na literatura, até o momento, análises quantitativas sobre distorção entre nível funcional e escolaridade e a associação com sintomas de depressão ou de ansiedade entre os servidores públicos. A psicologia organizacional e do trabalho tenta aprofundar o conhecimento a respeito dos mais diversos âmbitos do binômio trabalhador- empregador, no sentido de perceber divergências e possibilidades de ações efetivas que minimizem possíveis desigualdades e injustiças (ZANELLI, BORGES ANDRADE E BASTOS. 2014). Neste sentido, pretende-se aprofundar a análise dos dados cruzando as distorções existentes com variáveis como sexo, raça/ cor, possuir filhos, números de filhos, situação conjugal e idade quantificando resultados e permitindo, de maneira embasada, garantir reflexões fundamentas para elaboração de políticas públicas levando em consideração a saúde mental dos servidores e suas especificidades. Foi analisado o índice de distorção entre as variáveis nível funcional e escolaridade disponíveis no banco de dados da onda 1 do ELSA-Brasil, e, posteriormente investigando correlação deste percentual com sintomas de ansiedade e depressão. De um total de 15105 participantes voluntários de 6 instituições públicas brasileiras cujos dados foram coletados na onda 1 do ELSA Brasil, foram utilizados para este projeto 7.791 por possuírem critério de inclusão necessário para a análise: situação ativa e em condição passível de distorção entre a função exercida e a escolaridade. Do total resultante, 44,28% não estão em situação de distorção entre seu nível funcional e os cargos ao qual exercem, 26,25% estão em distorção de nível médio para apoio e 29,47% estão em distorção de nível superior para médio ou médio para apoio. Chegou-se a um número de 4341 pessoas em situação de distorção, o equivalente a 55,72% da amostra analisada. Posteriormente, gerou-se os resultados do cruzamento entre as variáveis nível funcional e escolaridade e duas sessões do CIS R (Clinical Interview Schedule Revised) referente a sintomas de ansiedade e sintomas de depressão. (SANTOS ET AL. 2013). As distorção quando cruzados com a variável sexo e sintomas de depressão e sintomas de ansiedade resultaram em P=0.062 e P= 0.356 respectivamente para o sexo masculino e P=0.000 e P=0.008 para o sexo feminino. Tal resultado aponta para uma possível correlação entre o sexo feminino e os desfechos observados. Referências: 1- FRANCO, Tânia; DRUCK, Graça; SELIGMANN-SILVA, Edith. As novas relações de trabalho, o desgaste mental do trabalhador e os transtornos mentais no trabalho precarizado. Rev. bras. saúde ocup., São Paulo, v. 35, n. 122, p. 229-248, Dez. 2010. 2- Santos. M Santos et al. (2013). Adaptação transcultural e confiabilidade de medidas de características autorreferidas de vizinhança no ELSA-Brasil. (Supl 2): 122 a 130. Disponível em: DOI: 10.1590/S0034-8910.2013047003871. Acesso em 01 de novembro de 2021. 3- SILVA, Priscila Matos Crisostomo da; SOUZA, Kátia Reis de; TEIXEIRA, Liliane Reis. POLÍTICA DE DESPRECARIZAÇÃO DO TRABALHO EM SAÚDE EM UMA INSTITUIÇÃO FEDERAL DE C&T: A EXPERIÊNCIA DE PROFESSORES E PESQUISADORES. Trab. educ. saúde, Rio de Janeiro, v. 15, n. 1, p. 95-116, Apr. 2017. 4- ZANELLI, José Carlos; BORGES ANDRADE, Jairo Eduardo; BASTOS, Antonio Virgílio Bittencourt. Psicologia, Organizações e Trabalho no Brasil. 2. ed. Porto Alegre-RS: Artmed, 2014.

Bolsista: YASMIM LACERDA NUNES
Orientador(a): Letusa Albrecht
Resumo: A malária constitui um dos maiores problemas de saúde pública mundial, sendo responsável por aproximadamente meio milhão de mortes anuais. As infecções causadas por P. vivax são raramente letais. No entanto, têm um impacto significativo sobre a produtividade das populações locais. O surgimento de cepas resistentes às drogas complica ainda mais a infecção por P. vivax, o que leva à intensificação das investigações sobre métodos de controle alternativos, como por exemplo o desenvolvimento de vacinas. Além disso, o parasito apresenta um grande número de antígenos polimórficos, dificultando a identificação dos candidatos vacinais ideais. A família das proteínas do pescoço de roptria (RON), codificam antígenos maláricos importantes para a invasão do parasito durante diversas etapas do ciclo de vida e apresentam baixa taxa de diversidade, características importantes para bons candidatos vacinais. Sendo assim, neste projeto o objetivo é construir um antígeno quimérico, composto por epítopos de células B e T, provenientes das proteínas RON2, RON4 e RON5 de P. vivax. Serão utilizadas ferramentas computacionais para a identificação in sílico dos melhores epítopos. Na sequencia, será avaliado as características antigênicas, imunogênicas e de segurança do antígeno gerado, através de imuno simulações. Por fim, a sequencia referente a este antígeno será sintetizada em um plasmídeo e será expressa em sistema recombinante bacteriano. Acreditamos que cada etapa deste projeto tem potencial inovador e o seu desenvolvimento auxiliará na escolha de novos candidatos vacinais contra a malária vivax.