Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 2

Bolsista: BARBARA FRANCO MANFRON
Orientador(a): Pryscilla Fanini Wowk
Resumo: O Bacilo de Calmette-Guérin (BCG) é uma vacina atenuada, utilizada para prevenir casos graves de tuberculose. Estudos realizados relatam que a vacinação com BCG contribui com a redução da mortalidade infantil, fato subsidiado pela proteção oferecida pelo bacilo contra agentes infecciosos não relacionados. Em outros trabalhos, foi constatada uma redução da incidência do vírus sincicial respiratório, além de uma diminuição de infecções do trato respiratório em indivíduos vacinados. Esses dados podem ser explicados pela reprogramação epigenética induzida pela BCG, nas células de imunidade inata, acarretando uma resposta imune intensa frente à estímulos secundários, fenômeno chamado de imunidade treinada. Há indícios que a atividade moduladora da BCG possa contribuir para retardar efeitos celulares de imunossenescência, além disso, a vacina vem sendo utilizada para o tratamento do câncer de bexiga e outros tumores malignos. Os mecanismos moleculares que suportam esse fenômeno ainda não estão claros. Para aprofundarmos os estudos nesta área é essencial a padronização da curva de crescimento de BCG em meio líquido, determinar a concentração bacteriana por mensuração da densidade óptica (DO) de cultura bacteriana e interpolação com os dados de titulação (unidades formadoras de colônia –UFC) da mesma. Além disso, os estoques bacterianos produzidos precisam ser testados quando a sua eficiência em infectar e ativar células da resposta imune. Desta forma, a determinação da curva de crescimento de BCG está sendo realizada pela relação entre densidade óptica de cultura bacteriana em meio líquido e a quantificação das UFCs realizadas por meio de titulação em meio sólido. Resultados obtidos até o momento demostraram que o cultivo com aeração e agitação mecânica foi mais eficiente, com aumento da turbidez em culturas submetidas à agitação, em relação a culturas estacionárias. Em relação ao congelamento, fator inicialmente considerado responsável pela diminuição da viabilidade celular, não se observou diferença ao avaliarmos o crescimento de alíquotas anteriormente congeladas ou com taxa mais lenta (Mr. Frosty). Entretanto, estudos comprovaram que a taxa de perda de calor é importante para manter a viabilidade da BCG, motivo pelo qual passamos a utilizar o Mr. Frosty ao realizar o congelamento de alíquotas. As modificações no protocolo permitiram a produção de estoques de BCG, porém novas padronizações estão em andamento para que sejam obtidos títulos bacterianos maiores. Além disso, foi realizado um ensaio piloto com camundongos C57/Bl6 e IFNAR-KO, deficientes para o receptor IFN do Tipo I, para comprovar a viabilidade das bactérias produzidas e sua capacidade de elicitar ativação da resposta imune celular. Após a inoculação de BCG na pata dos animais, as células do sítio são ativadas e migram para os linfonodos drenantes da pata. Assim, linfonodos poplíteos foram recuperados e o número de células por linfonodo determinado. O ensaio in vivo, com camundongos confirmou a viabilidade e ação inflamatória da inoculação de BCG através do aumento do número de células no linfonodo poplíteo. Novos ensaios de infecção in vitro de macrófagos de linhagem ou derivados de medula óssea com BCG marcada com CFSE também auxiliarão no controle de qualidade dos lotes produzidos. Estes dados ressaltam a importância do trabalho de padronização. A padronização da curva de crescimento de BCG e das condições ótimas para cultivar a bactéria contribuirão para projetos do grupo.

Bolsista: GIOVANNA OLIVEIRA DE NIGRIS
Orientador(a): MARCIA CRISTINA NASCIMENTO JUSTO
Resumo: O nível de impacto sobre a diversidade de peixes devido a intensa ação do homem que destrói o habitat, introduz espécies exóticas e provoca alterações ambientais mudando o percurso natural das águas vem aumentando consideravelmente. O estresse provocado nos peixes em consequência desses processos de degradação ambiental pode contribuir para o aumento do número de espécies parasitas com ciclo de vida direto como os Monogenoidea, provocando grandes danos à população de peixes. Os Monogenoidea são parasitos, encontrados principalmente nas brânquias de peixes, que apresentam ciclo de vida direto, alta diversidade de espécies e uma grande especificidade de hospedeiro. Esses helmintos, quando em grandes infestações podem causar danos aos peixes ou mesmo levá-los à morte, já que induzem à uma excessiva produção de muco nos filamentos branquiais, diminuindo sensivelmente as taxas respiratórias e de crescimento. A taxonomia e sistemática sustentam todas as pesquisas em ecologia e evolução, bem como áreas de ciências aplicadas, sendo necessário descobrir os parasitos e identificá-los corretamente. Considerando essas premissas, o objetivo do projeto é o estudo da diversidade de Monogenoidea parasitos de peixes provenientes do curso hidrográfico da bacia do Rio Munim, no extremo leste do estado do Maranhão. Nesta bacia são conhecidas 123 diferentes espécies de peixes, em sua maioria endêmicas, que são impactadas diretamente pela ação antrópica. Para esse estudo, serão examinados exemplares pertencentes a duas espécies de peixes de pequeno porte, Anablepsoides vieirai Nielsen, 2016 (Cyprinodontiformes, Rivulidae) e Ituglanis cf. amazonicus (Steindachner 1882) (Trichomycteridae, Siluriformes) provenientes da bacia do Rio Munim. Apesar da grande diversidade e endemismo da ictiofauna presentes nesta bacia, até o momento não há registros de estudos de parasitismo em peixes. As coletas dos hospedeiros serão realizadas com rede de arrasto e tarrafa e os peixes serão mantidos aerados para o devido transporte até o Laboratório de Sistemática e Ecologia de Organismos Aquáticos (LASEOA) da Universidade Federal do Maranhão (UFMA), onde serão identificados e anestesiados com eugenol, seguindo protocolo adequado. Após a identificação, os hospedeiros serão necropsiados e as brânquias serão colocadas em frascos contendo água aquecida a aproximadamente 65º C, para relaxamento e destacamento dos espécimes dos filamentos branquiais. Posteriormente, adiciona-se etanol absoluto para atingir a concentração aproximada de 70%, procedendo então, a fixação dos parasitos. Os frascos contendo as brânquias serão enviadas para o Laboratório de Helmintos Parasitos de Peixes – LHPP do Instituto Oswaldo Cruz. No LHPP, os filamentos branquiais serão raspados e os Monogenoidea serão coletados e processados de acordo com metodologia adequada para o grupo. Os espécimes serão estudados em microscópio de luz, ilustrados com auxílio de um tubo de desenho acoplado ao microscópio e medidos com ocular micrométrica. Após identificados os helmintos serão depositadas em coleções especializadas.

Bolsista: Ellen Damasio Mascarenhas
Orientador(a): TATIANA ALMEIDA PADUA
Resumo: RESUMO DO SUBPROJETO: ESTUDO DA AÇÃO DO B-CARIOFILENO SOBRE A ATIVAÇÃO DO RECEPTOR CB2 EM NEUTRÓFILOS INDUZIDA POR MEDIADORES PRESENTES NA MALÁRIA Justificativa e objetivo: O estudo da modulação das células do sistema imune inato ativadas pela infecção por Plasmodium spp. é importante para a obtenção de conhecimento que suportem a descoberta de novas terapias antimaláricas. Estudos sugerem o uso de imunomoduladores como tratamento concomitante aos antimaláricos, uma vez que a desativação da resposta imune junto a morte do parasita, pode levar a recuperação mais rápida do paciente. De fato, é importante perceber a patologia causada pela malária como uma resposta inflamatória sistêmica exacerbada induzida por um agente persistente, mas que não termina após a eliminação do parasita. Na procura de novos alvos terapêuticos para a modulação da inflamação induzida pela malária, ligantes dos receptores canabinoides como o b-cariofileno, um sesquiterpeno presente em plantas como copaíba spp. e cannabis spp., tem demonstrado propriedades promissoras. Irrera, N e colaboradores demonstraram que o b-cariofileno apresentou efeito anti-inflamatório em modelo de artrite por colágeno e antiproliferativo em células de glioblastoma (Irrera, N, 2019, 2020). Andrade-Silva, M e colaboradores por sua vez demostraram que o B-cariofileno impede o acúmulo de neutrófilos na cavidade pleural e a produção de CXCL-1/KC, leucotrineo B4, IL-12 e óxido nítrico em modelo experimental de inflamação pulmonar induzida de BCG (Andrade-Silva, 2016). Desta forma, o objetivo desse projeto é investigar o efeito do b-cariofileno em neutrófilos ativados por mediadores inflamatórios presentes na infecção por Plasmodium spp. Metodologia resumida: Para a execução dos experimentos, células da linhagem de promieloblastos humanos (HL-60) serão diferenciados em “neutrophil-like cells” (dHL-60) através da suplementação do seu meio de cultivo com 1,3% de DMSO estéril durante 6 dias (Millius e Weiner, 2010). Para a avaliação da quimiotaxia das dHL-60, 5x105 células/poço serão incubadas com agonistas e antagonistas do receptor CB2 (JWH133, 10uM; b-Cariofileno, 100uM; ou SR144528, 0,5uM) e colocados em transwell frente a estímulos como: rhIL-8, fMLP ou Hemozoína por 1h. A contagem dos neutrófilos que migraram será feita na membrana de policarbonato em microscópio óptico (Zeiss Axioskop 2, Alemanha). A NETose da dHL-60 será avaliada pela marcação com SYTOXTM Green e os dados serão obtidos por análise espectrofotométrica (SpectraMax M5, Molecular Devices, CA, USA). Em todos os ensaios realizados os sobrenadantes serão coletados para a quantificação dos mediadores inflamatórios como: (1) NO pelo método da reação de Griess, (2) citocinas e quimiocinas ((IL)-1b, IL-6, TNF-a, IP-10/CXCL-10, CCL-2/MCP-1) por ELISA sanduíche, (3) EROS e MPO por kits de detecção de acordo com as instruções dos fabricantes. Além disso, os extratos celulares também serão coletados para o estudo da expressão do receptor CB2 e proteínas das vias de sinalização para ativação e locomoção de neutrófilos (PI3k, AKT, ERK1/2, NLRP3, iNOS) por Western Blotting. A investigação da apoptose e sobrevida das dHL-60 será realizada pela marcação de anexina V (FITC) e iodeto de propídeo (PI) e analisada por citometria de fluxo em FACSCalibur (Becton Dickinson, USA). A análise estatística dos dados será realizada através dos testes one way ANOVA e pós-teste Bonferroni ou pelo teste t de Student. Valores de p< ou = 0,05 serão considerados significativos. Perspectivas do Projeto: A presente proposta visa identificar novos alvos terapêuticos através do estudo da ativação do receptor CB2, em neutrófilos. Além disso, o conhecimento adquirido com esse projeto, permitirá o desenvolvimento de novas terapias anti-inflamatórias para uso adjunto com os antimaláricos.

Bolsista: Camila Silveira Barbosa
Orientador(a): YARA HAHR MARQUES HOKERBERG
Resumo: A tuberculose (TB) é uma doença de transmissão respiratória de alta incidência e mortalidade na cidade do Rio de Janeiro. Em março/2020, a introdução do novo coronavírus COVID-19 impôs um novo desafio à vigilância da TB na segunda capital brasileira com maior incidência de tuberculose. Na ocasião, foi implantado um plano de contingência para reduzir a transmissão comunitária e nosocomial de COVID-19 e que incluiu o isolamento social e a suspensão temporária de consultas de acompanhamento e visitas domiciliares de TB. Os objetivos do atual subprojeto são: 1) Atualizar a busca bibliográfica sobre os efeitos da COVID-19 na vigilância e monitoramento de TB; 2) Revisar a literatura sobre a eficácia e efetividade dos testes Xpert e Xpert Ultra para detecção de TB; 3) Gerenciar as referências bibliográficas; 4) Participar da extração, consolidação/atualização do banco, análise e interpretação dos dados relativos às notificações de TB e COVID-19, oferta de procedimentos ambulatoriais e exames específicos para TB, bem como o índice de isolamento social e indicadores de acesso aos serviços de atenção primária. Até o momento, foi feita a atualização bibliográfica com os termos tuberculose e COVID-19 e correlatos, nas bases Pubmed, Embase, Web of Science e Lilacs. As referências foram importadas para o software livre ZOTERO e selecionadas pelo título e resumo. As fontes de dados para o objetivo 3 foram: notificações - Sistema de informação de agravos de notificação (SINAN-TB), disponível no Tabnet-RIO; procedimentos ambulatoriais – Sistema de informação ambulatorial (SIA) (Tabnet-RIO e Tabnet-DATASUS); e o índice de isolamento social – Plataforma InLoco. Os resultados do estudo mostraram que a atualização bibliográfica feita em outubro/2021 não capturou novas referências em relação ao obtido anteriormente no Subprojeto “Distribuição espaço-temporal da tuberculose e do novo coronavirus COVID-19, Cidade do Rio de Janeiro, 2019-2020” (PIBIC 2020-21). Os dados das notificações de TB foram atualizados em março/2022 e a extração foi expandida para o período 2014-2021. Os resultados mostraram que houve uma redução no número de notificações anterior à emergência do COVID-19. O aumento na detecção de casos de 2014 a 2016 foi posterior a entrada do teste rápido molecular Xpert e coincidente com a expansão da cobertura de atenção primária na cidade. Observa-se uma aparente redução nas notificações a partir de agosto/2018, em período concomitante a redução na cobertura de atenção primária na cidade, possivelmente devido a mudança na gestão municipal, com reflexos nos investimentos em saúde. Os menores valores para as notificações foram observados no segundo trimestre de 2020, após a entrada do SARS-Cov-2 e início da primeira onda epidêmica de COVID-19 na cidade do Rio de Janeiro (março/2020). Os resultados deste subprojeto podem contribuir para identificar os fatores associados à redução na detecção de casos de tuberculose antes e após a pandemia COVID-19, bem como identificar as variáveis clínicas e sociodemográficas importantes na elaboração de algoritmos diagnósticos de tuberculose em tempos de pandemia por COVID-19.

Bolsista: ITALO DE LUCAS DA SILVA XAVIER
Orientador(a): CLAUDIA MAGALHAES CALVET ALVAREZ
Resumo: Justificativa e Relevância. A fibrose intersticial é um fator determinante para as manifestações patogênicas da doença de Chagas. Ensaios clínicos mostraram forte correlação entre o percentual de fibrose tecidual e o baixo índice de fração de ejeção ventricular de pacientes com doença de Chagas 1. A única droga disponível para o tratamento da doença, o Benzonidazol, reduz a carga parasitária durante a fase crônica com eficácia variável, mas quando administrado a pacientes com cardiomiopatia avançada, não resultou em melhora do desfecho clínico2. Assim, o desenvolvimento de terapias visando o tratamento da fibrose são necessários para serem administrados em combinação com agentes tripanocidas, possibilitando uma melhora clínica significativa para cardiomiopatia avançada. Dados de fosfoproteômica do nosso grupo sugeriram a ativação das vias de sinalização DYRK2, AMPK2, NDRG2, JNK e p38 durante a infecção crônica experimental3 . Assim, nos propomos a validar esses alvos e avaliar se inibidores dessas vias podem prevenir o aumento de colágeno em modelos in vitro de fibrose cardíaca durante interação com T. cruzi. Objetivos. Investigar a fosforilação de DYRK2, AMPK2 e NDRG2 durante a interação fibroblastos cardíacos – T. cruzi; quantificar a expressão de colágeno por FC tratados com inibidores destas vias de sinalização; avaliar o papel de inibidores de DYRK2, AMPK2, NDRG2, JNK e p38 na proliferação de FC após contato com o patógeno. Metodologia. Células e parasitas- Fibroblastos cardíacos (FC) serão purificados a partir de passagens sucessivas de culturas de cardiomiócitos, como descrito anteriormente4. Serão utilizadas para as análises formas tripomastigotas de T. cruzi, cepa Brazil, derivadas de cultivo celular; Western blot –Proteínas totais de extratos de FC infectados por 48h pelo T. cruzi, ou FC estimulados com meio condicionado por parasitas ou soro de camundongos infectados serão separados por SDS-PAGE, transferidos para membrana de nitrocelulose e DYRK2, AMPK2, NDRG2, JNK e p38 fosforiladas serão detectadas com anticorpos específicos; Quantificação de colágeno- – Culturas de FC nas mesmas condições acima serão tratadas com inibidores de DYRK2, AMPK2, JNK e p38, e RNAi para NDRG2. As culturas serão fixadas e coradas com corante Sirius Red/Fast Green por 2h, o que permite a medida semiquantitativa do conteúdo de colágeno e proteínas não colágenas em cultura5. Após lavagem, o corante é extraído das células com solução de NaOH 0,1 N /Metanol 1:1. As absorbâncias dos sobrenadantes resultantes são lidas no leitor de microplacas Spectramax M2 (Molecular Devices) a ? 540 e 605 nm5; Ensaios de proliferação celular- FC serão cultivados submetidos a estimulação de colágeno (via infecção direta, ou exposição a antígenos do parasita)e tratados com inibidores da via de sinalização. A proliferação será avaliada a partir da medida de incorporação 5-bromo-2’-deoxiuridina (BrDU). Após fixação, as células serão incubadas com anticorpo anti-BrDU conjugado a peroxidase. Em seguida, o complexo antígeno-anticorpo será detectado pela adição do substrato tetrametilbenzidina (TMB) e a DO será obtida por leitura em ?450 nm em leitor de microplacas Spectramax M2 (Molecular Devices). Referências Bibliográficas. 1. Tassi EM et al Arq Bras Cardiol 102, 456 (2014). 2. Morillo C et al. N Engl J Med 373, 1295 (2015). 3. Wozniak JM et al. PLOS NEGL TROP DIS 14, e0007980 (2020). 4. Silva TA et al Int J Mol Sci 20, (2019). 5. Houghton PE et al Wound Repair and Regeneration 4, 489–495 (1996).

Bolsista: NAHAN RIOS ALVES DE ANDRADE MOREIRA DE SOUZA
Orientador(a): MARCIA TEIXEIRA
Resumo: Políticas públicas como via de acesso à proteção social e à promoção da saúde de motoristas por aplicativo Justificativa e relevância: Diante do avanço da precarização do trabalho no Brasil, “empresas-plataforma” encontram o terreno fértil para sua instalação no país. Hoje, constituídas solidamente enquanto poderosos gigantes corporativos (Slee, 2017), estabelecem relações sociais de trabalho marcadas pela retirada de direitos trabalhistas e impactos na saúde dos trabalhadores (Antunes, 2018). Tais empresas afirmam que apenas permitem que a oferta de bens e serviços possa ser efetivada por meio de plataformas digitais, a partir da intermediação entre consumidores e prestadores de serviço. Nesse quadro, a escassez de uma legislação que proteja minimamente os trabalhadores de plataformas digitais contribui para a negação de direitos básicos a essa categoria e sua exclusão do sistema de proteção social trabalhista (Ribeiro, 2021; Fairwork, 2022). Assim, compreender o que tem sido feito a nível de políticas públicas voltadas aos trabalhadores por plataformas digitais, se mostra essencialmente importante, à medida que a falta de uma regulação que garanta seus direitos os deixa à margem da sociedade. Schwartz (2010) aponta para a importância de se olhar para os tensionamentos dos pólos do Mercado, Estado e da Atividade, a fim de aprofundar a compreensão sobre o trabalho, que é multifacetado. Todavia, apesar dos avanços no debate sobre as questões pertinentes ao trabalho por aplicativo, pouco ainda se discute as relações concretas entre direitos trabalhistas e a luta pela saúde. Diante disso, este subprojeto pretende contribuir com análises sobre o papel que as políticas públicas desempenham na garantia de proteção social aos motoristas por aplicativo, a partir de diálogos com os trabalhadores e da identificação do que vem sendo feito do ponto de vista legislativo para a promoção de saúde dessa categoria. Objetivo geral: Conhecer as políticas de Estado voltadas à população de motoristas por aplicativos e analisar suas relações com o processo saúde-doença, na perspectiva de contribuir com ações de promoção da saúde e à conquista de direitos destes trabalhadores. Objetivos específicos: 1. Realizar levantamento e análise de documentos relativos às normativas e proposições legislativas ligadas ao trabalho por plataformas digitais no Brasil; 2. Elaborar fichário legislativo acerca da regulação do trabalho de motoristas por aplicativo, procurando destacar como o Estado tem respondido às questões relativas a esses trabalhadores; 3. Participar da organização de espaços de discussão coletiva, onde se privilegie o intercâmbio entre saberes e a contribuição dos trabalhadores para a análise e formulação de políticas públicas relacionadas a esse trabalho. Metodologia: A pesquisa possui caráter qualitativo, a partir de uma perspectiva participativa dos trabalhadores sujeitos do estudo. As etapas do subprojeto são: aproximação da temática e do campo de estudo; levantamento e análise documental de normas, legislações e documentos de políticas públicas; participação em “Encontros sobre o Trabalho” com os motoristas, acompanhando especialmente o debate sobre a formulação de políticas públicas voltadas à promoção da saúde destes trabalhadores.