Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 2

Bolsista: LUCAS MAGGESSI CARDOSO FERREIRA
Orientador(a): RUDIMAR LUIZ FROZZA
Resumo: A microbiota intestinal tem sido amplamente reconhecida como um importante regulador da imunidade do hospedeiro. Além disso, evidencias recentes indicam que a microbiota intestinal desempenha um papel central na regulação do desenvolvimento e da função cerebral, com consequente influência sobre o comportamento. Entretanto, a compreensão das vias que medeiam o eixo de comunicação bidirecional intestino-cérebro permanece por ser determinada. Entre os possíveis mecanismos que proporcionam esta comunicação, os ácidos graxos de cadeia curta (short-chain fatty acids – SCFAs – acetato, propionato e butirato) produzidos pela microbiota têm sido considerados importantes moduladores deste eixo e constituem os fatores mais comumente estudados com enorme potencial terapêutico para diversas doenças. Níveis reduzidos de SCFAs foram encontrados no conteúdo fecal de pacientes afetados por doenças cuja fisiologia cerebral e o comportamento estão comprometidos e diversos estudos pré-clínicos e clínicos já têm demonstrado que alterações nos níveis de SCFAs estão associados à doença de Alzheimer (DA), a qual acomete 60 a 70% dos mais de 50 milhões de pacientes com demência no mundo. Devido a sua fisiopatologia complexa, ainda não há tratamentos capazes de frear a progressão da DA, o que aumenta a urgência no desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas. Uma vez que alterações linfocitárias desempenham um papel importante no processo neurodegenerativo da DA, neste projeto buscaremos avaliar as alterações comportamentais e da resposta inflamatória induzidas pelos oligômeros do peptídeo Beta-amiloide (ABetaOs), principais toxinas envolvidas na patogenia da DA, em animais imunodeficientes. Além disso, dado que os SCFAs exercem funções centrais na imunorregulação, avaliaremos se o efeito dos SCFAs sobre o comportamento é dependente de linfócitos T. Para isso, utilizaremos a administração intracerebroventicular de ABetaOs para a indução do modelo animal da DA em animais RAG-/-, suplementação com SCFAs e transferência adotiva de linfócitos T e diferentes testes comportamentais para avaliar alterações de comportamento do tipo ansioso e de memória. O uso de animais para experimentação foi aprovado pela CEUA-IOC e todas as abordagens experimentais seguirão padrões éticos nacionais e internacionais. Os resultados obtidos com o desenvolvimento deste projeto podem fornecer novas abordagens com potencial translacional para prevenção e terapia da DA.

Bolsista: Gabriella Batista Nascimento de Melo
Orientador(a): JACENIR REIS DOS SANTOS MALLET
Resumo: Culicídeos são insetos pertencentes à ordem Diptera, Subordem Nematocera, família Culicidae, distribuídos em duas subfamílias, Anophelinae e Culicinae. Os culicíneos são incriminados como vetores de patógenos causadores de doenças como Dengue, Febre Amarela dentre outras, e abrangem cerca de 3000 espécies, distribuídas em 11 tribos, constituídas por 38 gêneros. O processo de identificação de ovos de dípteros através da utilização de microscopia eletrônica de varredura tem sido utilizado por diversos autores em diversas partes do mundo, como Austrália, Peru, Inglaterra e Estados Unidos. Esta técnica se destaca por permitir uma melhor visualização da morfologia externa dos ovos, que possuem grande valor diagnóstico na entomologia, facilitando assim uma identificação mais precisa dos ovos das inúmeras espécies. Além disto, esta técnica aumenta muito a quantidade e a qualidade das características observadas. Desta forma, objetivamos neste trabalho descrever morfologicamente o exócorio os ovos de espécies do gênero Culex,, através da Microscopia Eletrônica de Varredura a fim de estabelecer padrões que possibilitem a diferenciação das espécies, com o objetivo futuro de montar uma chave dicotômica.

Bolsista: EMANUEL JUNIO CARNEIRO BARBOSA
Orientador(a): Jaime Ribeiro Filho
Resumo: As doenças inflamatórias e infecciosas como a sepse apresentam uma grande taxa prevalência e de mortalidade, sendo necessária a busca de novas alternativas terapêuticas. O nosso grupo tem demonstrado as propriedades anti-inflamatórias de alcaloides bisbenzilisoquinolínicos tanto in vitro como em diversos modelos animais. O objetivo do presente estudo é investigar o efeito do tratamento com a Fração de Alcaloides Totais (FAT) da espécie Chondrodendron plathyphyllum (Menispermaceae) em modelo murino de sepse induzida por ligadura e punção cecal (CLP). A atividade antibacteriana e moduladora de antibióticos será determinada pelo método de microdiluição em caldo e correlacionada com os dados de infecção in vivo. Para o modelo de sepse, camundongos Swiss tratados oral ou intraperitonealmente terão a sobrevivência e o estado clínico avaliado por 7 dias consecutivos após a CLP. A atividade anti-inflamatória in vivo, bem como os mecanismos moleculares serão avaliados nos leucócitos do lavado peritoneal, bem como através de imuno-histoquímica de órgãos da cavidade. O clearence bacteriano será determinado pela contagem de UFC em amostras do lavado. Assim, espera-se que os resultados desse projeto contribuam para o desenvolvimento de alternativas terapêuticas para doenças inflamatórias e infecciosas.

Bolsista: JULIANA SALSA JORGE
Orientador(a): ELIZABETH FERREIRA RANGEL
Resumo: Blastocrithidia triatomae (Protozoa: Trypanosomatidae) foi encontrada na Argentina, parasitando triatomíneos criados em laboratório para xenodiagnóstico. Estudos posteriores identificaram sua ação patogênica em triatomíneos e reportaram infecções naturais e experimentais em diversas espécies dos gêneros Triatoma, Rhodnius e Panstrongylus, compartilhando vetores com Trypanosoma cruzi. Foram reportadas co-infecções naturais de B. triatomae e T. cruzi em espécies do gênero Triatoma. Portanto, faz-se importante o reconhecimento da dinâmica destes parasitos quando em infecções mistas. Muito pouco se sabe sobre as interações entre tripanosomatídeos quando em infecções mistas seus respectivos hospedeiros, salvo alguns estudos de competição biológica in vitro e in vivo e a influência de moléculas e simbiontes intestinais nestes processos. O aprofundamento destes estudos pode responder a questões de ordem epidemiológica e ampliar o conhecimento sobre interações celulares, considerando o possível impacto na biologia de triatomíneos e tripanosomatídeos. Para avaliar esta dinâmica, estudos in vitro serão realizados utilizando ferramentas que permitam avaliar a carga parasitária durante a co-manutenção em meio de cultura, como modelo experimental de avaliação. Para isto, quantidades equivalentes de cepas de T. rangeli e B. triatomae (estas representantes da sua real diversidade) serão co-mantidas em meio de cultura monofásico e bifásico para cultivo seriado destas espécies e acompanhadas por 30 dias. A cada 15 dias, alíquotas destas misturas e seus controles serão colhidas para (1) análise morfológica e (2) PCR convencional ou em Tempo Real, avaliando a possibilidade de seleção ou predomínio de uma espécie sobre a outra.

Bolsista: LETICIA FERREIRA ESPINOSA
Orientador(a): Fernando Braga Stehling Dias
Resumo: O SARS-CoV-2 impactou o sistema de saúde, levou hospitais e unidades de saúde ao colapso e atingiu quase 7 milhões de óbitos e quase 700 milhões de caso em todo o mundo. Dados da OMS apontam que cerca de 40% dos pacientes com a COVID-19 ainda sofrem algum tipo de sequela da doença e, mais recentemente, esses impactos imunológicos, cognitivos, neurológicos e disfunções cardiorrespiratórias vem sendo considerados como consequências da Síndrome da Covid longa. Essas sequelas podem ser persistentes, mesmo com melhorias nos exames radiológicos e funcionais pulmonares. Portanto, acredita-se que outras fisiopatologias também podem estar relacionadas com a Covid longa, sobretudo a perda de memória, perda do olfato (anosmia) e do paladar (ageusia). O impacto das sequelas causadas pelo SARS-CoV-2 persiste de 4 a 12 semanas, podendo se estender por alguns anos e caracteriza um quadro clínico que inclui dispneia, distúrbios cognitivos e neuropsiquiátricos, além de uma infinidade de outros fatores. No caso das sequelas cardiorrespiratórias que correspondem à coorte de objeto do presente estudo, essas são decorrentes da disfunção do tronco cerebral que reúne a maior expressão da enzima conversora de angiotensina dentre as outras regiões cerebrais, resultando em lesões cerebrais persistentes e característica da COVID longa. Atualmente, o impacto das sequelas pós-aguda sobre a saúde pública vem ganhando espaço na comunidade científica, mas ainda é pouco estudado, principalmente pesquisas nas regiões norte e nordeste do Brasil. Neste sentido, vale a pena salientar que este projeto é uma pequena parte de um projeto maior que visa determinar assinaturas moleculares da resposta imunológica associadas com a síndrome da COVID longa na perspectiva de buscar uma abordagem clínico-laboratorial e fisiopatológica integrada para investigação de fatores relacionados à persistência da doença. Assim, o objetivo deste trabalho é determinar a carga viral de SARS-CoV-2 em uma coorte de Fortaleza acometida com a Síndrome da Covid Longa, de forma que os resultados obtidos possam complementar os estudos imunológicos e fisiopatológicos relacionados com a persistência da Síndrome.

Bolsista: CAROLINE DE SOUZA RODRIGUES
Orientador(a): ROMULO GONCALVES AGOSTINHO GALVANI
Resumo: O câncer é uma doença heterogênea e de ocorrência multifatorial. Entre as mulheres, o tipo mais frequente é o de mama. Embora o tumor primário seja importante para o curso da doença, o responsável pelo óbito da paciente é a metástase, tornando clara a urgência do entendimento dos fatores responsáveis pela sua indução. A linhagem celular de tumor de mama murino 4T1, ortotopicamente introduzida em camundongos BALB/cJ, é altamente tumorigênica e invasiva, sendo capaz de metastatizar para os mesmos órgãos afetados pelo câncer de mama humano, incluindo ossos, pulmão, linfonodos drenantes da mama, fígado e cérebro, servindo de modelo da forma mais grave da doença. Em consequência da heterogeneidade desse carcinoma, várias linhagens parentais de 4T1 foram isoladas e possuem fenótipos metastáticos divergentes, dentre elas a 67NR, que não tem capacidade invasiva, portanto não é letal, servindo de modelo para carcinoma in situ. A análise ex vivo de linfócitos T CD4 isolados da medula óssea de camundongos inoculados com células 4T1 ou 67NR demonstrou que no grupo que recebeu células 4T1, as células T são capazes de induzir doença osteolítica precoce essencial para o estabelecimento da metástase óssea, em contrapartida o grupo que recebeu o carcinoma in situ 67NR, não apresentou a perda óssea. A atividade pró-metastática destas células T foi positivamente correlacionada com a produção de citocinas pró-osteoclastogênicas, incluindo a molécula RANKL, regulador principal dos processos de osteoclastogênese e remodelamento ósseo. Estes dados sugerem que o tumor pode exercer papel sobre a diferenciação e ativação de células T influenciando na patologia da doença. Sendo assim, o objetivo desse trabalho é analisar as características moleculares de 67NR e 4T1 para compreensão dos fatores celulares intrínsecos que sejam importantes para o estabelecimento metastático. A modulação pode ocorrer devido a moléculas que são expressas pelo tumor e agem diretamente sobre os linfócitos T, ou mesmo sobre outras células importantes na ativação dos primeiros. Para tal, utilizaremos dados depositados referentes a expressão gênica das linhagens celulares 67NR e 4T1 e buscaremos genes diferencialmente expressos (DEG) entre elas e então faremos uma busca por vias de sinalização possivelmente enriquecidas (GSEA) que estejam relacionadas com processos inflamatórios e a resposta imunológica. Para validar os achados in vitro será realizada a avaliação da expressão dos genes encontrados através de PCR em tempo real semi-quantitativo (TaqMan™). Outra possibilidade poderia ser o processamento de peptídeos a partir das proteínas de uma linhagem celular gerar respostas quantitativamente ou mesmo qualitativamente diferentes das respostas geradas para peptídeos da outra linhagem. Para avaliar esta possibilidade avaliaremos o peptidoma e ligandoma das linhagens celulares no contexto do haplótipo de MHC singeneico a ela (H2d) referente as respostas T CD4 (NetMHCIIPan) e da resposta T CD8 (NetMHCPan). Os peptídeos específicos de cada linhagem serão avaliados quanto a sua imunogenicidade através de dados depositados previamente através do Immune Epitope Database and Analysis Resource (IEDB). A identificação de tais fatores potencialmente associados ao estabelecimento metastático possibilita a compreensão da patologia da doença bem como a possibilidade de posterior validação in vivo e a geração de alternativas terapêuticas para o tratamento da metástase, atualmente inexistente