Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 2

Bolsista: ALICIA RIBEIRO AGUIAR
Orientador(a): MARCELO LUIZ LIMA BRANDAO
Resumo: O Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos), é um dos maiores centros de produção de imunobiológicos da América Latina, garantindo a autossuficiência em vacinas do Programa Nacional de Imunizações. O cumprimento das Boas Práticas de Fabricação visa à diminuição dos riscos inerentes a qualquer produção farmacêutica, como por exemplo, a contaminação microbiana. Metodologias voltadas à identificação microbiana na indústria farmacêutica têm sido avaliadas a fim de se reduzir custos, reduzir a sensibilidade dos métodos, e aumentar a confiabilidade dos resultados obtidos, pois muitas das técnicas atualmente utilizadas não são capazes de identificar determinadas espécies bacterianas isoladas de ambientes de produção farmacêutica. Burkholderia spp. é considerado um contaminante de grande relevância na Indústria Farmacêutica, por ser isolado com frequência de sistemas de água, além de já ter sido isolado de produtos estéreis e não estéreis, ocasionando o recolhimento de medicamentos do mercado. A fabricação de produtos estéreis exige um alto nível de sanitização e higiene em todas as suas etapas, incluindo pessoal, instalações, equipamentos e utensílios. As áreas de produção devem ser monitoradas regularmente para a detecção de microrganismos resistentes, logo os desinfetantes utilizados devem ter sua eficácia comprovada. Contudo, mesmo seguindo estes procedimentos, a formação de biofilmes em equipamentos e nas áreas de produção é um fator crítico e preocupante na indústria, pois muitas vezes os micro-organismos desenvolvem tolerância a diversos biocidas devido à pressão seletiva, o que dificulta a eliminação destes. O objetivo deste projeto é realizar uma caracterização polifásica de linhagens do complexo Burkholderia cepacia (CBc) isoladas de uma indústria de imunobiológicos localizada no Estado do Rio de Janeiro. O perfil fenotípico de 400 linhagens previamente identificadas como CBc pelo sistema semiautomatizado VITEK 2 serão compilados em forma de planilha no Programa Microsft Excel 2013 e avaliadas pelo cálculo do coeficiente de similaridade utilizando a correlação de Pearson e método de Unweighted Pair-Group Method using Arithmetic Avarages com uso do software Bionumerics v. 8.1. Em seguida, linhagens dos perfis mais prevalente serão selecionadas e submetidas a caracterização proteômica por Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization – Time of Flight/Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) com uso do VITEK MS RUO seguindo as instruções do fabricante. Posteriormente, será realizado o sequenciamento completo do gene 16S rRNA pelo método de Sanger com o kit MicroSEQ Full Gene 16S rRNA conforme as instruções do fabricante. As sequências serão analisadas com software DNA Star LaserGene SeqMan v.7.0.0 e as sequências consenso serão depositadas no banco de dados do National Center for Biotechnology Information. Os resultados de identificação serão obtidos por comparação com as sequências depositadas no banco de dados EZBioCloud (https://www.ezbiocloud.net/). Serão considerados como possibilidades de espécie, resultados que apresentarem um percentual de identificação maior ou igual 98,7 percentual. A tipificação por Multi-locus sequence typing (MLST) será realizada pelo sequenciamento dos sete genes housekeeping (atpD, gltB, gyrB, recA, lepA, phaC e trpB) de acordo com o protocolo descrito no banco de dados do pubMLST. A partir da avaliação das relações genéticas e das características fenotípicas das linhagens serão determinados o(s) clone(s) mais prevalentes. Espera-se a criação de um banco de dados com o perfil epidemiológico das linhagens, para uso como ferramenta de avaliação de risco mais robusta em Bio-Manguinhos.

Bolsista: Maria Eduarda Rodrigues Miguel
Orientador(a): MAISA DA SILVA ARAUJO
Resumo: A criopreservação é uma técnica laboratorial que possibilita o congelamento de microrganismos e células, preservando sua viabilidade e características biológicas mesmo após longos períodos de conservação. Este projeto visa aplicar tal método voltado para o reaproveitamento dos gametócitos do Plasmodium vivax, de modo que se mantenha não somente suas características naturais, como também sua parasitemia e capacidade de infecção de vetores – especialmente o Anopheles darlingi – independente da época, o que será útil nos futuros experimentos à cerca da transmissão da malária. Com a disponibilidade de mosquitos da colônia e amostras de isolados de P. vivax, a técnica poderá ser aperfeiçoada com base nos resultados obtidos. Além dos experimentos de isolamento e purificação de gametócitos viáveis para as infecções artificiais do tipo MFA (Membrane Feeding Assay). Ademais, também ampliará os conceitos iniciais sobre a criopreservação de parasitos, voltando os olhares das análises científicas para esse método inovador e prático, o qual será fielmente aplicado na Plataforma de Produção e Infecção de Vetores da Malária (PIVEM); está por sua vez, sendo um centro de referência em pesquisa da doença característica da região Amazônica. Uma vez que se obtiver êxito nas considerações feitas e resultados concretos de eficácia, será possível transportar gametócitos do P. vivax para diferentes locais de forma viável e econômica, permitindo seu uso continuo sem preocupações com custos excessivos, e mantendo a parasitemia intacta para uma melhor observação dos dados em diversas pesquisas relacionadas ao controle de mosquitos e redução do caráter endêmico da malária. Os experimentos ocorrerão a partir do aceite e assinatura do TCLE dos voluntários em participar do estudo. Serão coletados dos tubos 9 mL de heparina e um tubo de 4 mL de EDTA. A parasitemia e gametocitemia será determinada antes de iniciar os experimentos de DMFA e alíquotas de sangue do tubo EDTA serão armazenados em – 80 C para posterior análise molecular. Os tubos de sangue heparizados serão usados para os experimentos de DMFA e para o processo de criopreservação. Após uma semana no processo de criopreservação, as amostras criopreservadas serão descongeladas para serem preparadas tanto para os experimentos de DMFA como para cultura de 24 h para então serem submetidas para o último experimento de DMFA. Após 4 ensaios, os protocolos de congelamento e descongelamentos deverão ser revistos para possível alteração caso seja necessário para melhorar a viabilidade dos gametócitos criopreservados. A confirmação da infecção ocorrerá no sétimo dia após a infecção dos mosquitos a partir da dissecção dos estômagos para contagem dos oocistos. A proposta de estabelecer técnicas de criopreservação de amostras de P. vivax para infecções experimentais de MFA tem potencial para facilitar e criar novas oportunidades de estudos sobre a transmissão da malária em diversas localidades.

Bolsista: JULIA GALLO CARVALHO
Orientador(a): Erica Alessandra Rocha Alves
Resumo: O câncer de mama é o tipo de câncer que possui a maior incidência e a maior mortalidade na população feminina em todo o mundo. Atualmente, a cirurgia, quimioterapia e/ou radioterapia são os tratamentos mais eficazes contra este tipo de câncer. Entretanto, o tratamento ainda é um desafio devido aos inúmeros efeitos colaterais e a eficiência limitada das terapias tradicionais, que diminuem a qualidade de vida dos pacientes. Por isso há grande interesse em novas alternativas terapêuticas que promovam de forma segura, a destruição das células neoplásicas sem que haja comprometimento da qualidade de vida dos pacientes. Dentro do componente celular do microambiente tumoral, os macrófagos associados a tumores (TAMs) tem despertado grande interesse. Estudos recentes afirmam que nanopartículas de óxido de ferro estimulam a reprogramação dos TAMs fazendo com que percam sua função promotora de tumores e adquiram funções supressoras de tumores. Dessa forma, este projeto visa avaliar o efeito do tratamento com nanopartículas maghemita encapsuladas com polianilina na polarização de TAMs associados às células derivadas de neoplasias mamárias. Inicialmente, as nanopartículas produzidas foram autoclavadas para utilização nos experimentos in vitro, porém como havia a possibilidade deste processo alterar a estrutura, composição e propriedades das nanopartículas, as seguintes análises foram realizadas: a) avaliação da esterilidade das nanopartículas; b) avaliação da influência do processo de autoclavagem na citotoxicidade das nanopartículas; c) avaliação da influência do processo de autoclavagem na extração e purificação de gDNA; e d) quantificação dos níveis de endotoxinas nas nanopartículas. Os resultados dos ensaios mencionados mostraram que não houve crescimento microbiano nas nanopartículas após a autoclavagem. Além disso, as nanopartículas autoclavadas não apresentaram citotoxicidade, mantiveram a propriedade de captura de DNA genômico e não possuíam níveis significativos de endotoxinas. Para o estudo in vitro, foram adquiridas 4 linhagens tumorais de mama derivadas de seres humanos (MCF-7, MDA-MB-231, SkBr3, BT474) e uma linhagem de monócito humano (THP-1). As linhagens foram expandidas e criopreservadas de acordo com as especificações do Banco de células do Rio de Janeiro. Em seguida, foi realizada a adaptação de todas as linhagens para o meio de cultura DMEM com 10% de soro fetal bovino e antibióticos. Após a obtenção do banco de células, realizou-se a determinação da concentração máxima não citotóxica (Cmaxnt) de nanopartículas para as linhagens tumorais de mama e para as células THP-1. Para isso, as células foram incubadas com concentrações crescentes de nanopartículas de óxido de ferro (0-9mg/mL) por 24 horas. Em seguida realizou-se o ensaio do MTT e verificou-se que a Cmaxnt foi de 1,5 mg/mL para as células MDA-MB-231, SkBr3 e BT474, de 3 mg/mL para as células MCF-7 e de 0,06 mg/mL para as células THP-1. Em seguida, células THP-1 foram co-incubadas com células MCF-7 em um sistema transwell com membrana de 0,4 µm. As células THP-1 foram posicionadas na câmara superior e as células tumorais na câmara inferior. As nanopartículas foram depositadas na câmara superior sobre os macrófagos na concentração de 0,06 mg/mL. Após 24 e 48 horas de incubação, o sobrenadante da cultura foi utilizado para dosagem dos níveis das citocinas pelo kit CBA Human Inflammatory Cytokines Kit (BD Biosciences) e as células tumorais foram marcadas com o kit CellEvent™ Caspase-3/7 Green Flow Cytometry Assay Kit (Invitrogen) e com o reagente SYTOX® AADvanced dead cell Stain e analisadas por citometria fluxo. Verificou-se que o tratamento com nanopartículas de óxido de ferro aumentou a capacidade das células THP-1 induzirem a morte por apoptose das células MCF-7. Esse aumento da destruição das células tumorais não foi associado com alterações na produção das citocinas IL-1?, IL-6, IL-8, IL-12p70, TNF-alfa e IL-10. Pretende-se ainda investigar se tal elevação dos níveis de apoptose das células MCF-7 relaciona-se com alterações nos padrões de expressão gênica dos macrófagos expostos as nanopartículas, bem como com alterações nos níveis intracelulares de ROS e de estresse oxidativo nos sobrenadantes das co-culturas. Os mesmos ensaios executados com as células MCF-7 ainda serão realizados com as células MDA-MB-231. Além disso, também serão mensurados o recrutamento das células THP-1 utilizando as duas linhagens de câncer de mama.

Bolsista: AMANDA SOARES MELO
Orientador(a): LIANA MARIA IBIAPINA DO MONTE
Resumo: Sabe-se que historicamente os movimentos sociais se constituem em ações coletivas de mobilização cuja finalidade é transformar a ordem social existente. No mundo contemporâneo isso não é diferente, e com o advento da internet, a forma de organiza-se socialmente mudou. As mulheres então se apropriam desse instrumento como uma ferramenta política para fazer sua voz ecoar em vários cantos, mas esta é uma ferramenta limitada, uma vez que apenas determinados grupos têm acesso a esse instrumento. O Objetivo é explorar o alcance da interseccionalidade a serviço do ciberfeminismo e do conceito de mulheridades, colocando no novo cenário como as mulheres estão se organizando virtualmente no contexto da pandemia, acompanhando alguns perfis de coletivas no Nordeste e o alcance de grupos historicamente colocados à margem da sociedade. A metodologia é um estudo bibliográfico de revisão da literatura a partir dos principais temas de forma associada. Espera-se identificar com essa pesquisa o que a literatura já tem apontado, que mesmo em contextos adversos as mulheres têm dados respostas através de organizações solidárias e coletivas a sair de situações de crises expondo estruturas de opressões e sobretudo, aprender com esses grupos formas de ser articular em rede.

Bolsista: GIULIA KARINA OLIVEIRA MONTELLANO
Orientador(a): MIRIAN CLAUDIA DE SOUZA PEREIRA
Resumo: A doença de Chagas (DC), causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, é considerada uma das 20 doenças tropicais negligenciadas (DNTs) pela Organização Mundial da Saúde (OMS), com 6 a 7 milhões de pessoas infectadas no mundo. A doença encontra-se globalizada, devido à alta migração populacional entre continentes, com cerca de 75 milhões de pessoas sob risco de infecção. Atualmente, a doença reemerge em países endêmicos por infecção oral, enquanto a transmissão congênita de T. cruzi é majoritária em países não endêmicos, incluindo Estados Unidos da América, Canadá, países da Europa, Japão e Austrália. A sintomatologia da DC manifesta-se em 30-40% dos indivíduos infectados na fase crônica, afetando os sistemas gastrointestinal (megacólon e megaesôfago), cardíaco (cardiomiopatia chagásica) e nervoso. Apesar de centenária, apenas 2 fármacos, Nifurtimox (Nif) e Benzonidazol (Bz), são atualmente comercializados para o tratamento desta doença silenciosa, mas possuem eficácia limitada e insatisfatória principalmente na fase crônica. Estes fármacos apresentam efeitos adversos graves, diminuindo a adesão ao tratamento, sendo também hepatotóxicos e genotóxicos. Assim, este problema de saúde pública mundial merece atenção e a busca por novos fármacos eficazes é essencial para uma terapia eficaz e segura. Este projeto visa a otimização do composto HIT (5-amino pirazol-imidazolina), com substituição do pirazol por 1, 2, 3-triazol com o intuito de potencializar a atividade biológica. Esses híbridos serão avaliados quanto às propriedades físico-químicas e ADMET utilizando ferramentas in sílico. Ainda, a atividade biológica será analisada por triagem fenotípica para a identificação de novos candidatos promissores para prosseguir em ensaios pré-clínicos in vivo.

Bolsista: LORENA FRANKE MIRA
Orientador(a): Glaucia Elisete Barbosa Marcon
Resumo: No Brasil, a prevalência da doença de Chagas (DC) é de 1,8 a 2,4 milhões de indivíduos na fase crônica, com alta carga de morbimortalidade. A coinfecção do Trypanosoma cruzi com o HIV comporta-se como oportunista e estima-se 16.000 casos dessa coinfecção, que pode levar à reativação da DC, caracterizadas pela miocardite e/ou meningoencefalite. O estado de Mato Grosso do Sul não é endêmico para a DC, e apresenta baixa prevalência dessa enfermidade. No entanto, recebe migrantes latino-americanos e de outras regiões do Brasil. Assim sendo, é de suma importância realizar um inquérito sorológico e molecular da DC dentre as pessoas que vivem com o HIV (PVHIV) para definir adequado tratamento e acompanhamento, especialmente em relação à DC, mais negligenciada pela menor prevalência, mas com potencial de complicação importante dentre PVHIV. Metodologia: Será realizado o teste sorológico (IFI) e de biologia molecular (nPCR) em 160 amostras de soro e DNA já coletadas de indivíduos atendidos no ambulatório de infectologia e no Hospital-Dia Professora Esterina Corsini e CEDIP – Centro Especializado em Doenças Infecciosas e Parasitárias da SESAU (Secretaria Municipal de Saúde de Campo Grande). Para os participantes, serão informados dos resultados dos exames e poderão ter indicação de tratamento de ambas as infecções caso identificada infecção ativa, conforme protocolos do Ministério da Saúde. Para o serviço de atendimento, a contrapartida é a de reforçar a importância de rastreio das infecções, assim como propor de protocolos para condutas nas unidades de doenças infeciosas e parasitárias.