Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 2

Bolsista: RAFAELA TAVARES DOS REIS
Orientador(a): CONSTANCA FELICIA DE PAOLI DE CARVALHO BRITTO
Resumo: As leishmanioses apresentam uma grande variedade ecoepidemiológica, com ampla distribuição geográfica e diversidade clínica. Nos últimos anos, estas doenças vêm apresentando mudanças em seus ciclos de transmissão devido a diversos fatores, tendo o inseto vetor, fêmeas de flebotomíneos e as variáveis ambientais, importantes papéis neste contexto. Na presente proposta visamos estudar a fauna de flebotomíneos em municípios do estado do Piauí que são endêmicos para Leishmaniose Tegumentar (LT) e Leishmaniose Visceral (LV). De modo geral, a ocorrência de surtos de leishmanioses tem conhecida relação com impactos ambientais de diversas origens, portanto há que se trabalhar com prováveis fatores determinantes destes processos, que permitam discutir diferentes cenários epidemiológicos. O estado do Piauí representa, territorialmente, a confluência de três biomas brasileiros, o Cerrado, a Caatinga e a Amazônia; esta característica, associada à pobreza, torna o controle de algumas doenças infecciosas um grande desafio. A LV ocorre com maior frequência em área urbanas, inclusive na capital, Teresina. Em relação à LT, estão sendo descritos surtos em algumas regiões urbanas e rurais. Além disso, é possível notar, em algumas localidades, surtos epidêmicos recorrentes de LT onde a presença de vetores dos agentes etiológicos desta forma clinica é insuficiente ou inexistente, sugerindo assim que outras espécies de flebotomíneos possam estar transmitindo os parasitos responsáveis pela LT nestas áreas. Para este projeto, está sendo proposto um conjunto de metodologias amplamente aplicadas e validadas para o estudo da fauna flebotomínica, diagnóstico de infecção natural e pesquisa de fonte alimentar destes insetos, e acoplada a este conjunto, a análise espacial e modelagem matemática, possibilitando correlacionar os resultados obtidos nas diferentes áreas de estudo com os dados ambientais, em um Sistema de Informação Geográfica (SIG). Assim, esperamos produzir novos conhecimentos, não apenas para melhor compreender a ecoepidemiologia e o processo de espacialização da LT e LV nas áreas selecionadas, como também contribuir com elementos que possibilitem nortear e aperfeiçoar as diretrizes voltadas para as políticas públicas de vigilância e controle destes agravos.

Bolsista: HENRIQUE MOURA SOUZA DE PAULO
Orientador(a): ANTONIO CARLOS SIANI
Resumo: Os terpenoides produzidos por plantas têm se destacado como substâncias com capacidade citotóxica, anti-inflamatória e imunomoduladora e por isso têm sido investigados como candidatos a novos fármacos de aplicação oncológica. O exemplo mais destacado é o paclitaxel (taxol(Marca Registrada) , um diterpeno extraído das cascas do teixo do Pacífico (Taxus brevifolia) e transformado em laboratório, que foi aprovado e comercializado para o tratamento de cânceres de mama, pulmão, ovário e outros tipos de tumores. Monoterpenos derivados da oxidação do limoneno, como o caso do álcool perílico, têm sido objeto de estudos clínicos para o tratamento de gliomas. Por sua vez, os ácidos triterpênicos constituem moléculas com largo espectro de atividades farmacológicas, entre elas a de serem seletivas e citotóxicas sobre células tumorais. Esses ácidos usualmente ocorrem como misturas complexas em muitas fontes vegetais. Eles possuem alto valor agregado alto preço no mercado quando purificados, porém existem raros métodos descritos para purificar e escalonar a produção deles. Este é um forte gargalo para o prosseguimento das pesquisas farmacológicas e biomédicas com base nessas moléculas. Derivados do ácido ursólico e oleanólico possuem atividades similares, com alguns de seus derivados semissintéticos as potencializando significativamente. A presente proposta explora um conjunto de testes para purificar o ácido ursólico (AU) a partir da casca de maçã (Mallus domestica), na qual ele se apresenta concentrado. Complementa a proposta a síntese do éster metílico do AU, visando comparar as propriedades antioxidante, anticâncer e antimetastática de ambos. Em particular, comparado ao ácido original, o ursolato de metila tem produzido aumento da atividade sobre vários alvos farmacológicos, como antiartrítico e citotóxico contra diversas linhagens tumorais. Outra – e não menos importante – vantagem desses ésteres em geral refere-se à maior adequabilidade que apresentam para formulações farmacêuticas, em comparação com os ácidos que são anfifílicos e possuem baixa solubilidade tanto em solventes polares quanto apolares. Assim, as atividades químicas são concentradas no processo de separação das moléculas-alvo através de técnicas cromatográficas combinadas, aplicadas ao extrato rico em ácidos triterpênicos, obtidos a partir do tratamento de cascas de maçãs com etanol alcalinizado. Nessa abordagem, existem duas lacunas que serão o foco da investigação sistemática. São elas a resolução cromatográfica entre os ácidos ursólico e oleanólico que compõem o extrato, e a reação de esterificação do ácido ursólico majoritário, que usualmente é dificultada por impedimento estérico na estrutura desses ácidos. Ambos os processos serão otimizados primeiramente em escala analítica, utilizando cartuchos comerciais contendo as fases estacionárias sob teste; seguindo-se a transposição dos resultados para escalas semipreparativas. Em microescala, serão testados até quatro tipos de fases estacionárias, com variação apropriada da eluição. À purificação do ácido ursólico seguirá seu escalonamento para 10 g (ou acima) de extrato, seguindo-se então para a etapa de sua esterificação. A dificuldade dessa reação está no forte impedimento estérico da carboxila em C-17 para os ácidos em questão; existindo poucos e ineficientes métodos descritos na literatura. Serão ensaiadas as condições que envolvem: (i) a formação prévia de um sal (especialmente sal de prata), seguida de sua reação com haletos de alquila; e (ii) uso de condições variáveis de temperatura e pressão, com reação em ampola selada. Por fim, serão realizados testes comparativos entre o AU e seu éster metílico, quanto à possível atividade anticâncer (mama), pela via de uma colaboração já estabelecida com outro grupo de pesquisa, além de comparar a capacidade antioxidante de ambos, no sistema ácido linoleico/beta-caroteno.

Bolsista: NATASHA REIS LACERDA
Orientador(a): SIMONE GONCALVES DE ASSIS
Resumo: O presente projeto é um recorte do projeto principal na área da epigenética e violência; tem por objetivo investigar relações entre a abordagem epigenética, o funcionamento executivo, a atenção e a memória em jovens oriundos da rede pública de São Gonçalo no contexto de violência familiar e comunitária. Será realizada análise descritiva das distribuições de variáveis epidemiológicas do estudo longitudinal iniciado em 2005 e finalizado em 2021. Serão realizadas análises descritivas das variáveis epidemiológicas com resultados de análise de metilação de DNA realizada a partir da coleta de saliva. Após essas análises será feita uma correlação entre as variáveis para definir um modelo de análise que possa incluir a metilação do DNA, funcionamento executivo, atenção, sexo e idade. Por fim, espera-se encontrar a relação entre os fatores de violência familiar e comunitária e o prejuízo na memória, atenção e funções executivas em adolescentes.

Bolsista: GABRIELA PONTES DA COSTA
Orientador(a): MONICA MACEDO BASTOS
Resumo: A Leucemia Mieloide Crônica (LMC) é caracterizada pela presença de um cromossomo anormal denominado Philadelphia (Ph). A existência deste cromossomo faz com que o organismo expresse uma proteína híbrida BCR-ABL, e esta apresenta a atividade da tirosina cinase de forma anormal, sendo responsável pela patogênese da doença. O mesilato de imatinibe foi o primeiro representante da classe dos inibidores de tirosina cinase (ITC) BCR-ABL para o tratamento da LMC. No entanto, o aparecimento recorrente de resistências tem desafiado o tratamento com o uso destes inibidores. Este fato resultou no desenvolvimento de novos inibidores conhecidos como a segunda geração dos “tinibes”, tendo como representantes o nilotinibe, dasatinibe e bosutinibe. O ponatinibe, um ITC BCR-ABL de terceira geração, é o único capaz de contornar a mutação T315I presente no domínio da BCR-ABL1; contudo, os efeitos colaterais severos limitam o seu uso. Na busca por novos ITC, Park e colaboradores realizaram estudos que demonstraram que o nocodazol e derivados contendo o grupo ureia induzem apoptose em células de leucemia linfoide crônica (LLC), e os resultados dos estudos demonstraram potência submicromolar em ensaios enzimáticos para LMC, incluindo a formas mutante resistente. Diante deste cenário, neste projeto pretende-se realizar a síntese e a avaliação de dez novos derivados contendo o grupo ureia. A metodologia proposta para a obtenção dos compostos-alvo consiste em uma síntese convergente com três ou quatro etapas reacionais. Até o momento foram obtidos os intermediários 9 e 16a. A metodologia escolhida para a obtenção do intermediário 9 foi bem-sucedida. No entanto, apesar da obtenção do intermediário 16a gerar o resultado esperado, observou-se um baixo rendimento e dificuldades para purificação. Os intermediários 11 e 12 não foram obtidos com sucesso. Novas metodologias estão em curso na obtenção dos intermediários 11, 12 e 16a, porém ainda sem resultados para compor o relatório. Cabe destacar que, o andamento das etapas do projeto está no prazo estabelecido e de acordo com o cronograma inicialmente proposto.

Bolsista: TIAGO MARTINS MARQUES
Orientador(a): CARLOS EDUARDO CALZAVARA SILVA
Resumo: Até o momento não existe um tratamento específico para a dengue, sendo este apenas paliativo. Assim, estudos que busquem alvos para o desenvolvimento ou reposicionamento de fármacos, visando uma terapia específica, são essenciais. Durante a replicação do Dengue virus (DENV) as vias de lipofagia são ativadas e, com isso, triglicérides armazenados em corpúsculos lipídicos são degradados e ácidos graxos são liberados, promovendo, através da ?-oxidação, a geração de ATP necessário para completar a multiplicação viral. Por esse motivo tais vias metabólicas devem ser exploradas como potencial alvo para o desenvolvimento de estratégias antivirais. Nosso grupo de pesquisa realizou análises transcriptômicas de hepatócitos infectados com DENV-2. Essas análises revelaram genes diferencialmente expressos que são descritos como participantes de processos biológicos envolvidos no metabolismo lipídico. Dentre esses genes foi identificado o receptor adrenérgico alfa 1 (ADRA1). ADRA1A são receptores que atuam na mediação do sistema nervoso simpático envolvidos na regulação da lipofagia e na estimulação da ?-oxidação de ácidos graxos. Devido ao exposto esse trabalho pretende avaliar a relação do ADRA1A na replicação do DENV utilizando antagonistas desse receptor, com o objetivo de validar o ADRA1A como potencial alvo para terapia específica contra a dengue e identificar fármacos candidatos ao reposicionamento. Antagonistas de ADRA1A serão identificados na plataforma DRUGBANK e serão selecionados aqueles aprovados para uso em humanos e comercializados no Brasil. Após, o CC50, IC50 sobre as partículas virais e o IS serão determinados. Para o CC50, células AML12 e Vero serão expostas a diferentes concentrações de cada antagonista e a viabilidade celular será avaliada por MTT. Para o IC50, células serão infectadas com DENV seguidas de exposição a distintas concentrações dos antagonistas seguido de titulação viral por RT-qPCR, e determinação do IS. Depois, o efeito dos antagonistas sobre a replicação do DENV será avaliado quando adicionados às culturas celulares antes e após a infecção com o DENV e em dose única ou diária. Após cinco dias será realizada a titulação viral por RT-qPCR e por unidades formadoras de placas (UFP) e avaliação da viabilidade por MTT. Ainda, será realizada a quantificação de ácidos graxos livres, corpúsculos lipídicos e de ADRA1A em AML12 infectadas com o DENV e expostas aos antagonistas. Posteriormente, camundongos serão infectados com DENV e tratados com o antagonista selecionado nos ensaios in vitro. Após cinco e onze dias de tratamento será feita coleta de sangue para análises hematológicas, titulação viral por RT-qPCR e ELISA para investigar os níveis de IgM e IgG anti-DENV. Ainda, após onze dias o fígado e rins serão removidos para titulação viral por RT-qPCR e análises histológicas. Devido a pandemia de COVID-19 o trabalho os alunos de Iniciação Científica estavam impossibilitados de comparecer na instituição e, portanto, de realizar atividades presencias. Sendo assim, nos meses iniciais dessa bolsa, foram realizadas atividades de treinamentos virtuais de biossegurança e boas práticas de laboratório, além de reuniões virtuais do grupo de pesquisa. Também, durante o regime remoto, foi realizada revisão bibliográfica. Com o retorno presencial foram realizados treinamento de preparo de meio e soluções, cultivo celular, multiplicação e titulação do DENV e, até o momento, foram estabelecidas culturas das linhagens C6/36, Vero e AML12 que serão usadas nos ensaios futuros.

Bolsista: LUCIELY LINS PALLOT RANQUINE
Orientador(a): Cavaisc
Resumo: As Coleções Biológicas por apresentar de espécimes-testemunho, é uma fonte importante de informação histórica da biodiversidade. O Instituto Oswaldo Cruz (IOC), tem como característica marcante a dedicação à construção das Coleções Científicas, atualmente pertencente a Fundação Oswaldo Cruz. Em 1909, a Coleção Ixodides foi elaborada em decorrência dos estudos morfológicos dos carrapatos no Brasil e da descrição de várias novas espécies pelo pesquisador Henrique Aragão. O pesquisador que era protozoologista, ao estudar os potenciais vetores envolvidos no ciclo da febre amarela possibilitou a estruturação e a formação da coleção de carrapatos que com registros de diferentes espécies coletadas desde 1894 até o início da década de trinta do século passado. A Coleção foi de fato institucionalmente estabelecida por Aragão, quando foi apresentada à Faculdade de Medicina do Rio de Janeiro a primeira tese sobre carrapatos no Brasil, com autoria de Carlos Rohn e orientação de Henrique Aragão. Era a primeira contribuição do IOC na formação de pesquisadores em Acarologia. Aragão faleceu em 1956 e a partir de então, as atividades e pesquisas nesse assunto declinaram e a Coleção ficou estagnada. Dessa forma, a Coleção Ixodides tornou-se uma das Coleções Históricas integrantes do acervo da Coleção Entomológica do IOC. Em 1992, houve a retomada da linha de pesquisa do estudo de carrapatos com a inserção de novos pesquisadores especialistas a convite do Dr. José Jurberg, então chefe do Departamento de Entomologia do IOC, estabeleceu um convênio de cooperação técnica e científica entre a Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ) e o IOC. O que permitiu a retomada da linha de pesquisa do estudo de carrapatos, a partir da cessão do pesquisador Nicolau Maués Serra-Freire, sendo então reiniciada a Coleção de Ixodides, na Coleção Entomológica-IOC, com dois acervos: Coleção Histórica Henrique Aragão (Coleção Fechada) e a Coleção Ixodológica (Coleção Aberta) com fins depositários. Com credenciamento do Laboratório de Referência Nacional em Vetores das Riquetsioses em 2006, pelo Ministério da Saúde laboratório, onde a Coleção estava associada foram incorporados ao acervo e outros artrópodes potenciais vetores ápteros com uma nova denominação: Coleção de Artrópodes Vetores Ápteros de Importância em Saúde das Comunidades (CAVAISC). A CAVAISC foi credenciada e reconhecida em 2008 pela FIOCRUZ. O acervo da CAVAISC apresenta exemplares de aracnídeos (carrapatos, ácaros, amblipígios, esquizomidas e aranhas) e insetos (pulgas e piolhos) com um quantitativo de relevância desses artrópodes de importância para saúde e biodiversidade e nunca foi elaborado um catálogo de espécies tipo presentes na Coleção. E ainda, considerando as recomendações do Código Internacional de Nomenclatura Zoológica, que estabelece que toda a Instituição que contém espécimes tipo deve publicar lista dos tipos ali depositados. O presente projeto tem como objetivo fazer um levantamento do material tipo de Arachnida (Amblypygi, Schizomida, Araneae, Ixodida, Mesostigmata e Sarcoptiformes) e Insecta (Siphonaptera e Phthiraptera) depositados na CAVAISC, e posteriormente elaborar um catálogo da Coleção, propiciando um melhor conhecimento e divulgação do acervo da CAVAISC para comunidade científica.