Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 2

Bolsista: TAMYRIS DOS SANTOS SOUZA
Orientador(a): FILIPE SANTOS PEREIRA DUTRA
Resumo: A listeriose é uma grave infecção alimentar cujo agente etiológico é a Listeria monocytogenes, cujo surtos recentes vêm sendo associados ao consumo de diversos alimentos contaminados, como leite não pasteurizado, legumes, frutos do mar e manteiga. Apesar da listeriose normalmente resultar em gastroenterite leve, a infecção grave por L. monocytogenes, principalmente em populações de risco (indivíduos imunocomprometidos, idosos e grávidas), pode resultar em complicações como septicemia, meningite, endocardite ou aborto espontâneo.  No Brasil, a listeriose é desconhecida pela maioria da população, mas devido à alta taxa de mortalidade nos casos graves, esta doença tem sido considerada um problema de saúde pública. Um desses fatores de virulência da L. monocytogenes é a listeriolisina O, uma hemolisina que rompe as membranas dos fagossomos, permitindo que as bactérias escapem para o citosol e se multipliquem rapidamente no citoplasma da célula hospedeira. A atividade da listeriolisina O é profundamente dependente da quantidade e acessibilidade do colesterol na membrana lipídica, que pode ser modulada pela fosfolipases tanto do hospedeiro como da própria bactéria. Além disso, a listeriolisina O é essencial para a invasão em células não-fagocíticas (hepatócitos e enterócitos), como no escape da bactéria nas células fagocíticas (macrófagos). Nesse processo, o remodelamento lipídico e das estruturas celulares são fatores-chave no sucesso da infecção pela L. monocytogenes. Os corpúsculos lipídicos (CL) são organelas dinâmicas formadas por um núcleo de lipídeos neutros (ésteres de colesterol e triacilgliceróis) envoltos por uma monocamada de fosfolipídios associada a um conteúdo proteico diversificado. O tamanho, a função e constituição lipídica e proteica dos CL são dependentes do tipo e do estágio celular. As funções clássicas dos CL envolvem o armazenamento e o fornecimento de substratos lipídicos para diversos processos biológicos, a exemplo do metabolismo energético e síntese das membranas celulares. Além disso, nos CL ocorre o controle e síntese de importantes mediadores inflamatórios derivados de lipídios, como os tromboxanos, leucotrienos e prostaglandinas. Os CL também estão envolvidos no ciclo de infecção, patogênese, sobrevivência e multiplicação de diversos patógenos, que estimulam a biossíntese dessa organela.  Essa relação oportunista de estimulo da biossíntese pode ser tanto para a obtenção de uma fonte de energia ou como parte dos mecanismos de evasão do sistema imune. Essa relação patógeno-hospedeiro envolvendo os CL já foi constatada para diferentes infecções bacterinas pelo nosso grupo de pesquisa, a exemplo do Mycobacterium leprae, Mycobacterium bovis BCG, Mycobacterium tuberculosis Salmonella enterica sorovar Typhimurium.  Como a relação CL e infecção por L. monocytogenes ainda não foi reportada na literatura, nesse trabalho pretendemos investigar a participação dos corpúsculos lipídicos na patogênese da listeriose tanto em células não-fagocíticas como fagocíticas.

Bolsista: Dárlisson Sines Gobbo
Orientador(a): RAFAELLA FORTINI GRENFELL E QUEIROZ
Resumo: Emergindo como uma nova epidemia, a Covid longa é caracterizada pela persistência de sintomas e/ou estabelecimento de novas condições crônicas após a recuperação da COVID-19. Estima-se que a Covid longa irá alterar substancialmente a vida de milhões de pessoas em todo o mundo. No entanto, sua epidemiologia não está bem compreendida, assim como fatores que levam ao estabelecimento das sequelas. Dados publicados pelo nosso grupo demonstram que 50% dos sobreviventes da COVID-19 desenvolvem Covid longa e que a vacina reduz em 30x o risco de sequelas. Sintomas neurológicos, cardiovasculares, pulmonares e hematológicos estão entre os mais descritos e incluem demência, problemas de memória e concentração, dor torácica, fadiga, trombose e manifestações autonômicas como taquicardia, levando a incapacidade de executar atividades diárias. Para avançarmos no tratamento e monitoramento de pacientes com Covid longa, se faz necessário entender os fatores que a desencadeiam. Sabendo que a desregulação imunológica tem impacto direto na gravidade da infecção aguda com importante atuação de IL-6, ferritina, dímero D e outros marcadores, este estudo irá acompanhar pacientes com Covid longa antes e durante tratamento das sequelas para definir a relação de 32 marcadores de imunidade, lesão tecidual e hematológico com a gravidade e persistência das sequelas e evolução para a cura das condições geradas pela Covid longa. Dentre os marcadores estão quimiocinas (CXCL8; CCL11; CCL3; CCL4; CCL2; CCL5; CXCL10), citocinas pró- inflamatórias (IL-1Beta; IL-6; TNF-Alpha; IL-12 ; IFN-Gamma; IL-15; IL-17), citocinas regulatórias (IL-1Ra; IL-4; IL-5; IL-9; IL-10; IL-13), fatores de crescimento (FGF-básico; PDGF ; VEGF; G-CSF; GM-CSF; IL- 7; IL-2). Marcadores de inflamação e estresse oxidativo (mieloperoxidase; elastase de neutrófilos), de lesão tecidual geral e cardíaco (proteína C reativa (PCR); hsPCR) e de coagulação (dímero D). Com este estudo, temos objetivos de cunho científico, social e estratégico para gestão de saúde. Dentre os objetivos específicos estão 1) Avaliar, por critérios clínicos, imunológicos e hematológicos, indivíduos com Covid longa (crianças e adultos >5 anos de idade, homens e mulheres) classificados com sequelas neurológicas, cardiovasculares, pulmonares e/ou hematológicas, antes e durante tratamento. 2) Encaminhar os participantes para tratamento específico por meio de fluxo definido junto a SMS- BH. 3) Investigar o perfil de 32 marcadores de imunidade, lesão tecidual e hematológico nos pacientes com Covid longa. 4) 4: Definir a correlação da expressão dos marcadores de imunidade, lesão tecidual e hematológico com a ocorrência de sequelas, gravidade e persistência, evolução para cura e outros critérios individuais. O aluno ficará responsável pelo terceiro objetivo, junto a equipe do estudo.

Bolsista: ISABELLE DA SILVA OLIVEIRA SANTOS
Orientador(a): FERNANDA MARCICANO BURLANDY
Resumo: Segundo dados da Organização Mundial da Saúde (OMS), as doenças diarreicas são responsáveis por cerca de 1.7 bilhão de casos e causam, anualmente, cerca de 525.000 mortes de crianças com menos de cinco anos, sendo a segunda principal causa de mortalidade na população infantil. Diversos estudos demonstram que os rotavírus A (RVA) são os principais agentes virais associados a Doença Diarréica Aguda (DDA) seguidos pelos norovírus e os mastadenovirus (HAdV). A vacinação de rotina de lactentes contra os rotavírus foi implementada em 95 países em abril de 2018. Após a introdução da vacina, foi observada uma significativa redução nos casos de doença diarreica aguda associada a esse agente viral em muitos países, inclusive no Brasil. Embora a incidência de gastroenterite aguda seja maior entre crianças pequenas, casos esporádicos e surtos geralmente envolvem pessoas de todas as idades e, dependendo do cenário e da população, até 50% dos casos notificados podem permanecer sem diagnóstico. Nesse contexto surgem evidências crescentes da importância de vírus emergentes tais como sapovírus, bocavirus e astrovirus na etiologia mundial da DDA. Portanto, faz-se importante ampliar a investigação laboratorial da DDA associada a outros patógenos virais. Neste contexto, o projeto propõe, a partir das amostras clínicas oriundas de casos de gastroenterites agudas recebidas no Laboratório de Referência Regional de Rotaviroses, para a vigilância das diarréias agudas, e com resultado negativo para RVA e norovirus, determinar a ocorrência de vírus gastroentéricos emergentes tais como sapovirus, bocavirus, aichivirus e novos astrovirus no Brasil entre os anos de 2023 e 2024. Para tal amostras de fezes com resultado negativo prévio para rotavírus e norovírus, provenientes de 11 estados do Brasil que figuram dentro da abrangência do LRRR (RN, PE, SE, AL, PB, BA, RJ, MG, ES, RS, SC), serão processadas e preparadas suspensões fecais a 10% em tampão Tris-HCl Ca2+ 0,01M pH 7,2. O material genético viral será purificado e concentrado utilizando o kit “QIAamp Viral Mini Kit” e o extrator QIAcube(Marca Registrada) , de acordo com as instruções do fabricante. A detecção e quantificação viral será realizada utilizando-se o ensaio RT-qPCR ou qPCR no sistema 7500 Real Time PCR System(Marca Registrada) (Applied Biosystems, USA) tendo como alvo regiões específicas dos diferentes vírus estudados, de acordo com protocolos descritos previamente e validados no laboratório. A caracterização molecular será realizada através da amplificação parcial de regiões específicas do genoma viral, os amplicons resultantes serão purificados com o kit QIAquick PCR Purificação (QIAGEN, Valencia,CA) e o sequenciamento nucleotídico parcial será feito utilizando kit ABI Prism BigDye Terminator v3.1 (Marca Registrada) na Plataforma do Sequenciamento de DNA PDTIS /FIOCRUZ.

Bolsista: SARA NAZARE CARVALHO NEVES
Orientador(a): VICTOR FACCHINETTI LUZ
Resumo: A tuberculose (TB) ainda é um problema de saúde pública global, apesar dos esforços e recentes avanços na medicina e farmacologia. A Organização Mundial da Saúde estima que, em 2018, 1,5 milhões de pessoas morreram em todo o mundo devido à tuberculose, sendo urgente a busca por novos fármacos que possam oferecer mais eficácia, e menores efeitos adversos no tratamento da TB. Nesse contexto, vem aumentando o interesse na síntese de substâncias contendo o núcleo quinolínico, em especial após aprovação em 2012 do fármaco bedaquilina (TMC 207), uma diarilquinolina desenvolvida pela Johnson & Johnson e Tibotec. É importante destacar, também, que o núcleo quinolínico é o grupamento farmacofórico de diversas moléculas comercialmente disponíveis utilizadas no tratamento da malária e de infecções fúngicas e bacterianas, além de também estar presente em antiinflamatórios, imunossupressores e analgésicos. Nosso grupo de pesquisa possui vasta experiência na síntese de moléculas derivadas dos fármacos cloroquina e mefloquina, tendo identificado ao longo dos anos diversas oxazolidinonas, diaminas, aminoálcoois, hidrazonas e aminoácidos contendo o núcleo quinolínico com relevante atividade antimicobacteriana. Dessa forma, torna-se interessante a síntese e o aumento de escala de novos building-blocks quinolínicos, inéditos na literatura, com diferentes padrões de substituição, que possam ser utilizados pelo grupo de pesquisa não só na otimização de estruturas bioativas previamente identificadas, como também na busca por novos protótipos com potencial atividade contra a tuberculose.

Bolsista: VICTORIA BATISTA DE ALMEIDA
Orientador(a): Natalia Fintelman Rodrigues
Resumo: Os vírus influenza A e B são os principais responsáveis pelas infecções respiratórias agudas constituindo substancial causa de morbidade e mortalidade. Além das epidemias sazonais, o influenza A ainda pode causar pandemias, consequentemente apresenta grande impacto na saúde pública. Drogas anti-influenza são importantes para diminuir hospitalizações e óbitos por estes vírus, além de fazerem parte da preparação pandêmica. No entanto, cada vez que uma nova droga foi introduzida, também foram identificadas mutações de redução da sensibilidade no próprio ensaio clínico, o que suscita uma continua busca por novas moléculas capazes de inibir estas cepas resistentes. A identificação de drogas antivirais aprovadas clinicamente imbuídas de atividade anti-influenza poderiam reduzir a janela de tempo para o desenvolvimento pré-clínico. O objetivo deste projeto é avançar na caracterização in vitro do mecanismo de ação do daclatasvir, que tem como alvo inicial a NS5A do vírus da Hepatite C, contra o vírus influenza para endossar ensaios clínicos num futuro próximo. Neste contexto, um dos primeiros passos no estudo de uma droga é a avaliação da sua citotoxicidade e a análise do Daclatasvir em células MDCK gerou valor de CC50 de 32,6 µM, que corrobora outros dados publicados por nosso grupo para ensaios contra SARS-CoV-2.

Bolsista: PALOMA LEAL NOBRE
Orientador(a): Vladimir Costa Silva
Resumo: Em 2015, a Organização Mundial de Saúde (OMS) publicou um relatório alertando sobre o crescente aumento da resistência aos antimicrobianos no mundo1. De acordo com alerta publicado em 2017 pela OMS, existem 12 principais bactérias multirresistentes, que são divididas em três categorias de prioridade (crítica, alta ou média) que merecem atenção e necessitam urgentemente do desenvolvimento de novos antibióticos para combatê-las. No topo da lista (consideradas de prioridade crítica) estão as bactérias Gram negativas como, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa e membros da família Enterobacteriaceae resistentes aos carbapenêmicos uma das últimas opções de tratamento para as infecções relacionadas à assistência em saúde (IRAS) 2. A rápida dispersão de genes de resistência entre gêneros e espécies bacterianas, através de elementos genéticos móveis assim como a disseminação de clones de alto risco multirresistentes tornaram-se uma grande ameaça à saúde humana, devido à limitação de opções terapêuticas. O sequenciamento total do genoma (STG) tem se tornado uma chave poderosa e altamente atrativa para investigações epidemiológicas, pois permite acessar várias informações de forma rápida e eficiente3. Em sua concepção, a Vigilância Genômica tem como objetivo estabelecer identificação de doenças e situações prioritárias para a vigilância em saúde no país, incluindo a identificação e caracterização de mecanismos de resistência aos antimicrobianos, tuberculose, vírus respiratórios e outros patógenos com potencial de desencadear surtos e epidemias. Com a estratégia genômica poderemos obter, através de uma única metodologia, dados sobre os genes de resistência e virulência, além dos elementos genéticos móveis associados, como plasmídeos e transposons e os clones circulantes em hospitais do Piauí. A metodologia proposta permite o armazenamento permanente de todos os dados obtidos, possibilitando a realização de estudos prospectivos de longo prazo, e execução de análises mais robustas futuramente à medida que novas ferramentas venham a ser desenvolvidas, além da possibilidade de comparação entre resultados de estudos feitos em outros países. Assim, este projeto auxiliará na elucidação de surtos e disseminação das cepas multirresistentes, tornando-se um importante passo para o desenvolvimento de estratégias destinadas à prevenção da propagação destes patógenos em nosso meio, além de ampliar a base de dados genômicos brasileiro no que se refere a bactérias multirresistentes, servindo para o desenvolvimento de estudos futuros, inclusive para a busca de novos alvos terapêuticos.