Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 1

Bolsista: ANNA CAROLINA DE ARAUJO ALMEIDA
Orientador(a): Paulo Sergio D Andrea
Coorientador(a): CAMILA DOS SANTOS LUCIO
Resumo: O estado do Acre mantém cerca de 88% de seu território coberto por florestas, sendo também indicado como região prioritária para levantamentos biológicos. Se localiza na região das terras baixas da Amazônia ocidental, considerada “hotspot” para diversos grupos, por causa da alta diversidade e de endemismos. Grande parte desta biodiversidade é composta por pequenos roedores da subfamília Sigmodontinae, com aproximadamente 84 gêneros e 380 espécies, incluindo roedores do gênero Hylaeamys. Este gênero possui atualmente sete espécies distribuídas pelas florestas tropicais e subtropicais, com as espécies H. yunganus e H. perenensis encontradas no estado do Acre. Estudos preliminares do nosso grupo indicaram sororeatividade para hantavírus em Hylaeamys yunganus, além da infecção pela bactéria Bartonella spp. no estado do Acre, mostrando que este gênero possui importância no ciclo de zoonoses. O objetivo deste trabalho é identificar as linhagens e estabelecer as relações filogenéticas e biogeográficas das espécies de Hylaeamys do estado do Acre com dados cariotípicos e diversidade molecular, confirmando a identificação morfológica. Pretende-se ainda definir as áreas de ocorrência de cada espécie, considerando sua distribuição geográfica e os ambientes em que ocorrem. As amostras foram obtidas dos municípios de Senador Guiomard (Fazenda Experimental Catuaba), Marechal Thaumaturgo (Vila Triunfo), Rio Branco (Colégio Agrícola), Manoel Urbano (Parque Estadual do Chandless), Porto Acre (Reserva Florestal Humaitá), Xapuri (Seringal Cachoeira) e Brasiléia (Colônia Buriti) para o estado do Acre, e dos municípios de Sapezal e Utiariti para o estado de Mato Grosso. O DNA foi isolado a partir de tecido preservados em etanol. O gene citocromo b foi amplificado por PCR, purificado e sequenciado no sequenciador ABI 377. As sequências foram editadas e alinhadas, e a matriz de dados resultante foi utilizada para inferir uma filogenia de máxima verossimilhança, e para realizar as análises de rede. Até o momento foram analisadas 19 amostras, incluindo o isolamento, quantificação, amplificação do citocromo b por PCR, sequenciamento nucleotídico e análises filogenéticas. As análises preliminares a partir da amplificação do gene Citocromo b de 19 amostras apontaram a identificação de duas espécies de Hylaeamys (H. yunganus e H. perenensis) das amostras coletadas no estado do acre. As análises filogenéticas preliminares de máxima verossimilhança identificaram três clados. A espécie H. perenensis foi recuperada como irmã do clado composto por H. laticeps e H. megacephalus. Essas espécies foram recuperadas como irmãs do grande grupo composto pela espécie H. yunganus. A partir destes resultados está sendo possível compreender os padrões evolutivos e de distribuição das linhagens de Hylaeamys particularmente dos grupos taxonômicos hospedeiros de agentes etiológicos na região amazônica.

Bolsista: Caroline Espírito Santo Moreira Magalhães
Orientador(a): Flavia Martinez de Carvalho
Coorientador(a): ANA LUIZA MENEGUCI MOREIRA FRANCO
Resumo: A fenda oral (FO) é um grave problema de saúde pública, visto que requer um complexo tratamento multidisciplinar de longo prazo. A sua maioria não está relacionada a síndromes e possui etiologia complexa. A FL±FP (fenda labial com ou sem fenda palatina) é o tipo mais comum de FO com uma prevalência de 1 a 2 casos a cada 1.000 nascimentos. A identificação de genes contribuindo para o aumento do risco das FO tem sido um desafio da atualidade. Alterações estruturais maiores do genoma chamadas de variações do número de cópias (CNVs) são amplamente estudadas em indivíduos portadores de FO. Resultados preliminares de varredura ampla do genoma por microarranjos de genotipagem com marcadores SNP e CNV do nosso grupo em uma amostra de 30 famílias de uma população com alta frequência de FO identificaram 28 regiões CNV de novo - 5 das quais foram deleções (perdas não homogêneas) e 23 duplicações: 6 regiões contendo genes previamente associados com FO (GLI2, PKP1, MKX, PVRL1, CDH1 e TYMS) e 22 segmentos genômicos sem histórico prévio de associação com FO, como regiões candidatas a FL±FP não sindrômica. A etapa seguinte foi o mapeamento genético fino da região 18p11.32 que contém o gene TYMS,por ter sido o único locus de deleção com gene já descrito na literatura como candidato a FO. O TYMS é um dos genes envolvidos do ciclo do folato. Identificamos 10 variantes em TYMS e em outros dois genes importantes do ciclo do folato (MTHFR e MTHFD1) que foram genotipadas por meio de PCR em tempo real em 336 indivíduos pertencentes à 132 famílias da mesma região. Em seguida realizamos as análises estatísticas pertinentes, dentre elas: o teste de desequilíbrio de transmissão, a análise de haplótipos e a interação gene x gene. Estes resultados já foram submetidos a um periódico internacional indexado e em breve serão publicados. Durante essa fase do projeto, após criteriosa revisão de literatura, ampliamos o interesse pelo ciclo do folato através dos genes NOS3, CBS e BHMT, que interagem com TYMS e foram previamente associados à FO em população hispânica dos EUA. Esses três genes serão o foco deste sub-projeto de iniciação científica. O objetivo geral do sub-projeto é executar mais uma etapa do projeto maior no qual está inserido, contribuindo para o entendimento dos principais fatores genéticos na causalidade das fendas orais em regiões abrangidas pelo ECLAMC, a partir da identificação de regiões candidatas. Como objetivos específicos deste sub-projeto destaca-se a realização do mapeamento genético fino da região dos três genes alvo do ciclo do folato - NOS3, CBS e BHMT com a finalidade de sugerir novos marcadores genéticos candidatos a FO que possam ser replicados em uma população familiar mais ampla. Além disso, planeja-se realizar estudo de associação entre o polimorfismos rs2373929 no gene NOS3,pré-selecionado com base na literatura, em uma amostra composta por 132 famílias da mesma população com alta frequência de FL±FP. Para cumprir os objetivos específicos deste sub-projeto PIBIC da melhor forma possível, prosseguiremos com uma parte remota em virtude da pandemia da Covid-19 e uma parte presencial, quando possível. Este subprojeto foi ajustado de forma que, se houver impossibilidade de retorno da bolsista PIBIC às atividades presenciais nos 12 meses, o desenvolvimento do subprojeto e a capacitação da bolsista PIBIC não ficarão comprometidos. Visamos resultados que possam ser futuramente aplicados para a realidade do nosso país no que se refere ao aprimoramento do aconselhamento genético de famílias portadoras de fenda oral. Cronograma de atividades: Duração de 12 meses. Ver arquivo subprojeto completo em anexo na plataforma PIBIC.

Bolsista: GABRIELLA ALVES DE CERQUEIRA
Orientador(a): PHILIP NOEL SUFFYS
Coorientador(a): DANDREA DRIELY DE MELO FERRARI
Resumo: Legionella pneumophila é uma bactéria aeróbia, gram-negativa, fastidiosa, formadora de biofilmes que é encontrada em ambientes aquáticos naturais, como lagos e rios, ou ambientes artificias, como redes de abastecimento e distribuição de água. Essa bactéria está essencialmente associada a duas doenças: Doença dos Legionários (DL), uma pneumonia que pode ser fatal em até 40% dos casos, e a Febre de Pontiac, um resfriado autolimitado. A contaminação ocorre pela inalação de gotículas contaminadas, portanto, é imprescindível a vigilância e a manutenção da qualidade de água dos sistemas artificiais, especialmente nos hospitais devido a exposição de pessoas imunossuprimidas. O método padrão e internacionalmente difundido para a identificação de Legionella spp. presente na água é a partir do isolamento em meio de cultura específico (ISO 11371), enquanto a técnica de genotipagem padrão é a Sequence-based Typing (SBT) que utiliza sete alelos para identificar a Sequence Type (ST) de cada isolado. Assim, este projeto tem como objetivo analisar a presença de Legionella spp. em amostras de água com foco nas amostras provenientes das redes de abastecimento hospitalar, para realizar a identificação da espécie L. pneumophila através do gene mip (macrophage infectivity potentiator) bem como o perfil molecular dos isolados através da técnica SBT. Métodos: serão coletadas amostras de água de grandes edifícios e também do sistema de abastecimento de água de hospitais com colaborações pré-estabelecidas. As amostras serão inoculadas em meio BCYE e incubadas a 35º C em ambiente rico em CO2 para averiguar a presença de Legionella spp. As culturas positivas serão submetidas a extração de DNA seguida pela PCR para identificação da espécie L. pneumophila. Por fim, os isolados de L. pneumophila serão processados de acordo com a técnica SBT para a identificação do perfil molecular das cepas.

Bolsista: MARIA LAURA MENDES DOS SANTOS LEAL
Orientador(a): ELAINE FERREIRA DO NASCIMENTO
Coorientador(a): Não informado
Resumo: A sexualidade ainda se constitui em uma interdição, assim conversar sobre sexo e sexualidade na adolescência é fundamental, uma vez que é o período ou fase em que a atividade sexual se inicia. No entanto, é uma prática que vem culturalmente se iniciando de forma cada vez mais precoce no Brasil, e que embora seja prazeroso e de natureza própria dos seres vivos, o ato sexual requer atenção e cuidados, pois vários fatores podem influenciar de modo adverso na saúde física e reprodutiva dos adolescentes e jovens. Objetivo: Analisar o conhecimento de adolescentes e jovens sobre questões relacionadas ao sexo, com o intuito de investigar os seus comportamentos referentes às temáticas Sexualidades, Aborto, Infecções Sexualmente Transmissíveis (ISTs), Métodos Contraceptivos, Gravidez não Planejada, Orientação Sexual, Conversas sobre Sexo e Sexualidade, Gênero e Violência nas relações afetivo sexuais. Metodologia: O tipo de estudo foi descritivo, exploratório e interpretativo, com abordagem qualitativa com 30 alunos do Centro Estadual de Educação Profissional José Pacífico de Moura Neto, em Teresina, PI, com faixa etária compreendida entre 14 e 24 anos de idade, no período de agosto de 2020 a maio de 2021. Os dados foram coletados por meio das técnicas de grupo focal e entrevistas semiestruturadas abordando questões relacionadas a conversas sobre sexo e sexualidade. Resultados esperados: Espera-se, com os dados obtidos, caracterizar o perfil sociodemográfico dos adolescentes e jovens pesquisados, identificando o nível de conhecimento sobre temas relacionados à sexualidade e gênero com destaque para a conversa como uma estratégia de socialização e sociabilidade sexual e o papel da escola na geração da informação e da sua qualidade.

Bolsista: FELIPE CARNEIRO DE SOUZA
Orientador(a): CLEBER NASCIMENTO DO CARMO
Coorientador(a): Não informado
Resumo: O envelhecimento populacional tem ocorrido de maneira acelerada, sobretudo nos países em desenvolvimento. E com esse processo de mudança do perfil demográfico surge um grande desafio para esses países, pois precisam inserir o tema do envelhecimento populacional na formulação de políticas públicas e o planejamento de soluções de reorganização social e de saúde suficientes para atender as necessidades dessa nova realidade. Em paralelo ao processo de transição demográfica, o padrão de adoecimento e morte da população também vem sendo alterado. O perfil epidemiológico, resultado de uma série complexa de mudanças inter-relacionadas no comportamento de saúde e doença que ocorrem nas populações ao longo do tempo, são repercussões de um conjunto de transformações sociais, econômicas e principalmente demográficas Indivíduos e grupos sociais apresentam variabilidade quanto a muitas características entre si, o que não implica, necessariamente, em desigualdades nos processos de saúde e doença. As desigualdades referem-se às diferenças perceptíveis e mensuráveis nas condições de saúde ou no acesso aos cuidados em saúde. Quando consideradas injustas ou decorrentes de alguma forma de injustiça, são então denominadas iniquidades (Barata, 2012). As desigualdades são um fenômeno global e podem estar presentes entre os diversos países e mesmo dentro dos países, abrangendo dimensões culturais, sociais e econômicas, apresentando diferenciações nos acessos à informação, saúde e possibilidades de práticas preventivas de doenças e agravos (Barreto, 2017). O câncer é uma doença multicausal e sua relação com o envelhecimento populacional é conhecida (Pilleron et al., 2019). Globalmente, as transições demográfica e epidemiológica sinalizam para a importância crescente do câncer nas próximas décadas. Tendo em vista que o processo de adoecimento apresenta diferenciações, sejam individuais e contextuais, é relevante que as análises sejam baseadas no conhecimento teórico acerca das desigualdades em saúde. Analisar os determinantes sociais que perpassam os óbitos por neoplasias em idosos e fatores sociodemográficos associados possibilitaria analisar os contextos de vulnerabilidade aos quais estão expostos. O presente estudo irá caracterizar o perfil de mortalidade por neoplasias da população idosa do Brasil, seus fatores contextuais associados e acompanhar mudanças no padrão epidemiológico no período de 2011 a 2020 em indivíduos com idade de 60 anos ou mais. Trata-se de um estudo ecológico, de caráter descritivo e analítico, a partir de dados secundários de mortalidade da população idosa, no período de 2011 a 2020. A unidade de análise espacial será representada pelas Unidades da Federação e os anos do período do estudo, a unidade temporal considerada. São elegíveis para este estudo todos os indivíduos de 60 anos ou mais. A fonte de dados será o Sistema de Informação sobre Mortalidade (SIM/SUS), a partir das declarações de óbitos. Além disso, usaremos dados de população obtidos a partir de consulta às bases de dados do censo demográfico, projeções e estimativas demográficas do IBGE para o período de estudo. Variáveis contextuais serão obtidas a partir de dados do Programa das Nações Unidas para o Desenvolvimento (PNUD), do Instituto de Pesquisa Econômica Aplicada (IPEA) e do Ministério da Saúde. Como variáveis de contexto, pretendemos considerar: Índice de Desenvolvimento Humano Municipal; Índice de Gini; Índice de Vulnerabilidade Social e Taxa de analfabetismo. Utilizaremos os valores mais recentes disponíveis, considerando os anos do período do estudo, sendo dados de 2017 referentes à Pesquisa Nacional por Amostra de Domicílios (PNAD) para o IDH-M, Índice de Gini e taxa de analfabetismo, e dados referentes a 2019 para o Índice de Vulnerabilidade Social. Para o cálculo das taxas de mortalidade, utilizaremos os números de óbitos disponíveis no SIM e os dados populacionais pelo censo demográfico de 2010, do Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística (IBGE). Para análise dos dados, teremos como variáveis desfechos, as taxas de mortalidade pelas diferentes neoplasias da população idosa residente nas UF do Brasil. Inicialmente, faremos uma análise descritiva das variáveis do estudo, por meio da obtenção de medidas sumárias e visualizações gráficas, a fim de organizar e descrever características do conjunto de dados. Para as variáveis categóricas calcularemos as frequências absolutas e relativas; para os indicadores contextuais obteremos os valores mínimo, máximo, primeiro e terceiro quartis, mediana, média e desvio padrão. Para estimar a evolução da série temporal, utilizaremos modelos de regressão linear generalizada de Prais-Winsten, relacionando as taxas de mortalidade (Y) com o tempo em anos (X). Para essas análises, a variável tempo (em anos) será centralizada para evitar autocorrelação dos dados, por serem ordenados. Para cada modelo analisado o valor do coeficiente de determinação dado pela estatística R-square (R²) e o nível de significância estatística serão consultados (Antunes; Cardoso, 2015). Por fim, realizaremos uma análise de cluster dos dados estaduais de mortalidade. O objetivo é identificar padrões geográficos e demográficos dos dados de mortalidade em idosos e contribuir para a formulação de políticas públicas mais eficientes e direcionadas para essa população. Para as análises do estudo serão considerados: nível de significância estatística de 5% e utilizado apoio computacional do software Microsoft Excel para tabulações e cálculos; software R versão 4.2.3 para estimação dos modelos de regressão. Como se trata de dados secundários de domínio público, a análise e aprovação de comitê de ética são dispensadas.

Bolsista: RAWANE BORGES LOPES
Orientador(a): Sandra Grossi Gava
Coorientador(a): Marina de Moraes Mourao
Resumo: A esquistossomose é uma doença endêmica negligenciada causada pelo parasito Schistosoma mansoni e que representa grande problema de saúde pública. A ineficácia dos programas de controle em áreas de baixa prevalência e a ausência de medicamentos alternativos de alta eficácia tornam imprescindível o desenvolvimento de uma nova droga anti-Schistosoma. Dada a complexidade do ciclo de vida do parasito, apresentando fases de vida livre e parasitárias, ocorrem importantes adaptações na biologia promovendo encontro e reconhecimento dos hospedeiros, e interações necessárias para o estabelecimento da infecção. Estas adaptações são coordenadas por regulação na expressão gênica incluindo regulações pós-transcricionais, sendo essas exemplificadas por modificações epigenéticas, podendo levar ao aumento de variabilidade fenotípica e influenciar no estabelecimento da doença. Modificações epigenéticas se dão por meio de metilação do DNA e RNA, alterações nas proteínas histonas que compactam o DNA e/ou mediação por RNAs não-codificantes. Enzimas modificadoras de histonas (HMEs) são responsáveis por executar alterações nas histonas de modo a causarem mudança na expressão do epigenótipo. Estudos do grupo de pesquisa em Helmintologia e Malacologia Médica (HMM) demonstraram que inibidores da enzima Lisina Demetilase 1 (SmLSD1) impedem a motilidade, suprimem a produção de ovos e afetam o tegumento e estruturas de organelas celulares de S. mansoni, culminando com a morte de esquistossômulos e vermes adultos. Além disso, o silenciamento de SmLSD1 por RNA de interferência (RNAi) em vermes adultos suprime a produção de ovos. Dada a importância da compreensão das bases moleculares do parasito para o estabelecimento e manutenção da infecção, este projeto busca entender a função da enzima SmLSD1 e os mecanismos de regulação da expressão pós-transcricional promovida por ela na fase larval intramamífero do verme, a fim de sugerir alvos terapêuticos mais específicos e elucidar formas de prevenção da infecção. Para isso, culturas de esquistossômulos serão monitoradas diariamente, por 7 dias, por microscopia para verificação de alterações fenotípicas decorrentes do silenciamento de Smlsd1. Durante este período, será realizada a análise dos níveis de transcritos de Smlsd1 por RT-qPCR. Após a confirmação do silenciamento, para a realização do ChIP-Seq, será feita a padronização dos anticorpos específicos, produzidos em coelhos e adquiridos comercialmente, por meio de ensaios de Western blot, buscando estudar as metilações nas histonas H3K4me1 e H3K4me2. Adicionalmente, será feita a verificação da presença de DNA contaminante por reação de PCR com iniciadores que amplificam o gene gapdh de coelho. Após a padronização dos anticorpos, será realizada a imunoprecipitação da cromatina. Na sequência, a cromatina imunoprecipitada será validada por ChIP-qPCR, buscando determinar se o DNA precipitado está enriquecido em sequências de DNA associadas à metilação alvo. Por fim, o DNA obtido será sequenciado na plataforma Illumina HiSeq 2500 e os dados serão analisados buscando desvendar os mecanismos de regulação da expressão pela enzima SmLSD1. Até o momento foi feita a reação de PCR convencional para a verificação da presença de DNA de coelho contaminante nos anticorpos H3K4me1 e H3K4me2. E, por meio da revelação no gel de agarose, não foi visualizada a presença de DNA contaminante. Por ensaios de Western blot, verificou-se que os anticorpos foram capazes de reconhecer os alvos H3K4me1 e H3K4me2 de forma específica. E, atualmente, está em andamento a fase de padronização do protocolo de imunoprecipitação da cromatina. Estão sendo testados diversos parâmetros, como: (1) a quantidade material necessária para as extrações; (2) método de lise dos parasitos; (3) diferentes temperaturas e tempos de digestão a fim de avaliar o melhor desempenho da digestão com a enzima MNase; e (4) métodos para a confirmação da extração da cromatina e padrão de digestão com a MNase.