Associação de microRNAs séricos com parâmetros clínicos e desfechos na COVID-19voltar para a edição atual

Considerando o cenário atual do COVID-19, com surgimento de variantes preocupantes (VOCs) de SARS-CoV-2, que alertam para novas ondas de transmissão e potencial aumento da patogenicidade, destacamos a importancia de continuar pesquisando as características basais e os desfechos desta doença para viabilizar o desenvolvimento de tratamentos e vacinas eficazes. Portanto, estudar perfis de expressão gênica pode ser uma alternativa para a melhor compreensão dos processos biológicos envolvidos na COVID-19, buscando entender as possíveis diferenças entre pacientes que resolvem a infecção de forma rápida e eficaz, e aqueles que desenvolvem quadros clínicos mais graves e, eventualmente, evoluem a óbito. MicroRNAs (miRNAs) são moléculas de RNA fita simples que não codificam proteínas, que estão relacionadas à regulação gênica a nível pós-transcricional, provocando a degradação do RNA mensageiro (mRNA) ou inibindo a tradução de proteínas. A alta estabilidade dessas moléculas em diversos tecidos, incluindo plasma e soro, facilita sua eficiente utilização como biomarcadores não invasivos para uma variedade de doenças. Desta forma, os miRNAs podem ser potenciais biomarcadores pra COVID-19, visto que há a possibilidade de monitorar a progressão clínica da COVID-19, auxiliando na estratégia de manejo e prognóstico de cada indivíduo. O Objetivo principal deste estudo é avaliar a associação de miRNAs séricos com parâmetros clínicos e desfechos na COVID-19, a fim de identificar seu potencial como biomarcadores não invasivos de gravidade e mortalidade na COVID-19. Para isso, serão incluídos no estudo indivíduos internados no Hospital Universitário Clementino Fraga Filho – UFRJ (HUCFF) com infecção por SARS-CoV-2 confirmada laboratorialmente, que foram classificados em não grave (n=67) e grave (n=39), para comparações de dados clínicos, sociodemográficos e laboratoriais. Indivíduos sem COVID-19 doadores de sangue, provenientes do HEMORIO serão incluídos no estudo como grupo-controle. Todos os pacientes foram acompanhados durante o período de internação até o desfecho (alta ou óbito) e os dados sociodemográficos, de evolução clínica e laboratorial foram obtidos por meio de consulta aos prontuários. Será realizada a padronização das técnicas de detecção de miRNA em soro, utilizando os controles exógenos (cel-mir-39 e mir-54-5p) e o controle endógeno (U6) para validar a padronização. Inicialmente o RNA total será extraído com o kit mirVana PARIS RNA, porém serão avaliados diferentes volumes de eluição final. Posteriormente, a quantificação e avaliação da qualidade do RNA extraído será feita por espectrofotômetro. Em seguida, será realizada a síntese de cDNA utilizando-se o kit Taqman miRNA Reverse Transcription (Applied Biosystem) e miRNA-specific (steam loop RT primers) para os controles (cel-mir-39, mir-54-5p e U6). Para avaliação da expressão de miRNAs dos controles exogeno e endógeno, as reações de RT-qPCR serão realizadas em duplicata utilizando Taqman Universal PCR Master Mix e primers especificos. A partir dos resultados da padronização, será realizada a validação da expressão gênica por RT-qPCR, de miRNAs pre-selecionados com perfil de expressão significativamente diferente entre pools de amostras constituídos por COVID-19 grave e não grave. Os alvos de miRNAs que tiverem sua expressão gênica validada, serão avaliados posteriormente em todos os indivíduos do estudo classificados com COVID-19 grave, COVID-19 não grave, e negativos para SARS-CoV-2, a fim de investigar seus potenciais como biomarcadores. Para a expressão gênica de alvos individuais de miRNAs será utilizado o sistema TaqMan de RT-qPCR, no equipamento Quantstudio 3, na Plataforma de PCR em Tempo Real da Fiocruz, com o método do Ct comparativo (ddCt). Com esse estudo pretende-se identificar biomarcadores de miRNA associados à diferentes manifestações clínicas e desfechos, que podem ser futuramente aplicados em testes prognósticos e investigados como potenciais alvos terapêuticos.